Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 7:03 min. • April 28th, 2025
Pegue as células da neuroesfera em um tampão contendo detergentes, inibidores de cálcio e protease.
O detergente permeia as células, enquanto o inibidor inativa as proteases para preservar a proteína-alvo ligada à cromatina.
Adicione nuclease e incube. A nuclease usa cálcio para digerir a cromatina.
Adicione um tampão contendo EDTA que quelata o cálcio, inativando a nuclease.
Adicione tampão de lise para lisar as células, liberando a cromatina.
Centrifugue e colete o sobrenadante.
Adicione anticorpos específicos para a proteína alvo e incube com rotação. Centrifugue e remova o sobrenadante.
Introduza esferas magnéticas direcionadas ao anticorpo e incube com rotação.
Adicione tampão de lise para separar o DNA não especificamente ligado.
Capture magneticamente as contas e remova o sobrenadante.
Adicione um tampão com alto teor de sal para separar proteínas não especificamente ligadas.
Capture magneticamente as contas e remova o sobrenadante.
Adicione um tampão de estabilização, capture magneticamente os grânulos e remova os contaminantes.
Ressuspenda em um tampão de proteinase-K para digerir as proteínas, liberando o DNA.
Uma vez que as neuroesferas são colhidas, centrifugue 1 vezes 10 para as 6
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