Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:52 min. • May 29th, 2025
Comece configurando a luz de excitação para o microscópio de dois fótons.
Pegue um filhote de camundongo transgênico anestesiado com uma janela circular de imagem de vidro e uma placa de cabeça implantada em seu crânio.
Os neurônios expressam proteínas fluorescentes vermelhas para facilitar a imagem.
Limpe a janela de imagem de vidro e prenda o filhote no estágio de imagem de dois fótons.
Alinhe a janela de imagem com a objetiva do microscópio ajustando a cabeça do filhote.
Use uma almofada de aquecimento para manter a temperatura corporal do filhote.
Ajuste a taxa de fluxo anestésico.
Aplique uma gota de água na lamínula e, em seguida, abaixe a lente objetiva do microscópio.
A microscopia de dois fótons usa dois fótons de luz para ativar proteínas fluorescentes, permitindo imagens neuronais detalhadas com ruído de fundo e fotobranqueamento mínimos.
Capture imagens dos neurônios em várias profundidades para visualizar sua estrutura
Por fim, empilhe as imagens para gerar uma representação tridimensional do neurônio, incluindo suas projeções neuronais, para estudar as mudanças morfológicas relacionadas ao crescimento.
Para começar a criar imagens, primeiro defina o comprimento de onda do laser
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