Coleta de saliva e medição de cortisol salivar e alfa-amilase em idosos residentes em comunidades frágeis por meio de cuidadores familiares

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar a coleta e análise de medidas biológicas salivares em uma população clinicamente frágil e residente na comunidade. Isso é feito primeiro montando os suprimentos necessários para coleta de saliva. O segundo passo é providenciar a visita domiciliar, fornecer os suprimentos e demonstrar os procedimentos de coleta de saliva ao cuidador.

Em seguida, forneça instruções por escrito e responda a quaisquer perguntas. A etapa final é devolver as amostras de saliva ao laboratório e realizar os procedimentos de ensaio. Em última análise, o protocolo é projetado para medir o perfil diurno das concentrações salivares de alfa-amilase e cortisol salivar em pacientes clinicamente frágeis residentes na comunidade.

Este método responderá a questões-chave nos campos da pesquisa biocomportamental para melhorar nossa compreensão da sensibilidade biológica e suscetibilidade em torno de processos relacionados ao estresse. Antes de agendar uma visita domiciliar ao consentido, os participantes reúnem e montam os suprimentos necessários, que incluem quatro cotonetes psicométricos infantis, quatro tubos de armazenamento de cotonetes, quatro tampas de tubos codificadas por cores, cinco etiquetas brancas, um saco plástico Ziploc, uma folha de instruções de coleta de saliva, cinco luvas nitro e uma caixa de armazenamento. Usando uma mão com luvas de nitro, coloque quatro cotonetes infantis Salomé nos quatro tubos de armazenamento de cotonetes e cubra-os com tampas amarelas, laranja, azuis e roxas, respectivamente.

Em seguida, coloque uma etiqueta em cada tubo de armazenamento para indicar a hora da coleta. Coloque os quatro tubos de armazenamento tampados, a folha de instruções de coleta de saliva e quatro luvas nitro no saco Ziploc e etiquete-o com o ID do assunto e a data da coleta. Seguindo esse cronograma, uma breve visita domiciliar aos indivíduos previamente consentidos e no dia anterior à coleta de saliva.

Depois de chegar à casa do sujeito, forneça o saco plástico de suprimentos e a folha de instruções ao coletor de saliva. Revise a folha de instruções e enfatize a necessidade de registrar os horários de início e término da coleta de saliva, destacando as instruções escritas. Registre o nome, dosagem e cronograma de todos os medicamentos prescritos e de venda livre tomados pelo participante nas últimas 48 horas.

Instrua o coletor de saliva ou SC a aplicar uma luva nitro na mão dominante. Diga ao participante para inclinar a cabeça para a frente para permitir que a saliva se acumule no chão da boca. Em seguida, instrua o SC a destampar o tubo de armazenamento do swab e recuperar o swab oral.

Instrua o SC a colocar o swab oral sob a frente da língua do idoso para absorver cerca de três gotas da saliva acumulada e manter o swab oral no lugar por dois minutos para garantir que esteja saturado, faça com que o SC devolva o swab oral saturado de volta à cesta do tubo de armazenamento do swab, e recoloque a tampa. Em seguida, peça ao SC que coloque imediatamente o tubo na caixa de armazenamento e coloque-o em um freezer. Depois de descartar a luva na lixeira, aconselhe o SC a registrar os horários de início e término na folha de instruções de saliva.

Em seguida, informe ao SC que eles coletarão amostras de saliva em quatro ocasiões no dia seguinte, especificamente ao acordar 30 minutos após o despertar no meio da manhã e à noite, peça ao SC que diga ao paciente para enxaguar a boca com água 10 minutos antes da coleta de saliva. Após a coleta de saliva, descarte as amostras visivelmente contaminadas com sangue. Instrua o SC que as amostras de saliva devem permanecer no freezer até serem recuperadas pela equipe do estudo.

Ligue para a equipe do estudo para confirmar que eles agendarão uma hora e um dia para recuperar as amostras congeladas e trazer novos suprimentos de coleta de saliva para qualquer data futura de coleta. Depois que as amostras forem removidas do freezer do sujeito, mantenha-as congeladas durante o transporte para o laboratório, colocando-as em um saco de freezer isolado. Ao chegar ao laboratório, substitua a etiqueta branca em cada tubo por um código de barras sequencial.

Verifique se o código de barras sequencial corresponde ao ID do assunto, data de coleta e hora de coleta. Em seguida, retorne as amostras de saliva a um freezer de 20 graus Celsius negativos para precipitar a mucina. Depois de descongelar as amostras de saliva, centrifugue as amostras a 1500 vezes a gravidade por 15 minutos.

Assim que os reagentes do kit de ensaio salivar estiverem em temperatura ambiente por aproximadamente 90 minutos, prepare o tampão de lavagem seguindo as instruções do kit, pipetar 25 microlitros dos controles padrão e amostras nos poços apropriados de uma placa de 96 poços. Após esta pipeta, 200 microlitros de uma solução conjugada enzimática previamente preparada nos poços. Misturar as amostras colocando a placa num rotador durante cinco minutos a 500 RPM.

Depois de incubar as amostras em temperatura ambiente por 55 minutos, lave e seque a placa com tampão de lavagem quatro vezes. Em seguida, adicione 200 microlitros de tetraetil benzina ou solução TMB. Uma vez que as amostras tenham sido misturadas por cinco minutos.

A 500 RPM, cubra a placa com papel alumínio e incube-a no escuro por mais 25 minutos. Quando terminar, adicione 50 microlitros de solução de parada e misture as amostras por três minutos a 500 RPM. Dentro de 10 minutos após a adição da solução de parada, limpe o fundo da placa e leia a placa com um leitor de placas a 450 nanômetros.

Em seguida, calcule a concentração de cortisol usando a densidade óptica média. Subtraia a densidade óptica média em poços de ligação não específicos da densidade óptica média em poços de controle e amostra padrão zero. Por fim, estimar as concentrações dos controles e incógnitas utilizando softwares capazes de logística.

Os procedimentos descritos são projetados para medir o perfil diurno das concentrações salivares, alfa-amilase e cortisol salivar. Como os resultados do cortisol demonstraram ser positivamente distorcidos, sugere-se usar a transformação logarítmica dos dados para produzir uma distribuição normal. Várias estratégias estão disponíveis para modelar diferenças nos ritmos diurnos de cortisol e alfa amilase.

A primeira estratégia é traçar a mudança diurna da alfa-amilase ou cortisol entre a vigília e 30 minutos após a vigília. A segunda estratégia é traçar a concentração total de cortisol ou alfa-amilase ao longo de um dia. Os parâmetros resumidos resultantes podem ser agrupados em duas categorias gerais, a medida da magnitude da resposta ou as medidas do padrão de resposta ao longo do tempo.

A modelagem da curva de crescimento pode ser útil para estudos nos quais várias amostras são coletadas em indivíduos ao longo do dia. Uma curva de crescimento pode ser ajustada para permitir diferenças individuais no ciclo diurno, adicionando preditores no nível individual ou de medição. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como coletar saliva e como ensinar os cuidadores a coletar saliva de forma médica para nossos idosos em casa, e você deve ter uma boa compreensão de como conduzir análises laboratoriais de analitos salivares que são viáveis, têm alta conformidade e produzem amostras de qualidade.