Modelo murino de imagem não invasivo para detectar e monitorar o cancro do ovário Recorrência

Descrevemos uma plataforma de imagem animal não invasiva que permite a detecção, quantificação e monitoramento do crescimento e recorrência do câncer de ovário. Este modelo de xenoenxerto intraperitoneal mimetiza o perfil clínico de pacientes com câncer de ovário.

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo de xenoenxerto de câncer de ovário intraperitoneal que mimetize o perfil clínico observado em pacientes com câncer de ovário. Isso é obtido por injeção intrauterina de células-tronco de câncer de ovário marcadas com fluorescência mCherry em camundongos nus. Em seguida, o estabelecimento da progressão do tumor tumoral e a resposta à terapia são determinados medindo a fluorescência como um substituto para a carga tumoral.

Isso permite o monitoramento em tempo real da progressão do tumor ou da resposta ao tratamento sem a necessidade de sacrificar os camundongos. O modelo que mostramos aqui. B recapitula o perfil clínico observado em pacientes com câncer de ovário e, portanto, nos permite não apenas estudar a biologia da doença, mas também identificar novas terapias, especialmente para câncer de ovário recorrente.

O modelo nos permite monitorar a progressão do tumor para determinar em tempo real se eles respondem à quimioterapia e também para determinar se a doença se repetiria se a quimioterapia fosse interrompida. Para iniciar este procedimento, anestesiar um camundongo nu tímico de sete a oito semanas de idade com 2% de flúor. Em seguida, verifique se ele está completamente anestesiado beliscando a almofada do pé.

Em seguida, coloque o animal do lado direito sobre ele, gaze estéril com a cabeça afastada do experimentador. Aplique pomada em ambos os olhos para evitar o ressecamento durante a anestesia depois. Insira rapidamente a cabeça do animal em um sistema de cone nasal conectado a um vaporizador de isoflurano.

Desinfete o lado direito do abdômen com compressas com álcool, seguidas de iodo. Em seguida, coloque o campo cirúrgico estéril sobre ele usando uma tesoura cirúrgica estéril e uma pinça. Faça uma incisão na pele de um a dois centímetros no quadrante inferior esquerdo do mouse.

Depois disso, levante o músculo e faça uma incisão para alcançar o peritônio. Em seguida, disseque o músculo oblíquo para expor a cavidade abdominal. Em seguida, localize o corno uterino esquerdo usando uma pinça hemostática estéril, tanto o lado anterior quanto o posterior do chifre.

Coloque a pinça anterior logo abaixo da trompa de Falópio e a pinça posterior logo acima do colo do útero. Neste ponto, peça ao segundo experimentador. Injete a suspensão celular colocando as células contendo a agulha em um ângulo de 45 graus perpendicular ao chifre.

Em seguida, injete lentamente 50 microlitros de suspensão celular no lúmen do corno uterino. Em seguida, solte o grampo anterior seguido pelo grampo posterior. Depois disso, coloque o corno uterino de volta na cavidade abdominal.

Feche o peritônio usando uma sutura absorvível sintética. Em seguida, feche a pele usando um adesivo de tecido. Quando terminar, remova o mouse do cone do nariz e coloque-o de volta em sua gaiola.

Certifique-se de que o animal esteja acordado e ativo antes de deixá-lo sem vigilância. Forneça ibuprofeno na água potável nas primeiras 48 horas após a cirurgia. Agora abra o software de imagem molecular e, em seguida, abra o software Mars Capture.

Este módulo fornece controle coordenado das configurações de captura de Marte, aproveitando os recursos de captura e análise dos sistemas de imagem. Em seguida, insira os valores de captura predeterminados. Em seguida, salve os parâmetros como arquivos de sessão individuais.

Em seguida, crie um protocolo de sequência de rotação selecionando o botão criar protocolos de edição Na janela de aquisição da interface do sistema, selecione a sessão fluorescente salva anteriormente file e salve como etapa um. Em seguida, selecione o arquivo de sessão de raio-x correspondente e salve como etapa dois. Com a etapa um selecionada.

Utilize a série de rotação definida no menu pop-up antes da captura de imagem para definir o intervalo de ângulo inicial e o incremento pretendidos. Para garantir a visualização perfeita dos recursos, os valores específicos incluem um ângulo inicial de menos 180 graus, um intervalo de 375 graus e um incremento de 15 graus. Salve o protocolo e clique no botão concluído para inicializar o Mars.

Em seguida, inicie o alinhamento selecionando o botão de visualização no menu de aquisição para abrir a guia do rotador, use a configuração de captura de fluorescência conforme especificado para a imagem M cereja. Mantenha a porta aberta durante a visualização para acelerar o posicionamento, o que também permite a inspeção visual do posicionamento do mouse durante o procedimento de alinhamento. Em seguida, selecione a opção carregar mouse e prossiga com a série de menus de posicionamento.

Certifique-se de que a extremidade tubular do cone dobrável do nariz esteja no recesso do cone do nariz. Em seguida, coloque o camundongo anestesiado na orientação prona com a cabeça no cone do nariz. Comece a calibração na posição de zero grau com o lado ventral do animal voltado para baixo.

Use os dois botões do sistema de rotação para posicionar o animal de forma que ele apareça centralizado na janela de visualização. Repita o processo conforme solicitado para as posições menos 180, menos 90 mais 90 e mais 180 graus e clique em concluído. Aqui está um exemplo de um filme gerado a partir das imagens adquiridas.

Esta figura mostra a correlação entre a carga tumoral intraperitoneal e a imagem de sobreposição de raios X de fluorescência. Cerca de 32 dias após a injeção de células de câncer de ovário F duas M cereja, a imagem 2D foi realizada e os camundongos foram sacrificados para correlacionar a imagem adquirida com a carga tumoral real. E aqui são mostrados os conjuntos de dados de rotação que permitem imagens multiangulares e a detecção de tumores em camundongos controlados, tratados com paclitaxel e recorrentes.

A imagem de um único mouse por painel é mostrada à medida que ele é girado usando o sistema de Marte. Observe que, mesmo em camundongos de controle com carga tumoral significativa, o tamanho do tumor pode ser subestimado, dependendo do ângulo de onde a imagem foi tirada. Depois de assistir a este vídeo, você poderá estabelecer um modelo de xenoenxerto de câncer de ovário intraperitoneal usando a via intrauterina, bem como realizar imagens de animais vivos usando um sistema de rotação multimodal.