Name: Ex Vivo resposta ao tratamento de tumores primários e / ou Associated Metástases para pré-clínica e clínica de Desenvolvimento Therapeutics (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Aprenda a técnica ex vivo de resposta a fármacos para avaliar eficácia terapêutica em tecidos tumorais preservando o microambiente. Este método permite determinar IC50, efeitos off-target e mecanismos de resistência em amostras clínicas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Os autores gostariam de agradecer à Equipe de Serviço de Aquisição de Tecidos (TPS) do MSKCC, especificamente, Maria Corazon Mariano, Priscilla McNeil, Anas Idelbi, Daniel Navarrete e Katrina Allen, em todos os seus esforços na busca bem-sucedida deste projeto e financiamento das seguintes fontes: 5 R21 CA158609-02 e a Conquer Cancer Foundation e a Breast Cancer Research Foundation. Além disso, os autores gostariam de agradecer a Eric Cottington PhD, vice-presidente do Escritório de Pesquisa e Administração de Projetos, do Escritório de Desenvolvimento de Tecnologia, Divulgação e Conformidade de Pesquisa e Suporte a Sistemas de Informação RTM, pelo apoio à submissão deste manuscrito.

NOTA: colheita de tecidos do paciente, autorizado por conselho de revisão institucional (IRB) -aprovado Biospecimen e Protocolos Clínicos (números de protocolo 09-121 e 11-041, respectivamente) no Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Procurement 1 Tissue <ol><li> Aquisição de paciente primário tumor / metástase NOTA: Até à data, este protocolo foi realizado em pancreáticos, gástricos e tipos de tumor da mama removidos cirurgicamente, bem como, as metástases de linfoma. <ol><li> Direcionar a equipe cirúrgica para entregar a amostra por correio ou sistema de tubos pneumáticos para o departamento de Patologia em hermeticamente fechado e estéril saco plástico espécime à prova de vazamentos dentro de recipiente à prova de derrame estéril. Direcionar a equipe cirúrgica para transportar a amostra no estado fresco, sem formol ou fixador. </li><li> Dirigir o patologista ou patologista assistente para colher a amostra frescos utilizando uma técnica estéril, que inclui uso de luvas e instrumentos esterilizados sob uma capela de fluxo laminar. </li><li> Anote o tempo de colheita das amostras adquiridas, que é mantido rigorosamente menos de 30 min a partir da conclusão do procedimento cirúrgico. Levando-se em conta os efeitos de isquemia fria, não tome amostras de espécimes ressecados, com um tempo de isquemia fria de&gt; 30 min 18. </li><li> Dirigir o pessoal do Departamento de Patologia para remover uma amostra do tumor primário de aproximadamente 0,5 cm3 a 1,0 cm 3 de uma câmara de fluxo laminar, para manter um ambiente estéril. Quando possível, escolher o tecido do tumor a partir da periferia da lesão, para evitar potenciais índice de necrose central (morte celular) franca. NOTA: O tecido necrótico pode ser grosseiramente reconhecível por qualquer um dos seguintes critérios: a perda de cor ou palidez do tecido; perda de força em que o tecido necrosado é macio e friável; uma demarcação clara entre o tecido necrosado e viável. </li><li> Dirigir o pathologiST ou assistente patologista para fornecer tecido periférico que é em excesso (descarte cirúrgico), após a recolha imediata do tumor para avaliação diagnóstica. Colocar a amostra num tubo de centrífuga cónico de 15 ml estéril contendo cerca de 5 ml de meio essencial mínimo (MEM) contendo 1% de antibióticos (penicilina e estreptomicina). </li><li> Se estiver disponível (por exemplo, linfonodo axilar de cauda de espécime mastectomia), adquirir um grosseiramente positivos espécime gânglio linfático do mesmo tamanho (0,5 cm 3 a 1,0 cm 3) e comparar a resposta à droga do tumor primário. Como as amostras de tumor primário, colocar as amostras de nódulos linfáticos associados em um tubo de centrífuga cónico de 15 ml estéril contendo cerca de 5 ml de meio essencial mínimo (MEM) contendo 1% de antibióticos (penicilina e estreptomicina). </li><li> Se o tamanho de licenças peça cirúrgica (por exemplo, espécime mastectomia), remova (distante do tumor primário) de uma amostra de tecido normal (ou seja,fibrosa parênquima normal densa / peito) e colocar em um tubo de centrífuga cônico de 15 ml estéril contendo aproximadamente 5 ml de meio essencial mínimo (MEM) contendo 1% de antibióticos apenas para fins de transferência. Após a transferência para as instalações de laboratório, transferir a amostra &#39;normal&#39; para um, congelar e armazenar cryovial &#39;estalo&#39; em um freezer -80 ° C para análises moleculares futuras. </li><li> Coloque todas as amostras em gelo molhado e transportar imediatamente para o espaço de laboratório para ex vivo de corte de tecido fresco. Não secção do espécime normal, mas sim armazenar em um freezer -80 ° C para análises moleculares futuras. Transfira uma porção do tumor primário e de metástases associadas a um, congelar e armazenar criotubo &quot;pressão&quot; de uma temperatura de -80 ° C congelador para futuras análises moleculares. </li></ol></li><li> Aquisição de tecido a partir de estudos clínicos (por exemplo, biópsias com agulha grossa opcional (CNB)) ATENÇÃO: Nós obter tecidos tumorais de pacientesmatriculados em protocolos clínicos que dão o seu consentimento se submeter a uma CNB de uma metástase de tumor acessíveis antes do início da terapia. CNBS, até à data, têm sido realizados em pacientes com câncer de mama, linfoma da zona marginal, linfoma de células do manto, paraganglioma metastático, colo do útero (de células escamosas) e ovário. <ol><li> Ter pessoal clínico de Radiologia Intervencionista ou departamento competente realizar uma biópsia com agulha pré-tratamento e colocar a amostra em um tubo de centrífuga de 15 ml cônico estéril contendo aproximadamente 5 ml de meio essencial mínimo (MEM) contendo 1% de antibióticos (penicilina e estreptomicina). </li><li> Coloque a amostra de biópsia no gelo molhado e transportar imediatamente para o espaço de laboratório para ex vivo de corte de tecido fresco. </li></ol></li></ol> 2 Preparação de materiais para corte e Vibratome Configurações <ol><li> Elaboração de Materiais para Seccionamento <ol><li> Adicione uma solução de agarose a 4% por adição de 4 g de agasubiu para 100 ml de PBS. Autoclave (configurações de ciclo: Líquido, 121 ° C, 30 min, 15 libras por polegada quadrada), a solução antes do primeiro uso. Para utilizações seguintes, coloque a agarose 4% em um micro-ondas para liquefazer (fogo alto por intervalos de 30 segundos) antes de cada utilização e resfriar adequadamente para ~ 25 ° C (ou seja, quente ao toque) consciente de que agarose solidifica à temperatura ambiente. </li><li> Use a agarose 4% como uma mídia tecido incorporação não permanente. Quando a agarose 4% esfriou o suficiente e ainda está em estado líquido, com uma pinça estéril, colocar as amostras de tecido em um molde de incorporação e despeje a agarose 4%. </li><li> Posicione a amostra de tecido estreitas (~ mm distância 2), mas não diretamente na parede superfície de corte do molde de incorporação. A agarose a 4% começa a solidificar rapidamente, por conseguinte, a posição apropriada do espécime de tecido rápida. Durante o corte, manter a agarose 4% em um banho de água a 55 ° C para se manter em solução. </li><li> Para uma placa de 24 poços para análise secção, adicionar 1 ml de of meio completo (ou seja, de MEM + 10% de soro fetal de bovino 1% + antibióticos) a cada poço. Manter a placa de 24 cavidades à temperatura ambiente (~ 25 ° C) durante toda a duração do seccionamento. </li></ol></li><li> Preparação de Configurações Vibratome <ol><li> Usando o micrótomo vibratório, definir a velocidade a que a lâmina se aproxima da amostra [0 (0,00 mm / seg) a 10 (2,5 mm / seg)] e a frequência da lâmina [0 (0 Hz) a 10 (100 Hz) ]. Ajuste as configurações de acordo com a textura do tecido (ou seja, a densidade / firmeza). </li><li> Para um tumor de mama primário de carcinoma ductal invasivo, ajuste as configurações de 6 e 3, velocidade e freqüência, respectivamente. Para o tecido do tumor menos denso / firme, diminuir a velocidade e aumentar a frequência em conformidade. </li><li> Defina a espessura de corte dentro dos limites do instrumento (1-999 mm). Para estas análises, definir a espessura de corte de 200 m. </li><li> Montar o espécime embebidas em agarose utilizando uma fina camada de cola líquida sobre o disco de amostra that está submerso em um reservatório de mídia que é envolto em gelo molhado. </li></ol></li></ol> 3. Tissue Seccionamento, Tratamento e Análise <ol><li> Remova os cortes cortado com precisão imediatamente após corte usando uma pinça estéril e coloque em um prato multi-bem com 1 ml de meio completo. Quando as secções são adquiridos suficientes para resposta e análises de correlação, colocar a placa de multi-poços de resposta ao tratamento em uma incubadora de cultura de tecido fixado em condições de cultura de tecidos padrão. </li><li> Tire várias secções de controlo que bookend as secções tratadas em um esforço para confirmar a resposta dependente da dose, em oposição aos artefactos cultivadas. Realizar tecido seccionamento rapidamente (~ 30 - 40 min), bem dentro de quaisquer efeitos prejudiciais de tempo de isquemia fria (~ 2-4 hr) 18. Realizar o tratamento de secções só depois de um período de aclimatação de 1 hora. </li><li> Após o período de aclimatação de 1 hora, adicionar (doses terapeuticamente relevante aumentando; <em.&gt; Por exemplo, 0-10 mM concentrações) de drogas para as seções e casa em condições de cultura de tecidos para o período de tratamento. Para este estudo, utilizar períodos de avaliação de 24 horas e / ou 48. No entanto, cortes de tecidos de controle (veículo) só vai permanecer viável, como testado neste estudo, por períodos de até e incluindo os períodos de avaliação de 96 horas. </li><li> Após o tratamento, remover todas as secções em condições estéreis e formalina-fix, colocando a secção de tecido em um tubo contendo quer 10% de formalina tamponada e lugar à TA S / N ou em um tubo contendo paraformaldeído a 4% (16% de paraformaldeído diluir a partir de um frasco com PBS para uma concentração final de 4%) e lugar à temperatura ambiente durante 2 horas. <ol><li> Fixar as secções de tecido maiores (por exemplo,., ~ De 6 mm x 4 mm) de 200 um de espessura em 10% de formalina tamponada O / N à temperatura ambiente. Fix secções menores (por exemplo,. 1 mm x 1 mm) de 200 um de espessura, em 4% de paraformaldeído durante duas horas à temperatura ambiente. NOTA: Para a penetração eficiente de fixador o volume de fixative deve ser 20x o volume do tecido. Dado que este protocolo resulta em tamanhos extremamente pequenos de tecido (por exemplo, de 6 mm de tecido 3 = 6 ul de volume), para garantia de utilização adequada fixação 1 ml de fixador para todos os tamanhos de tecido. </li><li> Após a fixação ter as amostras de tecido embebidas em parafina pelo pessoal do Departamento de Patologia. Seção espécime blocos de parafina em lâminas carregadas ser hematoxilina e eosina e avaliadas por imunohistoquímica (por exemplo, apoptose). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Abercrombie, M., Ambrose, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interference+Microscope+Studies+of+Cell+Contacts+in+Tissue+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture.</a> Experimental Cell Research. 15 (58), 332-345 (1958).</li>
<li>Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Criteria+for+Determining+Malignancy+in+Tissue-Culture+Cell+Lines+in+the+Albino+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22New+York+Academy+of+Science%22%5BJournal%5D)">Criteria for Determining Malignancy in Tissue-Culture Cell Lines in the Albino Rat.</a> New York Academy of Science. 5, 351-355 (1957).</li>
<li>Paul, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Cancer+Cell+in+Vitro%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Cancer Cell in Vitro: A Review.</a> Cancer Research. 22, 431-440 (1962).</li>
<li>Dean, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+response+to+CDK4%2F6+inhibition+in+breast+cancer+defined+by+ex+vivo+analysis+of+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Therapeutic response to CDK4/6 inhibition in breast cancer defined by ex vivo analysis of human tumors.</a> Cell Cycle. 11 (14), 2756-2761 (2012).</li>
<li>Bray, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bcl-2+Modulation+to+Activate+Apoptosis+in+Prostate+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Bcl-2 Modulation to Activate Apoptosis in Prostate Cancer.</a> Molecular Cancer Research. 7 (9), 1487-1496 (2009).</li>
<li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li>
<li>Nakasone, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Tumor-Stroma+Interactions+during+Chemotherapy+Reveals+Contributions+of+the+Microenvironment+to+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Imaging Tumor-Stroma Interactions during Chemotherapy Reveals Contributions of the Microenvironment to Resistance.</a> Cancer Cell. 21, 488-503 (1016).</li>
<li>Shi, Y., Hogue, J., Dixit, D., Koh, J., Olson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+genetic+studies+of+isolated+cells+from+parathyroid+tumors+reveal+the+complex+pathogenesis+of+parathyroid+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Functional and genetic studies of isolated cells from parathyroid tumors reveal the complex pathogenesis of parathyroid neoplasia.</a> PNAS. 111 (8), 3092-3097 (2014).</li>
<li>Vidal, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+cancer+stem+cells+from+human+prostate+cancer+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples.</a> J. Vis. Exp. (85), e51332(2014).</li>
<li>Wanping, X., Neckers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+Molecular+Chaperone+Heat+Shock+Protein+90+Provides+a+Multifaceted+Effect+on+Diverse+Cell+Signaling+of+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting the Molecular Chaperone Heat Shock Protein 90 Provides a Multifaceted Effect on Diverse Cell Signaling of Cancer Cells.</a> Clinical Cancer Research. 13, 1625-1629 (2007).</li>
<li>Moulick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity-based+proteomics+reveal+cancer-specific+networks+coordinated+by+Hsp90%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.</a> Nature Chemical Biology. 7 (11), 818-826 (1038).</li>
<li>Alpaugh, M. L., Tomlinson, J. S., Ye, Y., Barsky, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+sialyl-Lewis%28x%2Fa%29+underexpression+and+E-cadherin+overexpression+in+the+lymphovascular+embolus+of+inflammatory+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Relationship of sialyl-Lewis(x/a) underexpression and E-cadherin overexpression in the lymphovascular embolus of inflammatory breast cancer.</a> American Journal of Pathology. 161 (2), 619-628 (2002).</li>
<li>Chu, K., Boley, K. M., Moraes, R., Barsky, S. H., Robertson, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+paradox+of+E-cadherin%3A+role+in+response+to+hypoxia+in+the+tumor+microenvironment+and+regulation+of+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">The paradox of E-cadherin: role in response to hypoxia in the tumor microenvironment and regulation of energy metabolism.</a> Oncotarget. 4 (3), 446-462 (2013).</li>
<li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> PNAS. 107 (18), 8352-8356 (2010).</li>
<li>Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+culture+of+human+prostate+tissue+and+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Urology%22%5BJournal%5D)">Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development.</a> Nature Reviews Urology. 10, 483-487 (2013).</li>
<li>Jhaveri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+protein+90+inhibitors+in+the+treatment+of+cancer%3A+current+status+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Investigational+Drugs%22%5BJournal%5D)">Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 5, 611-628 (2014).</li>
<li>Gerecitano, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+124-PU-H71PET+imaging+to+predict+intratumoral+concentration+in+patients+on+a+phase+I+trial+of+PU-H71%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Using 124-PU-H71PET imaging to predict intratumoral concentration in patients on a phase I trial of PU-H71.</a> Journal of Clinical Oncology. 31, Suppl . 11076-11 (2013).</li>
<li>Yildiz-Aktas, I., Dabbs, D. J., Bhargava, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cold+ischemic+time+on+the+immunohistochemical+evaluation+of+estrogen+receptor%2C+progesterone+receptor%2C+and+HER2+expression+in+invasive+breast+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Pathology%22%5BJournal%5D)">The effect of cold ischemic time on the immunohistochemical evaluation of estrogen receptor, progesterone receptor, and HER2 expression in invasive breast carcinoma.</a> Modern Pathology. 25, 1098-1105 (2012).</li>
</ol>

Nenhum conflito de interesse divulgado.

Biólogos câncer enfrentam desafios significativos ao tentar desenvolver estratégias terapêuticas eficazes. Testar medicamentos em desenvolvimento em linhas celulares de cancro estabelecidas não pode refletir com precisão em resposta vivo e in vivo em modelos PDX são trabalhoso e muito caro. Dado o acima, a aplicação de técnicas ex vivo de tumores primários do paciente 14, 15 está agora posicionada ao lado da análise molecular das linhas celulares de cancro e xenoenxertos estabelecid...

O desenvolvimento de cancro terapêutica eficazes provou ser extremamente desafiador. Linhas de câncer de células tumorais e explantes - bem como enxertos foram usados ​​em pesquisa sobre o câncer há mais de meio século 1,2,3. Até à data, a análise molecular de sensibilidade à droga e resistência em ambas as linhas celulares de cancro e xenoenxertos estabelecidas derivadas de pacientes (PDX) é indispensável. No entanto, o teste de compostos em linhas celulares de cancro estabelecidas muitas vezes não é de previsão de eficácia in vivo, e estudos in vivo correspondente em animais, especialmente em modelos de PDX, é muito cara e demorada. As limitações destes sistemas modelo, ou seja, a incapacidade para informar sobre a influência do microambiente nativo em progressão do tumor e a resposta de estratégias terapêuticas, levou o campo de investigação para o desenvolvimento de métodos adicionais para complementar estas análises. De recente, maior atenção está sendo pago para ex vivo de análise de tum pacienteou explantes 4, 5, devido à maior compreensão de que a resposta terapêutica do câncer não é exclusivo para a composição molecular inerente das células cancerosas mas é muito influenciada pelo microambiente celular tumor 6, 7 um recurso que não pode ser reproduzido por meio de métodos e de cultivo tradicionais / ou PDX. análise ex vivo, no contexto acima (ie., influência do microambiente adjacente célula tumoral circundante) implica a avaliação de seções tumor / metástase de primário viáveis, ao invés de ex vivo de análise de isolados celulares 8, 9. Registramos aqui uma técnica ex vivo (ie., Seções cortado com precisão frescas de tecidos) de ambos os tumores primários de pacientes e metástases associadas (ou seja, os gânglios linfáticos), que informa fielmente na resposta (IC50), efeitos fora do alvo e permite molecular análise dos mecanismos de resistência e de feedback. Além disso, uma análise correlativa de therapeUTIC sensibilidade / resistência contra biomarcador e perfil de expressão do gene pode ser realizada em um esforço para identificar os pacientes com maior probabilidade de responder à droga experimental de interesse (ou seja., resposta de droga elevada corresponde paciente com particular perfil biológico). Aplicação da técnica ex vivo e avaliação de uma forma multi-parâmetro é movimento para a seleção dos pacientes e melhoria global dos resultados clínicos. Análise ex vivo da resposta ao tratamento pode se tornar uma ferramenta padrão no desenvolvimento pré-clínico e clínico da terapêutica do câncer e é visto como um passo em direção a uma abordagem da medicina personalizada em estratégias de desenvolvimento de terapias.

<table><tbody><tr><td>Vibratome Leica VT1000s</td><td>Leica</td><td>14047235613</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16500500</td><td>Prepare 4% e 6% antes de usar</td></tr><tr><td>Lâmina injetora</td><td>Ted Pella</td><td>121-4</td><td></td></tr><tr><td>MEM com Penicilina&nbsp; + Streptomycin</td><td>Media Core Facilities (MSKCC)</td><td></td><td>A mídia é preparada no Memorial Sloan Kettering Cancer Center&nbsp;</td></tr><tr><td>Bisturi nº 10</td><td>Thermo Scientific</td><td>31-200-32</td><td></td></tr><tr><td>Pinça descartável</td><td>Cole-Parmer</td><td>84011182</td><td></td></tr><tr><td>Molde de incorporação</td><td>Microscopia eletrônica Ciência</td><td>70181</td><td></td></tr><tr><td>FBS (inativado por calor)</td> <td>Placas de 24</td> poços Gemini <td>100106</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>Formalina (10%)</td> <td>Diagnóstico Sigma</td><td>SDHT501128&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Solução de formaldeído a 16%</td><td>Thermo Scientific</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>Microsettes de incorporação</td><td>Simport</td><td>M503-2</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (70%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A405P-4</td><td></td></tr><tr><td>Banho-maria</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-462-2SQ</td><td></td></tr><tr><td>Microondas</td><td>General Electric</td><td>ModelJES2051DNBB</td><td></td></tr><tr><td>Adesivo (Ethyl Cianoacrilato)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1505-5G</td><td></td></tr><tr><td>Pratos de 10 mm</td><td>BD Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>tubos de 15 ml</td><td>BD Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr></tbody></table>

ex vivo resposta ao tratamento de tumores primários e / ou associated metástases para pré-clínica e clínica de desenvolvimento therapeutics

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

A análise molecular de linhagens de células cancerígenas estabelecidas tem sido o esteio da pesquisa do câncer nas últimas décadas. A cultura de células fornece análise direta e rápida da sensibilidade e resistência terapêutica. No entanto, evidências recentes sugerem que a resposta terapêutica não é exclusiva da composição molecular inerente das células cancerígenas, mas é muito influenciada pelo microambiente das células tumorais, uma característica que não pode ser recapitulada pelos métodos tradicionais de cultura. Mesmo a implementação de xenoenxertos tumorais, embora forneça uma riqueza de informações sobre a entrega/eficácia do medicamento, não pode capturar a interferência célula tumoral/microambiente (ou seja, fatores solúveis) que ocorre dentro de tumores humanos e afeta muito a resposta tumoral. Nessa medida, desenvolvemos uma técnica ex vivo (seccionamento de tecido fresco) que permite a avaliação direta da resposta ao tratamento para o desenvolvimento terapêutico pré-clínico e clínico. Essa técnica mantém a integridade do tecido e a arquitetura celular dentro do contexto da célula tumoral/microambiente durante toda a resposta ao tratamento, fornecendo um meio mais preciso para avaliar a eficácia do medicamento.

Para este estudo, a técnica ex vivo foi utilizado na análise de um correlativo de terapêutica sensibilidade / resistência de um inibidor da proteína de choque térmico 90 (Hsp90i). Em uma avaliação pré-clínica deste Hsp90i, o tumor primário de câncer de mama, um ER + ductal carcinoma invasivo (IDC), e associado metástases em linfonodos foram analisados ​​ex vivo para a resposta ao tratamento   (Figura 1). Vários 200 mM cortes seriados foram tratados apenas com veículo e...

Linhas celulares de cancro estabelecidos e xenotransplantes têm sido o esteio da pesquisa do câncer para as últimas décadas. No entanto, evidências recentes sugerem que a resposta terapêutica é muito influenciada pelo microambiente de células tumorais. Portanto, foi desenvolvida uma análise ex vivo de amostras de tumor primário para fins de desenvolvimento de drogas.

Ex Vivo resposta ao tratamento de tumores primários e / ou Associated Metástases para pré-clínica e clínica de Desenvolvimento Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

O objetivo da seguinte técnica de resposta a medicamentos ex vivo é implementar no desenvolvimento pré-clínico e clínico de medicamentos em um esforço para informar sobre a resposta ou efeitos fora do alvo do IC 50 e permitir a análise molecular dos mecanismos de resistência e feedback. Isso é conseguido primeiro adquirindo rapidamente uma amostra de tumor viável que é transportada imediatamente para o laboratório para seccionamento. Em seguida, o tecido é incorporado em agros, seccionado e tratado com um medicamento de interesse em doses terapeuticamente relevantes por várias durações.Finalmente, as seções são removidas dos poços, deixando para trás qualquer crescimento tumoral não responsivo e o tecido é fixado com fórmula e parafina incorporada antes que uma lâmina H e e de cada seção tratada seja preparada. Os resultados mostram tratamento medicamentoso, resposta do tumor e ou metástase com base em alterações morfológicas dos núcleos indicativas de apoptose. A determinação da resposta a drogas por IC 50, a identidade dos efeitos fora do alvo e a análise molecular dos mecanismos de resistência e feedback do crescimento tumoral não responsivo são avaliados.A principal vantagem de

ex-vivo-treatment-response-primary-tumors-andor-associated-metastases

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Expansão ex vivo de células tumorais T-reativa por Meios de 1/Ionomycin Bryostatin eo Common Gamma Cadeia Formulação Citocinas

Descreve-se um método para a resposta de imagem para tratamento...

Viver de imagem de Respostas de drogas no microambiente tumoral em modelos do rato do cancro da mama

Aqui, o monitoramento em tempo real do metabolismo das células tumorais, combinado com um modelo de metástase de membrana corio-alantóide (CAM) de embrião de galinha in vivo, é usado para avaliar novos alvos/agentes anticancerígenos quanto à sua capacidade de sensibilizar células tumorais a quimioterápicos prejudiciais ao DNA.

Avaliar a eficácia do Cancer Drogas Sensibilização<em&gt; In Vitro</em&gt; E<em&gt; In Vivo</em

Descreve-se um método relativamente simples para a imagiologia ex vivo, ao vivo das interacções de células de estroma tumoral dentro de metástase pulmonar, utilizando repórteres fluorescentes, em ratinhos. Utilizando microscopia confocal de disco rotativo, esta técnica permite a visualização de células vivas durante pelo menos 4 horas e pode ser adaptado para estudar outras condições inflamatórias do pulmão.

Ex vivo de imagens ao vivo de pulmão Metástase e seu microambiente

Este protocolo descreve a geração cirúrgica de tumores pancreatic ortotópicos e a digestão rápida de tumores pancreatic recentemente isolados do murine. Após a digestão, populações de células imunes viáveis podem ser usadas para análise a jusante, incluindo a estimulação ex vivo das células T para detecção intracelular de citocina por citometria de fluxo.

Geração de tumores pancreáticos ortotópicos e caracterização ex vivo da citotoxicidade de células T infiltrada tumoral

Aqui apresentamos um protocolo para testar a eficácia de terapias-alvo selecionadas com base na composição genômica de um tumor. O protocolo descreve a identificação e validação de rearranjos estruturais de DNA, o enxerto dos tumores dos pacientes em camundongos e as respostas de teste a medicamentos correspondentes.

Testando terapias-alvo em câncer usando análise estrutural de alteração de DNA e xenoenxertos derivados do paciente

A abordagem descrita combina ensaios experimentais de metástase da veia da cauda com imagens de animais vivos in vivo in vivo para permitir o monitoramento em tempo real da formação e crescimento da metástase do câncer de mama, além da quantificação do número e tamanho da metástase nos pulmões.

Uso combinado de ensaios de metástase de veia de cauda e imagens in vivo em tempo real para quantificar a colonização metastática do câncer de mama e carga nos pulmões

Modelos de xenoenxerto derivados da paciente (PDX) e modelos transplantáveis de camundongos geneticamente modificados recapitulam fielmente a doença humana e são modelos preferidos para pesquisas básicas e translacionais sobre câncer de mama. Aqui, um método é descrito para transplantar ortotopicamente fragmentos de tumor de mama na almofada de gordura mamária para estudar biologia tumoral e avaliar a resposta medicamentosa.

Transplante Ortotópico de Tumores mamários como Modelos Pré-Clínicos para o Câncer de Mama

Este artigo descreve métodos para a geração, tratamento medicamentoso e análise de explants derivados do paciente para avaliar as respostas de medicamentos tumorais em um sistema modelo pré-clínico vivo, relevante para o paciente.

Explantas tumorais derivadas do paciente como uma plataforma pré-clínico "viva" para prever a resistência a medicamentos em pacientes

O manuscrito descreve uma metodologia para o estabelecimento, bem como o monitoramento longitudinal do crescimento de metástases pulmonares espontâneas de tumores de mama injetados ortotopicamente, passíveis de intervenção em todos os estágios da cascata metastática.

In vivo Imagem para medir metástase pulmonar espontânea de células tumorais de mama injetadas ortotopicamente

Aprenda a técnica ex vivo de resposta a fármacos para avaliar eficácia terapêutica em tecidos tumorais preservando o microambiente. Este método permite determinar IC50, efeitos off-target e mecanismos de resistência em amostras clínicas.

Ex Vivo resposta ao tratamento de tumores primários e / ou Associated Metástases para pré-clínica e clínica de Desenvolvimento Therapeutics (Vídeo) | JoVE Journal

Ex Vivo resposta ao tratamento de tumores primários e / ou Associated Metástases para pré-clínica e clínica de Desenvolvimento Therapeutics

Explorar mais vídeos