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Preparação de rAAV9 para superexpressão ou Knockdown Genes em mouse Corações
Preparação de rAAV9 para superexpressão ou Knockdown Genes em mouse Corações
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JoVE Journal Genetics
Preparation of rAAV9 to Overexpress or Knockdown Genes in Mouse Hearts

Preparação de rAAV9 para superexpressão ou Knockdown Genes em mouse Corações

Full Text
13,494 Views
11:11 min
December 17, 2016

DOI: 10.3791/54787-v

Jian Ding1,2, Zhi-Qiang Lin1,2, Jian-Ming Jiang3,4, Christine E. Seidman3,4, Jonathan G. Seidman3,4, William T. Pu1,2, Da-Zhi Wang1,2

1Department of Cardiology,Boston Children's Hospital, 2Department of Pediatrics,Harvard Medical School, 3Department of Genetics,Harvard Medical School, 4Howard Hughes Medical Institute

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This manuscript describes a method for preparing recombinant adeno-associated virus 9 (rAAV9) vectors to manipulate gene expression in mouse hearts. This technique facilitates the study of gene function in vivo without relying on genetically modified animal models.

Key Study Components

Area of Science

  • Cardiology
  • Molecular Genetics

Background

  • rAAV9 is a viral vector used for gene delivery.
  • Manipulating gene expression in vivo is crucial for understanding cardiac functions.
  • This method provides an alternative to traditional genetically modified models.

Purpose of Study

  • To prepare rAAV9 vectors for gene expression manipulation.
  • To enable functional studies of gene function in mouse hearts.
  • To improve accessibility to gene manipulation techniques in cardiac research.

Methods Used

  • Generation of rAAV9 constructs.
  • Culturing of HEK293 cells.
  • Transfection of cells using a combination of plasmids and PEI.
  • Preparation of a PEI to DNA solution for effective transfection.

Main Results

  • The method allows for efficient manipulation of gene expression in mouse hearts.
  • Facilitates in vivo studies of gene function.
  • Demonstrates advantages over traditional genetically modified models.

Conclusions

  • This technique enhances the ability to study cardiac gene functions.
  • It provides a simpler approach to gene manipulation in vivo.
  • Future applications may expand understanding of cardiac biology.

Frequently Asked Questions

What is rAAV9?
rAAV9 is a viral vector used for delivering genes into cells, particularly in cardiac research.
How does this method improve gene manipulation?
It allows for direct manipulation of gene expression in vivo without the need for genetically modified animals.
What are the advantages of using rAAV9?
rAAV9 provides efficient gene delivery and expression in cardiac tissues, facilitating functional studies.
What cell line is used in this method?
HEK293 cells are cultured and transfected to produce rAAV9 vectors.
Can this method be applied to other tissues?
While this study focuses on mouse hearts, similar techniques may be adapted for other tissues.

Neste manuscrito, é descrito um método para preparar vetores recombinantes do vírus adeno-associado 9 (rAAV9) para manipular a expressão gênica no coração de camundongos.

O objetivo geral deste procedimento é preparar o vírus adeno-associado recombinante nove, ou rAAV9, para manipular a expressão gênica em corações de camundongos. O método pode responder a questões-chave no campo da cardiologia e genética molecular, como estudar a função do gene no coração de camundongos in vivo. A principal vantagem desta técnica é que ela nos permitirá manipular facilmente a expressão e função gênica in vivo no coração de camundongos, permitindo o acesso funcional da função gênica sem ter que depender dos modelos animais geneticamente modificados.

Depois de gerar construções rAAV9 e cultivar células HEK293 de acordo com o protocolo de texto, para transfectar as células no primeiro dia, combine 70 microgramas de plasmídeo AAV Rep-Cap, 70 microgramas de plasmídeo rAAV9 e 200 microgramas de plasmídeo auxiliar Ad em um tubo de centrífuga de 50 mililitros. Adicione 49 mililitros de DMEM à temperatura ambiente sem FBS ao tubo e misture bem. Em seguida, para fazer uma solução de PEI para DNA de quatro para um, adicione 1.360 microlitros de PEI ao tubo e misture bem.

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