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DOI: 10.3791/55109-v
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A levedura de fissão, Schizosaccharomyces pombe é um excelente sistema modelo para estudar a citocinese, a fase final na divisão celular. Aqui nós descrevemos uma abordagem microscopia para analisar diferentes eventos cytokinetic em células de levedura de fissão ao vivo.
O objetivo geral desta técnica de microscopia de células vivas é estudar os eventos espaço-temporais que ocorrem durante a citocinese no sistema modelo de levedura de fissão. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo citocinético, como os detalhes moleculares dos diferentes estágios da citocinese ao longo do tempo. A principal vantagem desta técnica é que diferentes componentes espaciais da maquinaria citocinética podem ser analisados por longos períodos de tempo com toxicidade mínima para as células.
Embora esse método possa fornecer informações sobre citocinese e levedura de fissão, ele também pode ser aplicado a leveduras em brotamento e outros fungos. Para iniciar este procedimento, despeje de três a quatro mililitros de mídia derretida misturada com vitamina C em uma placa de cultura com fundo de vidro. Depois que o meio solidificar, use um bisturi afiado para levantar suavemente a placa de mídia da placa de cultura e coloque uma ponta de pipeta entre a placa de mídia e a placa de cultura para evitar que a placa caia de volta na placa.
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