Name: Um método para a medição da função da glândula salivar em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Aprenda a medir a produção de saliva em camundongos após estimulação com Pilocarpina. Este método reprodutível reduz a variabilidade e permite avaliações repetidas no mesmo animal para estudos de função glandular.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

O estudo foi suportado por um fundo do National Institutes of Health, Instituto Nacional de dentária e Craniofacial Research (DE025030).

O protocolo descrito abaixo foi aprovado pelo Comitê de uso e cuidado institucional do Animal e segue as diretrizes éticas estabelecidas pelos institutos nacionais de saúde. Todos os dados apresentados neste relatório foram gerados usando ratos fêmeas que eram 10-12 semanas de idade. Foram utilizadas as seguintes cepas de ratos: C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S e F1 (B6XA/J). Todos os ratos foram alojados em gaiolas de barreira (5 animais por gaiola) em condições específicas isentos de organismos patogénicos e fornecidos a ração e água ad libitum.
1. preparação
<ol><li>Para preparar uma solução de cloridrato de pilocarpina, pesa 10 mg do composto e dissolvê-lo em 1,776 mL de solução salina isotônica estéril vortexing, para dar uma solução stock de 5,63 mg/mL. Não há nenhuma necessidade para esterilizar esta solução. Mas, se desejado, filtrá-la através de um filtro de 0,2 µM. Loja desta solução em alíquotas múltiplas em um freezer-80 oC por até 3 meses. Cada estoque congelado é para uso individual. Uma vez descongelado, não volte a congelar a solução pilocarpina.</li>
	<li>Levar a 0,6 mL tubos de microcentrífuga e cuidadosamente um buraco pequeno na parte inferior de cada tubo com uma agulha de calibre 18 aquecida. Defina esses tubos para tubos de 2 mL. Os tubos não precisam ser estéril.</li>
	<li>Usando uma lâmina de barbear afiada, estéril, corte cilíndricos cotonetes absorventes em cerca de 2 cm de comprimento. Corte cada pedaço de 2 cm na diagonal para dar 2 cotonetes em forma cônicas. Coloque um cotonete em cada um dos tubos de microcentrífuga de 0,6 mL.</li>
	<li>Pese o tubo de microcentrífuga de 0,6 mL contendo o swab seco.</li>
	<li>Transferi os ratos para ser estudado em uma nova gaiola limpa com garrafas de água. Manter os ratos sem comida pelo menos 2 h antes do início da coleta de saliva para impedir que partículas de comida que está contaminando a saliva coletada. Nota: Não é necessário manter o 1 rato por gaiola para este procedimento. No entanto, o número de ratos colocados em cada gaiola depende da instituição específica de regras e regulamentos para uso de animais.</li>
	<li>Pouco antes do fim de 2h, prepare a solução de trabalho de pilocarpina (0,0563 mg/mL) diluindo a solução-mãe de 100x em soro fisiológico estéril. Não é necessário mais filtro esterilizar esta solução. Mantenha sempre a solução pilocarpina no gelo. Nota: A tabela 1 dá a quantidade de pilocarpina deve ser injetado para uma gama de pesos de corpo do mouse para dar uma dose final de 0,375 mg/kg de peso corporal.</li>
</ol>2. o procedimento
<ol><li>Pesar cada rato e determinar a dose da mistura anestésica para cada mouse usando a tabela 1. Injete o primeiro rato com o volume adequado da mistura anestésica por via intraperitoneal. Defina o temporizador para 2 min (maioria das cepas de rato testado neste protocolo ir para dormir por 2 min). Certifique-se de que o mouse é devidamente anestesiado pela falta de andar quando colocado sobre uma superfície plana. Se o mouse ainda está andando, espere 2min adicional antes de prosseguir para a próxima etapa. Aplique uma gota de lubrificante pomada oftálmica de ambos os olhos para impedir a secagem. Nota: Na tabela 1, a dose da mistura anestésica é 0,007 mL/g de massa corporal. O intervalo ideal para este procedimento é 0,006 a 0,008 mL/g de massa corporal. No entanto, após 4 min, se o mouse ainda é andar ou exibindo movimentos espasmódicos, consulta com o veterinário institucional para adequadamente, aumentando a dose de anestésico.</li>
	<li>Determinar a dose de pilocarpina para o mouse usando a tabela 1 e injetar a quantidade adequada por via intraperitoneal. Definir o timer por 2 min e colocar o mouse no tubo de retenção de 50 mL até a cabeça e orelhas fica fora do corte final. Coloque o tubo em um ângulo de 45 graus, com a cabeça para baixo e a superfície ventral virada para cima. Fita do tubo para a placa de procedimento para mantê-lo de se mover. Nota: A tabela 1 fornece dosagem para ratos, mais de 17 g, como este procedimento não tem sido tentado em ratos com peso abaixo de 17 g.</li>
	<li>No final de 2 min, gentilmente Insira um par fechado de micro pinça de dissecação na boca e levantar a mandíbula inferior para cima para abrir a boca. Empurre a pinça 1-2 milímetros mais dentro da boca, certificando-se de que a língua é vista descansando no braço superior da pinça. Com outro par de pinças bem, segure o cotonete seco pré-pesados perto de sua ponta cônica.</li>
	<li>Deslize suavemente a ponta cónica do cotonete na boca. Retire a pinça, deixando a ponta do swab na cavidade oral.</li>
	<li>Segure a ponta mais larga da zaragatoa estendendo-se fora da boca e girá-lo para permitir a máxima área de contato com a boca. Fique com o cotonete nesta posição por 15 min. Nota: Isso garante que o swab permanece na boca para a duração da coleção. Note que a ponta cónica do cotonete atua como um pavio, e a maior parte do swab permanece fora da boca.</li>
	<li>No final de 15 min, delicadamente gire o swab para coletar qualquer saliva que não foi absorvido e coloque o cotonete molhado no tubo de microcentrífuga de 0,6 mL. Fechar o tubo e configurá-lo no tubo 2 mL colocado no gelo. Nota: Neste momento, a mucosa oral aparecerá completamente seca. O mouse pode agora ser voltou para sua gaiola para a recuperação da anestesia.</li>
	<li>Transferi o rato na gaiola. Coloque o alimento umedecido pelotas na gaiola após a coleta de saliva para ajudar a reidratação mais rápida. Nota: Os ratos acordar dentro de 10 min após o final da coleção. Injeção subcutânea de salina isotônica pré-aquecido de 0,2 mL também pode ser dada para acelerar a recuperação.</li>
	<li>Prossiga para o próxima do mouse. Todos os ratos devem ser monitorizados até que tenham completamente recuperados e são ambulatoriais.</li>
</ol>3. as medições
<ol><li>No final de todas as coleções, pese os tubos de 0,6 mL com o cotonete molhado. Calcule a diferença entre o peso molhado e seco para obter o peso da saliva produzida. Coloca o tubo de 0,6 mL saliva de volta no tubo de 2 mL.</li>
	<li>Corte as tampas dos tubos de 2 ml. Em seguida, centrifuga os tubos de 2 mL por 2 min a 7500 x g, em 4oC em uma centrífuga micro para recuperar a saliva. Medir o volume de saliva obtido utilizando uma micropipeta.</li>
	<li>Expressar os resultados como saliva peso (mg)10 a mais de 15 min, ou como uma relação do peso de saliva (mg) / peso corporal (g) de rato. Nota: Se o volume de saliva extraído fora o swab foi medido, expressar os resultados como o volume de saliva recuperado (mL) ou a proporção do volume de saliva (mL) / peso corporal (g) de rato.</li>
</ol>

<ol><li>Proctor, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiology+of+salivary+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol+2000%22%5BJournal%5D)">The physiology of salivary secretion.</a> Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).</li>
<li>Fox, R. I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16039337">Sjögren's syndrome.</a> Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).</li>
<li>Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xerostomia+and+its+predictors+following+parotid-sparing+irradiation+of+head-and-neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">Xerostomia and its predictors following parotid-sparing irradiation of head-and-neck cancer.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 50 (3), 695-704 (2001).</li>
<li>Marmary, Y., Fox, P. C., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+secretion+rates+from+mouse+and+rat+parotid+glands+are+markedly+different+following+pilocarpine+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Fluid secretion rates from mouse and rat parotid glands are markedly different following pilocarpine stimulation.</a> Comp Biochem Physiol A Comp Physiol. 88 (2), 307-310 (1987).</li>
<li>Lin, A. L., Johnson, D. A., Wu, Y., Wong, G., Ebersole, J. L., Yeh, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+short-term+gamma-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Measuring short-term gamma-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Arch Oral Biol. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li>
<li>Scofield, R. H., Asfa, S., Obeso, D., Jonsson, R., Kurien, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+short+peptides+from+the+60-kDa+Ro+antigen+recapitulates+the+serological+and+pathological+findings+as+well+as+the+salivary+gland+dysfunction+of+Sjogren%27s+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunization with short peptides from the 60-kDa Ro antigen recapitulates the serological and pathological findings as well as the salivary gland dysfunction of Sjogren's syndrome.</a> J Immunol. 175 (12), 8409-8414 (2005).</li>
<li>Deshmukh, U. S., Nandula, S. R., Thimmalapura, P. R., Scindia, Y. M., Bagavant, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+innate+immune+responses+through+Toll-like+receptor+3+causes+a+rapid+loss+of+salivary+gland+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Pathol+Med%22%5BJournal%5D)">Activation of innate immune responses through Toll-like receptor 3 causes a rapid loss of salivary gland function.</a> J Oral Pathol Med. 38 (1), 42-47 (2009).</li>
<li>Deshmukh, U. S., Ohyama, Y., Bagavant, H., Guo, X., Gaskin, F., Fu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+stimuli+accelerate+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome-like+disease+in+%28NZB+x+NZW%29F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Inflammatory stimuli accelerate Sjögren's syndrome-like disease in (NZB x NZW)F1 mice.</a> Arthritis Rheum. 58 (5), 1318-1323 (2008).</li>
<li>Szczerba, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+innate+immunity+and+Ro52-induced+antibody+causes+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome-like+disorder+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Interaction between innate immunity and Ro52-induced antibody causes Sjögren's syndrome-like disorder in mice.</a> Ann Rheum Dis. 75 (3), 617-622 (2016).</li>
<li>Takakura, A., Moreira, T., Laitano, S., De Luca Júnior, L., Renzi, A., Menani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+muscarinic+receptors+signal+pilocarpine-induced+salivation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Central muscarinic receptors signal pilocarpine-induced salivation.</a> J Dent Res. 82 (12), 993-997 (2003).</li>
<li>Yao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+elevation+and+secretion+of+interleukin-1beta+in+the+submandibular+gland+of+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced elevation and secretion of interleukin-1beta in the submandibular gland of male mice.</a> Immunology. 116 (2), 213-222 (2005).</li>
<li>Knudsen, J., Nauntofte, B., Josipovic, M., Engelholm, S. A., Hyldegaard, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+isoflurane+anesthesia+and+pilocarpine+on+rat+parotid+saliva+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Radiat+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of isoflurane anesthesia and pilocarpine on rat parotid saliva flow.</a> Radiat Res. 176 (1), 84-88 (2011).</li>
<li>Kohrs, R., Durieux, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine%3A+teaching+an+old+drug+new+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Ketamine: teaching an old drug new tricks.</a> Anesth Analg. 87 (5), 1186-1193 (1998).</li>
<li>Cold Spring Harbor Protocols. Cold Spring Harb Protoc. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://cshprotocols.cshlp.org/">http://cshprotocols.cshlp.org/</a> (2006).</li>
<li>Kozaki, T., Hashiguchi, N., Kaji, Y., Yasukouchi, A., Tochihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+saliva+collection+using+cotton+swab+on+cortisol+enzyme+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of saliva collection using cotton swab on cortisol enzyme immunoassay.</a> Eur J Appl Physiol. 107 (6), 743-746 (2009).</li>
</ol>

Os autores têm sem conflitos de interesse a divulgar.

Produção de saliva é um processo complexo e é influenciada por muitos fatores. Portanto, medir a função da glândula salivar em animais de laboratório pode ser um desafio. Um desafio adicional é que medidas repetidas da função das glândulas salivares no mesmo animal são necessárias para estabelecer o início da doença ou para demonstrar a recuperação após o tratamento.
O método da zaragatoa descrito neste relatório é tecnicamente simples para realizar com várias opções para representar os dados....

As glândulas salivares produzem saliva em resposta a uma variedade de estímulos neurológicos e mecânica1. Os estímulos são transportados através do sistema nervoso simpático e parassimpático aos receptores adrenérgicos e colinérgicos na glândula. Pilocarpina é um agente colinérgico, Pará-simpaticomimética que atua predominantemente sobre os receptores muscarínicos. Na glândula salivar, que induz a produção de saliva, agindo sobre os receptores de acetilcolina muscarínicos M31. Produção de saliva, após a administração de pilocarpina é um indicador da capacidade de responder à estimulação das glândulas salivares e é comumente usada como uma medida da função da glândula salivar.
Medição da produção de saliva é fundamental no estudo de doenças das glândulas salivares, incluindo Síndrome de Sjögren2 e lesão de radiação de tratamento de câncer cabeça e pescoço3a seguir. Diversos métodos foram desenvolvidos para medir a produção de saliva em roedores. Estes incluem canulação direta do Ducto excretor salivar4, coleta de saliva da cavidade oral sob vácuo5e coleção usando de capilares de vidro6 ou7,uma micropipeta,8, 9. direto a canulação do ducto salivar fornece saliva mais preciso e puro. No entanto, este é um procedimento tecnicamente desafiador, e o potencial para causar lesão ductal impede a coleções de saliva repetitiva do mesmo animal. Coleta de saliva sob vácuo pode levar a resultados variáveis devido à secagem da saliva do tubo. Esta perda é mais exagerada em camundongos com salivação reduzida. Capilares de vidro permitem a coleta de saliva para análises subsequentes, no entanto, as alterações na viscosidade da saliva secretada no estado doente impede enchimento eficiente do capilar. Além disso, as tentativas de varrer a cavidade oral para coletar saliva residual podem causar ferimentos. O método de pipeta permite a coleção completa, e para o mesmo operador, é notavelmente consistente entre as experiências. No entanto, por razões desconhecidas, esse método mostra uma variação significativa entre os diferentes operadores. Portanto, para permitir comparações apropriadas, torna-se imperativo que o mesmo operador realiza todas as experiências relacionadas a um projeto específico. Claramente, isto representa uma grande desvantagem para um laboratório.
Para superar esses problemas, um procedimento foi desenvolvido que combina métodos de recolha de saliva usada para seres humanos e roedores. O método da zaragatoa, descrito abaixo para medir o volume de saliva induzidas pela pilocarpina é simples, reprodutível, não influenciada pelo operador e pode ser executado repetidamente no mesmo animal. Além disso, permite a coleta de saliva para posteriores análises de proteínas, imunoglobulinas ou outras biomoléculas.

<table><tbody><tr><td><forte>Produtos químicos para coleta de saliva</forte></td>cloridrato de <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pilocarpina</td><td>Alfa Aesar, Tewksbury, MA, EUA</td><td>B21410</td><td>Diluir em solução salina isotônica estéril. Armazene alíquotas de uso único de estoque 100X em -80oC</td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Solução de mistura de anestesia</td><td></td><td></td><td>Misture 1 mL de cloridrato de cetamina + 0,5 mL de xilazina + 8,5 mL de solução salina isotônica estéril em um frasco estéril. Pode ser usado por 3 meses.</td></tr><tr><td>Vetamina (cloridrato de cetamina)</td> <td>Vet One, Boise, Idaho, EUA</td><td>C3N VT1</td><td>O estoque é de 100 mg / mL</td></tr><tr><td>Anased (xilazina)</td> <td>Med-Vet International, Mettawa, IL, EUA</td><td>RXANASED-20</td><td>O estoque é de 20 mg / mL</td></tr><tr><td>Solução salina estéril isotônica</td><td>Vet One, Boise, Idaho, EUA</td><td>501032</td><td>Usado como diluente</td></tr><tr><td>Lágrimas artificiais (pomada oftálmica lubrificante)</td> <td>Henry Schien, Dublin, OH, EUA</td><td>48272</td><td>Usado para evitar que os olhos sequem durante o procedimento</td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Materiais para coleta de saliva</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SalivaBio Cotonete infantil</td><td>Salimetrics, LLC Carlsbad, CA, EUA</td><td>N/A</td><td>Cotonetes embalados individualmente</td></tr><tr><td>Tubos de polipropileno de 50 mL</td><td>VWR, Radnor, PA, USA</td><td>89004-364</td><td>Corte a parte inferior de 1 cm do tubo. Certifique-se de que a borda cortada esteja lisa.</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 0,6 mL</td><td>VWR, Radnor, PA, USA</td><td>87003-290</td><td>Faça furos no fundo do tubo com agulhas aquecidas de calibre 18</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 2 mL</td><td>VWR, Radnor, PA, USA</td><td>87003-298</td><td></td></tr><tr><td>Seringas de insulina com agulhas permanentemente fixadas</td><td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>agulhas chanfradas regulares de calibre 18</td><td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, EUA</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina de bisturi estéril #11</td><td>Integra York Inc PA, EUA</td><td>4-311</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de microdissecação</td><td>Roboz, Gaithersburg, MD, USA</td><td>RS-5139</td><td>Ponta angular serrilhada de 0,8 mm, comprimento de 4"</td></tr><tr><td>Fita adesiva</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, EUA</td><td>sc-224487</td><td></td></tr><tr><td>Temporizador de 3 canais</td><td>Amazon.com, Seattle, WA, EUA</td><td>B06W2KCYVN</td><td></td></tr><tr><td>Balança Analítica</td><td>Mettler Toledo, Columbus OH, EUA</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>strong>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de Catálogo<</td><td>strong>Comentários</td></tr><tr><td>Chemicals/ reagentes para induzir disfunção salivar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Invivogen, San Deigo, CA, EUA</td><td>tlrl-b5lps</td><td>Dissolva em água livre de endotoxinas e armazene a solução de estoque a 5 mg / mL. diluir em HBSS estéril 100 ug / mL - injetar 100 uL / moue ip</td></tr><tr><td>Imject Alum adjuvante</td><td>Thermo Scientific</td><td>77161</td><td>Diluir 1: 1 em solução salina estéril. Injetar intraperitonealmente 0,1 mL / camundongo</td></tr><tr><td>Coelho anti-soro anti-Ro52</td><td>Gerado em laboratório</td><td></td><td>Imunização de coelhos com camundongo recombinante Ro52</td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Chemicals/ Kits para análises de saliva</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Estimativa de lisozima salivar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EnzChek Kit de Ensaio de Lisozima</td><td>Sondas Moleculares, Eugene, OR, EUA</td><td>E-22013</td><td>Usado conforme as instruções do fabricante</td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de Catálogo</td><td>Comentários </td></tr><tr><td><forte>Estimativa de IgA salivar por sanduíche ELISA</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Camundongo IgA</td><td>Southern Biotech, Birmingham, AL, EUA</td><td>0106-01</td><td>Padrões para sanduíche ELISA - faixa de 30 ng/mL a 0,5 ng/mL</td></tr><tr><td>IgA anti-camundongo de cabra não rotulada</td><td>Southern Biotech, Birmingham, AL, EUA</td><td>1040-01</td><td>Revestimento a 1 ug/mL em tampão de bicarbonato</td></tr><tr><td>Cabra anti-camundongo IgA HRP</td><td>Southern Biotech, Birmingham, AL, EUA</td><td>1040-05</td><td>Anticorpo de detecção usado em substrato TMB de diluição 1:4000</td></tr><tr><td></td><td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, EUA</td><td>555214</td><td>Usado de acordo com as instruções do fabricante</td></tr><tr><td>Immulon 4HBX Microtiter 96 placas de poços</td><td>Thermo Scientific, Rochester, NY, EUA</td><td>3855</td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Estimativa de proteína salivar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate</td><td>BioRad, Hercules, CA, USA</td><td></td><td>5000006 Para estimativa de proteína de acordo com as instruções do fabricante</td></tr></tbody></table>

um método para a medição da função da glândula salivar em ratos

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Pacientes com síndrome de Sjögren, uma doença auto-imune que afectam as glândulas exócrinas, desenvolvem a inflamação das glândulas salivares e reduziram a produção de saliva. Da mesma forma, a produção de saliva é severamente comprometida em pacientes recebendo tratamento com radiação para câncer de cabeça e pescoço. Modelos de roedores, desenvolvidos para imitar essas condições clínicas, facilitam uma compreensão da patogênese da doença e permitam o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Portanto, a capacidade de precisão reproducibly e repetidamente medir a função da glândula salivar em modelos animais é crítica. Base em procedimentos previamente descritos na literatura, um método foi desenvolvido que atende a esses critérios e foi utilizado para avaliar a função da glândula salivar em camundongos. Uma vantagem adicional deste novo método é que ele é facilmente dominado e tem pouca variação inter operador. Função da glândula salivar é avaliada como a quantidade (volume ou peso) ou taxa (mL/min) de saliva produzida em resposta à estimulação de pilocarpina. A saliva coletada é uma boa fonte para as análises do teor de proteínas, as concentrações de imunoglobulinas e outras biomoléculas.

Nos sistemas de modelo experimental do mouse, a capacidade de produzir saliva em resposta à estimulação de pilocarpina é usada como um indicador da função das glândulas salivares. Produção de saliva era medida em ratos fêmeas de C57BL/6 de 11 semanas de idade pelo método cotonete. Na figura 1A, os resultados são expressos como a quantidade de saliva (mg) coletado após doses crescentes de pilocarpina. Com a dose de 1 mg/kg de peso corporal, alguns dos ratos co...

Hipofunção das glândulas salivares é uma consequência frequente da terapia de radiação e doença auto-imune. Reprodutível avaliação da função da glândula salivar em modelos do rato destas doenças é um desafio técnico. Aqui, um método simples para a medição exata e reproduzível da produção de saliva em camundongos é descrito.

Um método para a medição da função da glândula salivar em ratos

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

O objetivo geral deste procedimento é coletar e medir com precisão e reprodutibilidade a saliva de camundongos após a estimulação com pilocarpina. Medir a produção de saliva em roedores é um procedimento desafiador e propenso a alta variabilidade. Este método é simples e pode ser repetido no mesmo animal nos vários momentos de todo o estudo.Este método pode não apenas medir o volume da saliva produzida, mas também pode ser usado para coletar a saliva para posterior análise de moléculas bioativas que podem ser secretadas na saliva. Em última análise, isso será de grande utilidade ao investigar a Síndrome de Sjögren, fibrose da glândula salivar ou regeneração da glândula salivar em sistemas modelo de roedores. Para este procedimento, mandar preparar e congelar alíquotas de cloridrato de pilocarpina com um máximo de três meses.Não congele novamente as alíquotas descongeladas. Comece preparando tubos de microcentrífugas de 0,6 mL. Faça um pequeno furo no fundo dos tubos com uma agulha aquecida de calibre 18.Faça um tubo por mouse. Em seguida, coloque esses tubos em tubos de 2 mL. A esterilidade não é uma preocupação.Em seguida, usando métodos assépticos, corte cotonetes absorventes cil

a-method-for-the-measurement-of-salivary-gland-function-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Medidas repetidas de fisiologia respiratória dos roedores e amostragem de células inflamatórias nas vias aéreas são desejáveis, mas geralmente não é viável. Aqui nós descrevemos um método repetitivo para entubar camundongos por via oral, que permite medições repetidas de hiper-reatividade das vias aéreas e amostragem de células inflamatória das vias aéreas.

A reversível, método não-invasivo para medições de Resistência das Vias Aéreas e Amostragem Líquido da Lavagem Broncoalveolar em Ratos

Um protocolo otimizado para o isolamento de células-tronco a partir da glândula salivar do mouse é descrito. O método emprega digestão enzimática e mecânica, e permite o isolamento de salispheres contendo células com características de células-tronco.

Isolamento de Células-Tronco do rato das Glândulas Salivares

Este método descreve como dissecar e avaliar o desenvolvimento da glândula mamária e na função de camundongos. Excisadas glândulas mamárias são avaliados quanto ao grau de desenvolvimento usando montar todo, enquanto a ejeção do leite é avaliada através de um ensaio de oxitocina baseado contração mioepiteliais celular.

Avaliação do desenvolvimento da glândula mamária e Função em modelos de ratos

Um protocolo para a canulação do mouse glândula salivar submandibular via ducto de Wharton, é descrito. Para este experimento, a solução de azul de tripano é usado como um tintureiro para demonstrar como esta técnica efetivamente oferece infusões na glândula alvo, e sugerir a confiabilidade dessa nova abordagem como uma potencial terapia medicamentosa / célula clínicos para a regeneração das glândulas salivares.

Canulação da glândula submandibular do rato através do duto salivar de Wharton

Microscopia intravital é uma ferramenta poderosa que permite a imagem latente vários processos biológicos em animais vivos. Neste artigo, é apresentado um método detalhado para a imagem dinâmica das estruturas subcelulares, tais como os grânulos secretores, nas glândulas salivares de ratos vivos.

Microscopia intravital para Estruturas de imagem Subcelulares em ratos vivos Expressando fluorescentes Proteínas

Descreveremos um protocolo para cirurgicamente expor e estabilizar a glândula salivar submandibular murino para intravital imagem usando microscopia intravital vertical. Este protocolo é facilmente adaptável a outras glândulas exócrinas da cabeça e região do pescoço dos ratos e outros pequenos roedores.

Preparação de murino das glândulas salivares Submandibular para microscopia Intravital vertical

Apresentamos uma abordagem detalhada para realizar coleta de saliva, incluindo murino traqueostomia e o isolamento dos três glândulas salivares maiores.

Murino salivar avaliação funcional através de pilocarpina estimulação seguinte fracionada de radiação

No presente protocolo, a função de barreira endotelial da glândula submandibular (SMG) foi avaliada por meio da injeção de diferentes marcadores fluorescentes de peso molecular nas veias angulares de modelos animais de teste in vivo sob um microscópio de varredura a laser de dois fótons.

In vivo Detecção de Permeabilidade Vascular em Glândula Submandibular de Camundongo

A imagem por imunofluorescência é limitada pela capacidade de observar processos biológicos complexos e dependentes do tempo em apenas um único instantâneo no tempo. Este estudo descreve uma abordagem de imagem ao vivo conduzida em cortes de glândula submandibular de camundongos com corte preciso. Esta abordagem permite a observação em tempo real das interações célula-célula durante a homeostase e os processos de regeneração e reparo.

Interrogando interações célula-célula na glândula salivar via imagem de células vivas ex vivo

Aqui, descrevemos a administração de medicamentos guiada por micropipeta (MDA) como um método alternativo à gavagem oral que incentiva o animal de pesquisa a ingerir tratamentos prontamente com o mínimo de estresse e desconforto.

Uso da administração de medicamentos guiados por micropipeta como método alternativo à gavagem oral em modelos de roedores

Aqui, descrevemos a medição da tosse usando um sistema de pletismografia de corpo inteiro (WBP) não invasivo e em tempo real e os procedimentos normativos para a coleta de amostras de tecido de camundongos e introduzimos alguns métodos para avaliar a inflamação das vias aéreas.

Métodos para detectar tosse e inflamação das vias aéreas em camundongos

Aprenda a medir a produção de saliva em camundongos após estimulação com Pilocarpina. Este método reprodutível reduz a variabilidade e permite avaliações repetidas no mesmo animal para estudos de função glandular.

Um método para a medição da função da glândula salivar em ratos

Explorar mais vídeos