Name: Minimizando a hipóxia em fatias hipocampais de camundongos adultos e envelhecidos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Aprenda a minimizar danos hipóxicos em fatias hipocampais de camundongos adultos e envelhecidos usando perfusão transcardíaca com NMDG-aCSF gelado. Este método mantém a viabilidade celular por até 10 horas para estudos eletrofisiológicos de longa duração.

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Carla J. Shatz por conselhos e apoio, e Dr. Barbara K. Brott e Michelle K. Drews por lerem criticamente o manuscrito. O trabalho é apoiado pelo NIH EY02858 e pela Mathers Charitable Foundation concede ao CJS.

O protocolo é realizado de acordo com o Guia de Cuidado e Uso de Animais laboratoriais dos Institutos Nacionais de Saúde e aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Stanford. Os métodos também estão de acordo com as Políticas da Sociedade para a Neurociência sobre o Uso de Animais e Humanos na Pesquisa em Neurociência.
NOTA: Todos os camundongos foram mantidos em um ambiente livre de patógenos. Ratos do tipo selvagem em c57Bl/ 6 x SV/ 129J de fundo genético foram usados aqui, a menos que observados de outra forma.
1. Configuração
<ol><li>Prepare 1 L de 1x aCSF (em mM): 125 NaCl, 26 NaHCO3, 2.3 KCl, 1.26 KH2PO4, 1.3 Mg2SO4·7H2O, 2.5 CaCl2, 25 glicose(Tabela 1). Use esta solução para a câmara de recuperação e gravações subsequentes. NOTA: Armazene aCSF como uma solução de estoque de 10x que contenha NaCl, NaHCO3, KCl e KH2PO4. Armazene Mg2SO4·7H2O e CaCl2 como soluções de estoque de 1 M. Prepare a solução de trabalho no dia do experimento a partir das soluções de estoque acima, e adicione glicose antes de ajustar o volume final com 18 MΩ de água. NOTA: Dependendo da região cerebral ou da cepa do camundongo, a ACSF refrigerado também pode ser usado para perfusão transcárdia com sucesso11,,15,26.</li>
	<li>Prepare 300 mL de NMDG-aCSF (em mM): 135 NMDG, 1 KCl, 1.2 KH2PO4, 1,5 MgCl2, 0,5 CaCl2,20 bicarbonato de colina, 10 glicose(Tabela 1). Este volume de NMDG-aCSF é suficiente tanto para perfusão transcárvia quanto para etapas de corte. NOTA: Armazene o NMDG-aCSF como uma solução de estoque de 3x a 4 °C. Preparar solução de trabalho no dia do experimento; adicionar bicarbonato de colina e glicose antes de ajustar o volume final com 18 MΩ de água. Bolha a solução com 95%O2/5%CO2 para tamponá-la, e saturar com oxigênio. NOTA: O estoque de NMDG começa como altamente alcalino, e requer ácido clorídrico concentrado (HCl) para ajustar o pH para ~7,4. A adição de ácido clorídrico deve ser lenta uma vez abaixo do pH 8, pois é fácil acidificar a solução para ~pH 3 com excesso de HCl. Este ajuste deve ser feito antes de adicionar cations divalent. Esta receita NMDG-aCSF é livre de sódio. As receitas NMDG publicadas anteriormente usam 30 mM NaHCO3 para tamponamento, o que resulta em 30 mM de sódio presente no NMDG-aCSF13,20.</li>
	<li>Ajuste a bandeja de corte de microtóme vibratório e o disco de montagem para -20 °C.</li>
	<li>Prepare a câmara de recuperação.<ol>
<li>Encha a câmara de recuperação um pouco acima da malha de corte, mantenha-a no banco à temperatura ambiente e bolha. NOTA: A câmara de recuperação de fatias usada aqui é muito semelhante às câmaras clássicas descritas anteriormente por Edwards e Konnerth3. aCSF é mantido em um copo de vidro (400 mL) que contém uma moldura acrílica redonda com malha de nylon preto colada na parte inferior. O quadro acrílico está suspenso no meio do béquer através de um gancho de acrílico apoiado sobre a borda do béquer. O bolha de vidro é inserido até o fundo. O projeto permite a oxigenação de ambos os lados das fatias. Borbulhar também fornece mistura constante de aCSF na câmara de recuperação. A malha preta fornece um alto contraste contra as fatias off-white, que são então mais fáceis de ver.</li>
	</ol></li>
	<li>Prepare a solução de perfusão transcárvia e corte.<ol>
<li>Esfrie os 300 mL inteiros de NMDG-aCSF em um congelador, até que os cristais de gelo comecem a se formar na superfície e nas paredes da garrafa. NÃO congele demais!</li>
		<li>Coloque a garrafa com NMDG-aCSF refrigerado no gelo e na bolha. A solução deve ser entre 0\u20122 °C. NOTA: Slushy NMDG- aCSF implica ter a maior parte da solução como líquido, enquanto uma pequena fração de gelo slushy presente manterá a solução perto de 0 °C durante toda a perfusão e corte. Deve-se tomar cuidado para afastar cristais de gelo do cérebro durante o corte.</li>
	</ol></li>
	<li>Prepare o disco de montagem de tecido.<ol>
<li>Tire o disco do congelador, limpe-o se necessário.</li>
		<li>Corte um bloco de 5% de ágar da placa de ágar previamente preparada, e cole-o no centro do disco usando uma fina camada de cola cianoacrilato. A peça de ágar deve ser do tamanho de um cérebro de rato. Coloque o disco com ágar colado no gelo e cubra com toalhas de papel até que esteja pronto para usar.<ol>
<li>Para 5% de placa de ágar, dissolva 5 g de ágar em 100 mL de água de 18 MΩ por microwaving, e despeje em uma placa de petri limpa. Mantenha a 4 °C.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Tire a bandeja de corte do congelador, coloque-a no microtome, cerque-a com gelo e carregue a lâmina.</li>
</ol>2. Perfusão transcárvia e extração cerebral
<ol><li>Ratos de overdose através de uma injeção intraperitoneal de coquetel anestésico. Verifique a profundidade da anestesia verificando o reflexo da dor (beliscão do dedo do pé); um rato não deve exibir o reflexo uma vez que atinge anestesia profunda. NOTA: Receita de coquetel de anestesia de roedores: Cetamina HCl (66 mg/mL), xylazine HCl (6,6 mg/mL), acepromazina maleate (0,1 mg/mL), 18 MΩ de água para o volume final. Dose: 0,4 mg/g peso corporal, 0,04 mg/g peso corporal, 6 x 10-4 mg/g peso corporal para cetamina, xilazina e acepromazina, respectivamente.</li>
	<li>Configure a bomba peristáltica para perfusão transcárlica. Insira um lado da tubulação da bomba na garrafa com NMDG-aCSF gelado. Coloque o outro lado da tubulação com a agulha de 27 G que será inserida no ventrículo esquerdo.</li>
	<li>Coloque a velocidade da bomba em aproximadamente 3,5 mL/min. Nesta velocidade, o fluxo de saída do NMDG-aCSF é um fluxo rápido, não contínuo. NOTA: A perfusão por gravidade é um bom substituto para a perfusão da bomba peristáltica, desde que a mesma taxa de fluxo aproximada possa ser alcançada. Uma perfusão a alta vazão resultará em ruptura de vasos sanguíneos no cérebro. Um sinal de uma perfusão excessivamente rápida e aumento da pressão nos vasos sanguíneos é uma solução saindo do nariz do animal.</li>
	<li>Perfusão<ol>
<li>Coloque o mouse anestesiado corretamente em suas costas em uma fralda. Usando fita adesiva, fita para baixo suas pernas dianteiras e traseiras para que o peito e o abdômen sejam expostos.</li>
		<li>Corte um grande pedaço da pele no topo do peito, indo de baixo do esterno até a garganta; isso deve fornecer uma grande área de trabalho. Pegue o esterno com fórceps, levante suavemente e comece a cortar a caixa torácica em ambos os lados até que a cavidade torácica seja exposta.</li>
		<li>Corte o diafragma para expor a cavidade torácica. O retalho da caixa torácica deve ser deixado preso através de um fino pedaço de músculo. Deve ser possível colocá-lo em um lado sem tê-lo cair de volta sobre a cavidade torácica exposta. Verifique se o coração ainda está batendo. Certifique-se de que a maior parte do fígado é visível.</li>
		<li>Inserir a agulha de 27 G no ventrículo esquerdo; o ventrículo esquerdo do mouse parece mais leve em cores do que a direita. Localize o átrio direito de cor vermelha escura. Corte pelo átrio direito com uma tesoura pequena; o sangue deve começar a fluir para fora.</li>
		<li>Inicie a bomba que foi predefinida para a velocidade de fluxo correta. Se tudo foi feito corretamente, o fígado deve começar a mudar de cor de vermelho para marrom logo após o início da perfusão. Monitorar a cor hepática para determinar o comprimento da perfusão; o fígado deve ficar marrom pálido.</li>
		<li>Execute a bomba por mais alguns minutos. Se usar o termômetro retal, a temperatura corporal deve cair para 28\u201229 °C, e o nariz do animal deve estar frio ao toque.</li>
	</ol></li>
	<li>Extração cerebral. NOTA: Para esta etapa, tenha as seguintes ferramentas de dissecção prontas: tesoura de decapitação, tesoura pequena com lâmina reta ou angular, bisturi e #10 lâmina, lâmina de borda única, fórceps #3, espátula com um lado dobrado a 90°, uma espátula, uma ferramenta "60°"(Figura 1A,B),e uma pequena escova macia.<ol>
<li>Decapitar o rato com uma grande tesoura de decapitação. Usando um bisturi com #10 lâmina, abra a pele em cima do crânio. Com uma tesoura pequena em ângulo, corte o crânio na linha média. Em seguida, usando o #3 fórceps, retire as metades direita e esquerda do crânio, tomando cuidado para levar a dura com ele. O cérebro deve ser exposto agora. NOTA: Se a dura se desprender do crânio, ela permanecerá sobre o cérebro e terá que ser removida separadamente. As bordas da dura restante podem apertar e cortar profundamente através do cérebro, potencialmente danificando a região do cérebro de interesse.</li>
		<li>Remova o cérebro recolhendo-o com uma pequena espátula. Jogue o cérebro na solução NMDG-aCSF colocada em um pequeno béquer separado no gelo. Deixe lá por até um minuto. NOTA: Além da hipotermia, a exposição ao soro fisiológico gelado firma o cérebro, o que é necessário até mesmo para cortar. Todo o procedimento, desde a decapitação até a extração cerebral, deve ser inferior a 30 anos.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Fatiamento
<ol><li>Tire o cérebro do NMDG-aCSF e coloque-o em um pedaço de papel filtro.</li>
	<li>Corte e remova uma cunha de 60° da extremidade rostral do cérebro do cérebro usando uma ferramenta "60°" centrada na linha média. As superfícies cortadas serão usadas para montagem para alcançar o ângulo adequado para fatias hipocampais transversais conforme discutido abaixo (Figura 1A,B). NOTA: Duas lâminas de borda única mantidas juntas através de um suporte caseiro fazem uma ferramenta fácil de usar para fazer o corte de 60°(Figura 1A).</li>
	<li>Separe hemisférios abaixo da linha média com o bisturi.</li>
	<li>Cole os hemisférios no disco de montagem da seguinte forma. Pegue o disco de montagem que esteve no gelo até agora. Se necessário, limpe-o novamente. Cole cada hemisfério na frente do bloco de ágar, corte o lado para baixo.</li>
	<li>Certifique-se de que o lado ventral de cada hemisfério está tocando o bloco de ágar. O bloco de ágar fornece suporte adicional durante o corte e é essencial para fatias uniformes. Os lados dorsais de cada hemisfério devem estar voltados para a lâmina. Quando colado no lado do corte, cada hemisfério é orientado em relação à lâmina de uma forma que resulta em fatias transversais de hipocampo dorsal in situ(Figura 1B).</li>
	<li>Submergir o disco com hemisférios em uma câmara de corte contendo NMDG-aCSF caricaturado a frio do gelo.</li>
	<li>Corte seções de 400 μm. O corte deve ser feito em menos de 10 minutos. Diferentes microtomes exigirão diferentes configurações para alcançar este tempo. Um total de 8\u201210 fatias da região do hipocampo dorsal serão obtidas.</li>
</ol>4. Recuperação
<ol><li>Transfira fatias para uma câmara de recuperação contendo aCSF carbogenado à temperatura ambiente usando pipetas de transferência descartáveis com pontas de corte(Figura 1C). NOTA: É altamente recomendável fortificar a câmara de recuperação-aSCF com 5 mM Na-ascorbate e 3 mM Na-pyruate. Piruvato é um substrato de energia mostrado para impulsionar a produção de ATP em fatias28, enquanto Na-ascorbate é um quencher de radicais livres29.</li>
	<li>Incubar à temperatura ambiente (22\u201224 °C) por aproximadamente 2 h antes de gravar (até 4h). NOTA: Uma maior incubação à temperatura ambiente resulta em fatias mais saudáveis por períodos mais longos de tempo, em relação à incubação padrão a 37 °C por 30 minutos seguidos de incubação da temperatura ambiente. O reaquecimento a 37 °C pode introduzir edema citotóxico13.</li>
</ol>

<ol><li>Glanzman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+mechanisms+of+learning+in+Aplysia%3A+of+blind+men+and+elephants%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Bulletin%22%5BJournal%5D)">The cellular mechanisms of learning in Aplysia: of blind men and elephants.</a> Biological Bulletin. 210 (3), 271-279 (2006).</li>
<li>Aitken, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparative+methods+for+brain+slices%3A+a+discussion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscince+Methods%22%5BJournal%5D)">Preparative methods for brain slices: a discussion.</a> Journal of Neuroscince Methods. 59 (1), 139-149 (1995).</li>
<li>Edwards, F. A., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch-clamping+cells+in+sliced+tissue+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Patch-clamping cells in sliced tissue preparations.</a> Methods in Enzymology. 207 (13), 208-222 (1992).</li>
<li>Lowry, O. H., Passonneau, J. V., Hasselberger, F. X., Schulz, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Ischemia+on+Known+Substrates+and+Cofactors+of+the+Glycolytic+Pathway+in+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Effect of Ischemia on Known Substrates and Cofactors of the Glycolytic Pathway in Brain.</a> Journal of Biological Chemistry. 239, 18-30 (1964).</li>
<li>Lipton, P., Whittingham, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+hypoxia+on+evoked+potentials+in+the+in+vitro+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The effect of hypoxia on evoked potentials in the in vitro hippocampus.</a> Journal of Physiology. 287, 427-438 (1979).</li>
<li>Lipton, P., Whittingham, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+ATP+concentration+as+a+basis+for+synaptic+transmission+failure+during+hypoxia+in+the+in+vitro+guinea-pig+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Reduced ATP concentration as a basis for synaptic transmission failure during hypoxia in the in vitro guinea-pig hippocampus.</a> Journal of Physiology. 325 (1), 51-65 (1982).</li>
<li>Free Mandel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((H.S.+Free+nucleotides+of+the+brain+in+various+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">H.S. Free nucleotides of the brain in various mammals.</a> Journal of Neurochemistry. 8, 116-125 (1961).</li>
<li>Andjus, R. K., Dzakula, Z., Markley, J. L., Macura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+energetics+and+tolerance+to+anoxia+in+deep+hypothermia%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Brain energetics and tolerance to anoxia in deep hypothermia.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1048, 10-35 (2005).</li>
<li>Williams, G. D., Dardzinski, B. J., Buckalew, A. R., Smith, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modest+hypothermia+preserves+cerebral+energy+metabolism+during+hypoxia-ischemia+and+correlates+with+brain+damage%3A+a+31P+nuclear+magnetic+resonance+study+in+unanesthetized+neonatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Modest hypothermia preserves cerebral energy metabolism during hypoxia-ischemia and correlates with brain damage: a 31P nuclear magnetic resonance study in unanesthetized neonatal rats.</a> Pediatric Research. 42 (5), 700-708 (1997).</li>
<li>Gasparini, S., Losonczy, A., Chen, X., Johnston, D., Magee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+pairing+enhances+action+potential+back-propagation+in+radial+oblique+branches+of+CA1+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Associative pairing enhances action potential back-propagation in radial oblique branches of CA1 pyramidal neurons.</a> Journal of Physiology. 580 (3), 787-800 (2007).</li>
<li>Thomson, A. M., Bannister, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Release-independent+depression+at+pyramidal+inputs+onto+specific+cell+targets%3A+dual+recordings+in+slices+of+rat+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Release-independent depression at pyramidal inputs onto specific cell targets: dual recordings in slices of rat cortex.</a> Journal of Physiology. 519 (1), 57-70 (1999).</li>
<li>Hille, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+permeability+of+the+sodium+channel+to+organic+cations+in+myelinated+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Physiology%22%5BJournal%5D)">The permeability of the sodium channel to organic cations in myelinated nerve.</a> Journal of General Physiology. 58 (6), 599-619 (1971).</li>
<li>Ting, J., Daigle, T., Chen, Q., Feng, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTing%2C+J+%22Patch-Clamp+Methods+and+Protocols%22">Patch-Clamp Methods and Protocols</a>. Martina, M., Taverna, S. 1183, Springer. Ch. 14 221-242 (2014).</li>
<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+connectivity+among+morphologically+defined+cell+types+in+adult+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Principles of connectivity among morphologically defined cell types in adult neocortex.</a> Science. 350 (6264), 1-10 (2015).</li>
<li>Djurisic, M., Brott, B. K., Saw, N. L., Shamloo, M., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-dependent+modulation+of+hippocampal+synaptic+plasticity+via+PirB+and+endocannabinoids%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Activity-dependent modulation of hippocampal synaptic plasticity via PirB and endocannabinoids.</a> Molecular Psychiatry. 24 (8), 1206-1219 (2019).</li>
<li>Djurisic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PirB+regulates+a+structural+substrate+for+cortical+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+U+S+A%22%5BJournal%5D)">PirB regulates a structural substrate for cortical plasticity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 110 (51), 20771-20776 (2013).</li>
<li>Vidal, G. S., Djurisic, M., Brown, K., Sapp, R. W., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-Autonomous+Regulation+of+Dendritic+Spine+Density+by+PirB%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Cell-Autonomous Regulation of Dendritic Spine Density by PirB.</a> eNeuro. 3 (5), 1-15 (2016).</li>
<li>Blot, A., Barbour, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-rapid+axon-axon+ephaptic+inhibition+of+cerebellar+Purkinje+cells+by+the+pinceau%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Ultra-rapid axon-axon ephaptic inhibition of cerebellar Purkinje cells by the pinceau.</a> Nature Neuroscience. 17 (2), 289-295 (2014).</li>
<li>Lammel, S., Ion, D. I., Roeper, J., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Projection-specific+modulation+of+dopamine+neuron+synapses+by+aversive+and+rewarding+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Projection-specific modulation of dopamine neuron synapses by aversive and rewarding stimuli.</a> Neuron. 70 (5), 855-862 (2011).</li>
<li>Ting, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Acute+Brain+Slices+Using+an+Optimized+N-Methyl-D-glucamine+Protective+Recovery+Method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visual+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method.</a> Journal of Visual Experiments. (132), e53825(2018).</li>
<li>Moyer, J. R., Brown, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+whole-cell+recording+from+visually+preselected+neurons+of+perirhinal+cortex+in+brain+slices+from+young+and+aging+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Methods for whole-cell recording from visually preselected neurons of perirhinal cortex in brain slices from young and aging rats.</a> Journal of Neuroscience Methods. 86 (1), 35-54 (1998).</li>
<li>Losonczy, A., Magee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+properties+of+radial+oblique+dendrites+in+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Integrative properties of radial oblique dendrites in hippocampal CA1 pyramidal neurons.</a> Neuron. 50 (2), 291-307 (2006).</li>
<li>Frick, A., Magee, J., Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LTP+is+accompanied+by+an+enhanced+local+excitability+of+pyramidal+neuron+dendrites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">LTP is accompanied by an enhanced local excitability of pyramidal neuron dendrites.</a> Nature Neuroscience. 7 (2), 126-135 (2004).</li>
<li>Alvarado-Martinez, R., Salgado-Puga, K., Pena-Ortega, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+beta+inhibits+olfactory+bulb+activity+and+the+ability+to+smell%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Amyloid beta inhibits olfactory bulb activity and the ability to smell.</a> PLoS One. 8 (9), 75745(2013).</li>
<li>Brooks, J. M., O'Donnell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kappa+Opioid+Receptors+Mediate+Heterosynaptic+Suppression+of+Hippocampal+Inputs+in+the+Rat+Ventral+Striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Kappa Opioid Receptors Mediate Heterosynaptic Suppression of Hippocampal Inputs in the Rat Ventral Striatum.</a> Journal of Neuroscience. 37 (30), 7140-7148 (2017).</li>
<li>Goel, A., Lee, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+experience-induced+homeostatic+synaptic+plasticity+through+adulthood+in+superficial+layers+of+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Persistence of experience-induced homeostatic synaptic plasticity through adulthood in superficial layers of mouse visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 27 (25), 6692-6700 (2007).</li>
<li>Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+acute+hippocampal+slices+from+rats+and+transgenic+mice+for+the+study+of+synaptic+alterations+during+aging+and+amyloid+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visual+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology.</a> Journal of Visual Experiments. (49), e2330(2011).</li>
<li>Izumi, Y., Zorumski, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+pyruvate+following+NMDA-mediated+excitotoxic+insults+in+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of pyruvate following NMDA-mediated excitotoxic insults in hippocampal slices.</a> Neuroscience Letters. 478 (3), 131-135 (2010).</li>
<li>Hajos, N., Mody, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+physiological+environment+for+visualized+in+vitro+brain+slice+recordings+by+increasing+oxygen+supply+and+modifying+aCSF+content%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishing a physiological environment for visualized in vitro brain slice recordings by increasing oxygen supply and modifying aCSF content.</a> Journal of Neuroscience Methods. 183 (2), 107-113 (2009).</li>
<li>Fiala, J. C., Spacek, J. Hippocampus Rat. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://synapseweb.clm.utexas.edu/hippocampus-rat">https://synapseweb.clm.utexas.edu/hippocampus-rat</a> (1999).</li>
<li>Combe, C. L., Canavier, C. C., Gasparini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+Mechanisms+of+Frequency+Selectivity+in+the+Proximal+Dendrites+of+CA1+Pyramidal+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intrinsic Mechanisms of Frequency Selectivity in the Proximal Dendrites of CA1 Pyramidal Neurons.</a> Journal of Neuroscience. 38 (38), 8110-8127 (2018).</li>
<li>Rothman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurotoxicity+of+excitatory+amino+acids+is+produced+by+passive+chloride+influx%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The neurotoxicity of excitatory amino acids is produced by passive chloride influx.</a> Journal of Neuroscience. 5 (6), 1483-1489 (1985).</li>
</ol>

O autor não tem nada a revelar.

O protocolo descrito aqui demonstra que as fatias hipocampais obtidas de camundongos adultos e envelhecidos podem permanecer saudáveis e viáveis por muitas horas após o corte. As fatias preparadas usando este protocolo são apropriadas para gravações de grampos de remendo, bem como gravações de campo de longa duração nas regiões ca1.
Há dois passos críticos neste protocolo. O primeiro passo é o passo de perfusão transcárvia com uma solução gelada. A liberação rápida do sangue é sinalizada pela ...

O advento das preparações de fatias cerebrais agudas de mamíferos facilitou experimentos no nível celular e sináptico que antes eram possíveis apenas em preparações de invertebrados como a Aplysia1. O desenvolvimento de fatias hipocampais agudas foi de particular significado, pois é uma estrutura responsável pela formação da memória e do contexto, e possui um circuito tri-sináptico especializado que é amenable à fácil manipulação fisiológica. No entanto, a grande maioria das fatias cerebrais agudas ainda são preparadas a partir de camundongos e ratos relativamente jovens, pois é mais fácil preservar neurônios e circuitos saudáveis, e as fatias permanecem viáveis por períodos mais longos de tempo2,3,4. Aqui, introduzimos modificações nos protocolos de corte padrão que resultam em maior viabilidade de fatias hipocampais agudas de camundongos adultos e envelhecidos.
O principal impedimento para a viabilidade ex vivo a longo prazo do parenchyma cerebral mamífero é o dano hipóxico inicial que ocorre rapidamente quando o fluxo sanguíneo para o cérebro pára após a decapitação. A perda de oxigênio resulta no rápido consumo metabólico dos principais recursos energéticos do cérebro, sendo a perda de fosfo-creatina (P-creatina) a mais rápida, seguida por glicose, adenosina triptofato (ATP) e glicógeno4. A preservação da ATP é de particular importância para a saúde a longo prazo das fatias cerebrais, pois a ATP é necessária para manter o potencial de membrana através do ATPase Na-K e, consequentemente, da atividade neural5,,6. O nível ATP no cérebro de roedor adulto é de ~2,5 mM, e cai vertiginosamente dentro de 20 s de decapitação para alcançar um estado basal estável (~0,5 mM) em torno de 1 min pós-decapitação4,,7,,8. Em animais jovens, leva mais tempo para observar a mesma queda em ATP (~2 min); com anestesia fenobarbital é ainda mais retardada para 4 min4. Essas considerações mostram que prevenir a perda de ATP e outros recursos energéticos é uma estratégia necessária para evitar danos hipóxicos ao cérebro e, por sua vez, manter a saúde das fatias cerebrais por períodos mais longos de tempo, especialmente em animais adultos.
Baixas temperaturas atrasam o metabolismo. Consequentemente, foi demonstrado que a hipotermia modesta protege as reservas de energia cerebral: em animais jovens, reduzindo a temperatura corporal em seis graus, de 37 °C para 31 °C, preserva os níveis de ATP para cerca de 80% dos níveis normais acima de 4h de hipóxia controlada9. Os níveis de p-creatina são igualmente preservados, bem como o potencial global de fosforilação9. Isso sugere que a redução da temperatura corporal antes da decapitação pode ser neuroprotetora, uma vez que os níveis quase normais de ATP poderiam ser mantidos através dos períodos de corte de fatias e recuperação de fatias.
Na medida em que uma queda de ATP não pode ser completamente impedida após a decapitação, espera-se uma função parcialmente prejudicada do ATPase Na-K, seguida de despolarização via influxo passivo de sódio. Como o fluxo passivo de sódio é seguido pela entrada de água nas células, causa edema citotóxico e, eventualmente, pyknose. Em ratos adultos, substituir íons Na+ por sacarose em soluções de corte de fatias tem sido uma estratégia bem sucedida para aliviar a carga do edema citotóxico10,11. Mais recentemente, as cáras orgânicas metiladas que diminuem a permeabilidade do canal de sódio12 têm mostrado oferecer proteção mais eficaz do que a sacarose, especialmente em fatias de camundongos adultos, com n-metil-D-glucamine (NMDG) sendo mais amplamente aplicável em diferentes idades e regiões cerebrais13,,14,,15,,16.
Numerosos protocolos de corte cerebral envolvem o uso de temperaturas frias apenas durante a etapa de corte de fatias, às vezes em combinação com a estratégia de substituição de íons Na+ 16,17. Em animais jovens, esses protocolos parecem oferecer neuroproteção suficiente, uma vez que os cérebros podem ser extraídos rapidamente após a decapitação porque o crânio ainda é fino e fácil de remover3. No entanto, essa estratégia não produz fatias saudáveis de animais adultos. Com o tempo, vários laboratórios que estudam roedores adultos introduziram perfusão transcárrica com uma solução gelada para diminuir a temperatura corporal do animal e, portanto, danos hipóxicos ao cérebro, antes da decapitação. Este procedimento foi aplicado com sucesso para produzir fatias cerebelares18, fatias de cérebro médio19, fatias neocorticais11,20, córtex perirhinal21, hipocampo de rato10,22,23, bulbo olfativo24, estriado ventral25, córtex visual26.
Apesar das vantagens oferecidas pela perfusão transcárdia e substituiçãode íons na preparação de fatias de ratos e em algumas regiões cerebrais em camundongos, o hipocampo de camundongos continua sendo uma das áreas mais desafiadoras para proteger da hipóxia13,20. Até o momento, uma das abordagens mais comuns para cortar hipocampo de camundongos envelhecidos e modelos de camundongos de neurodegeneração envolve o corte rápido clássico do hipocampo isolado27. No protocolo aqui descrito, minimizamos a perda de ATP no cérebro adulto introduzindo hipotermia antes da decapitação, perfumando transcardialmente o animal com Na+- fluido cerebrospinal artificial à base de NMDG (NMDG-aCSF). As fatias são então cortadas em Na+-free NMDG-aCSF. Com este protocolo aprimorado, obtemos fatias hipocampais agudas de camundongos adultos e envelhecidos que são saudáveis por até 10 h após o corte e são apropriados para gravações de campo de longo prazo e estudos de grampo de remendo.

<table><tbody><tr><td>" 60 graus" ferramenta</td><td>feita internamente</td><td></td><td></td></tr> <tr><td># 10 lâmina de bisturi</td><td>Bard-Parker (Aspen Surgical)</td> <td>371110</td><td></td></tr><tr><td>1M CaCl 2</td> <td>Fluka Analytical</td><td>21114</td><td></td></tr><tr><td>95% O2 / 5% CO2</td><td>Praxiar ou outro fornecedor</td><td></td><td></td>local</tr><tr><td>Maleato de acepromazina (AceproJect)</td> <td>Henry Schein</td><td>5700850</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher</td><td>BP1423-500</td><td></td></tr><tr><td>Béqueres, cilindros de medição, frascos</td><td></td><td></td><td></td>de reagentes</tr><tr><td>Escovas tamanho 00-2</td><td>As lojas Ted Pella</td><td></td><td>Crafts são outra fonte de escovas macias, com maior seleção e melhor qualidade do que Ted Pella.</td></tr><tr><td>Câmera CCD</td><td>Olympus</td><td>XM10</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de colina</td><td>Pfalz & Bauer</td><td>C21240</td><td></td></tr><tr><td>Cola de cianoacrilato</td><td>Cola</td><td></td> Krazy <td>Tesouras</td></tr> de <tr><td>decapitação</td><td>simples FST</td><td>14130-17</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de penas</td><td>Pena</td><td>FA-10</td><td></td></tr><tr><td>Papel de filtro #2</td><td>Whatman</td><td></td><td>Rodadas ou pedaços cortados de uma folha maior funcionam bem.</td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>A. Dumont & amp Fils</td><td>Inox 3c</td><td></td></tr><tr><td>Bubblers de vidro (velas de microfiltro borosicicado de vidro Robu) - porosidade 3</td><td>Robuglas.com</td><td>18103 ou 18113</td><td>Os borbulhadores de vidro são mais caros do que as pedras borbulhantes usadas em aquários. No entanto, eles são fáceis de limpar e esterilizar e podem durar muito tempo.</td></tr><tr><td>Glicose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Fisher</td><td>A144SI-212</td><td></td></tr><tr><td>Baldes</td><td></td><td></td><td></td>de gelo</tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4504</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina HCl (KetaVed)</td> <td>VEDCO</td><td>NDC 50989-996-06</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td></td></tr><tr><td>Fatiador de tecidos Leica VT1000S</td><td></td><td></td><td>As configurações de corte são amplitude horizontal da lâmina de 1 mm, seletor de frequência em 9 e ajuste de velocidade em 2</td></tr><tr><td>agitadores magnéticos e barras</td><td></td><td></td><td></td>de agitação</tr><tr><td>Mg2SO4 x 7H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>230391</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr>Máquina <td>de água MilliQ</td> Fonte <td>Millipore</td><td></td><td>para 18 Mohm água</td></tr><tr><td>Na-ascorbato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4035</td><td></td></tr><tr><td>Na-piruvato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8574</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>EMD</td><td>SX0320-1</td><td></td></tr><tr><td>Agulha 27G1/2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NMDG</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2004</td><td></td></tr><tr><td>Fita</td><td></td><td></td><td></td>de papel</tr><tr><td>Bomba peristáltica</td><td>Cole-Parmer</td><td>#7553-70</td><td></td></tr><tr><td>Cabeça de bomba peristáltica</td><td>Cole-Parmer</td><td>Masterflex #7518-00</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas</td><td></td> Personna <td>Personna de borda dupla</td><td>Amazon</td></tr><tr><td>Medidor</td><td></td><td></td><td></td> de pH</tr><tr><td>Câmara de recuperação</td><td>feita</td><td></td><td></td>internamente</tr><tr><td>Lâmina de bisturi tamanho do cabo 3</td><td>Bard-Parker (Aspen Surgical)</td><td>371030</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina angular de tesoura</td><td>FST</td><td>14081-09</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina de barbear industrial de borda única #</td>9 <td>VWR</td><td>55411</td><td></td></tr><tr><td>Espátulas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de transferência</td><td>Samco Scientific</td><td>225</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio vertical</td><td>Olympus BX51WI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine HCl (XylaMed)</td><td>VetOne</td><td>510650</td><td></td></tr></tbody></table>

minimizando a hipóxia em fatias hipocampais de camundongos adultos e envelhecidos

Minimizing Hypoxia in Hippocampal Slices from Adult and Aging Mice

As fatias agudas de hipocampal permitiram que gerações de neurocientistas explorassem propriedades sinápticas, neuronais e circuitos em detalhes e com alta fidelidade. A exploração de mecanismos LTP e LTD, a computação dendrítica de neurônio único e as mudanças dependentes da experiência nos circuitos não teriam sido possíveis sem esta preparação clássica. No entanto, com algumas exceções, a pesquisa mais básica usando fatias de hipocampal agudas tem sido realizada usando fatias de roedores de idades relativamente jovens, ~P20-P40, embora mecanismos de excitabilidade sináptica e intrínseca tenham uma longa cauda de desenvolvimento que ultrapassa p60. O principal apelo do uso de jovens fatias hipocampais é a preservação da saúde neuronal auxiliada pela maior tolerância aos danos hipóxicos. No entanto, é preciso entender a função neuronal em estágios mais maduros de desenvolvimento, ainda mais acentuados pelo desenvolvimento de vários modelos animais de doenças neurodegenerativas que requerem uma preparação cerebral envelhecida. Aqui descrevemos uma modificação em uma preparação aguda de fatia hipocampal que fornece fatias saudáveis de hipocampi de camundongos adultos e envelhecidos. Os passos críticos do protocolo são a perfusão transcárdica e o corte com NMDG-aSCF sem sódio frio. Juntos, essas etapas atenuam a queda induzida pela hipóxia no ATP após a decapitação, bem como o edema citotóxico causado por fluxos passivos de sódio. Demonstramos como cortar fatias transversais de hipocampo mais córtex usando um microtoma vibrante. As fatias hipocampais agudas obtidas desta forma são confiáveis e saudáveis ao longo de muitas horas de gravação, e são apropriadas tanto para gravações de campo quanto para gravações direcionadas de grampos de remendo, incluindo o alvo de neurônios fluorescentes rotulados.

Aplicamos o protocolo acima para gerar fatias de hipocampo da CamKIIa-Cre+; Camundongos WT em um fundo genético misto C57Bl/ 6 x SV/ 129J, em P &gt; 120. Um grande número de células piramidas no campo CA1 (Figura 2A) e subículo (Figura 2B) aparecem em baixo contraste quando observadas sob microscopia de contraste diferencial infravermelho (IR-DIC), uma marca registrada de células saudáveis em uma preparação de fatias. Com esta preparação, uma alta taxa de selos ...

Este é um protocolo para preparação aguda de fatias de hipocampi de camundongos adultos e envelhecidos que se aproveita da perfusão transcárrica e corte de fatias com NMDG-aCSF gelado para reduzir danos hipóxicos ao tecido. As fatias resultantes permanecem saudáveis durante muitas horas, e são adequadas para grampos de remendo de longo prazo e gravações de campo.

Minimizando a hipóxia em fatias hipocampais de camundongos adultos e envelhecidos

Acute hippocampal slices have enabled generations of neuroscientists to explore synaptic, neuronal, and circuit properties in detail and with high ...

O protocolo aqui apresentado diminui danos hipóxicos excessivos durante a preparação de fatias hipocampais de camundongos adultos e envelhecidos, removendo assim um grande obstáculo para estudar a função de circuitos neurais maduros e envelhecidos. A introdução de hipotermia em soluções livres de sódio resulta em fatias hipocampais saudáveis por até 10 horas após o corte e apropriadas tanto para os estudos de registro de campo de longo prazo quanto para patch-clamp. Este método de preparação de fatias hipocampais pode ser particularmente relevante para modelos animais em doenças neurodegenerativas que, por definição, requerem uma preparação cerebral envelhecida.O passo mais crítico neste protocolo é introduzir hipotermia via profusão transcárquia com uma solução gelada. Com alguma prática, os pesquisadores poderão executar essa etapa de forma confiável. Comece preparando um litro de solução aCSF para a câmara de recuperação e gravações subsequentes.Em seguida, prepare 300 mililitros de NMDG-aCSF para a profusão transcárvia e etapas de corte. Coloque a bandeja de corte de microtóme vibrante e o disco de montagem em um congelador de menos 20 graus Celsius. Para preparar a câmara de r

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este artigo descreve procedimentos para preparar fatias do hipocampo de ratos e camundongos transgênicos para o estudo de alterações sinápticas do cérebro associadas ao envelhecimento e relacionadas com a idade as doenças neurodegenerativas, como doença de Alzheimer.

Preparação de fatias do hipocampo aguda de ratos e camundongos transgênicos para o Estudo das Alterações Synaptic durante o envelhecimento e amilóide Patologia

Este trabalho apresenta uma metodologia completa para se preparar e...

Melhoria da preparação e preservação de fatias do hipocampo de camundongos para uma gravação muito estável e reprodutível de potenciação de longa duração

Este artigo em vídeo descreve procedimentos experimentais para estudar a plasticidade de longo prazo e seus processos associativos, como marcação sináptica, captura e marcação cruzada nos neurônios piramidais CA1 usando fatias agudas do hipocampo de roedores.

Investigação de Synaptic Tagging / Captura e-captura Cruz usando aguda fatias do hipocampo de roedores

Este protocolo demonstra a implementação de um otimizado N-metil-D-glucamine (NMDG) método de recuperação protetora de preparação de fatia do cérebro. Uma formulação única mídia é usada para obter confiavelmente fatias de cérebro saudável de animais de qualquer idade e para diversas aplicações experimentais.

Preparação de fatias de cérebro aguda usando um otimizado N-metil-D-método de proteção de recuperação glucamine

Culturas de fatias hippocampal organotypic (OHSC) representam um modelo in vitro que simula a situação na vivo muito bem. Aqui descrevemos uma vibratome de base melhorada fatiar protocolo para obter fatias de alta qualidade para uso em avaliar o potencial neuroprotetor do romance substâncias ou o comportamento biológico das células tumorais.

Organotypic fatias Hippocampal culturas como um modelo para estudo neuroproteção e invasão de células tumorais

Um protocolo para com precisão, identificando e analisando as sinapses em fatias hippocampal usando a imunofluorescência é descrito neste artigo.

Avaliação da densidade de sinapse em fatias Hippocampal cérebro de roedor

Este protocolo descreve a preparação de fatias horizontais do córtex hipocampal-entorhinal (HEC) de camundongos que exibem atividade espontânea de ondulação de ondas afiadas. As fatias são incubadas em uma câmara de realização de interface simplificada e as gravações são realizadas em condições submersas com fluido cerebrospinal artificial de fluxo rápido para promover a oxigenação tecidual e o surgimento espontâneo da atividade em nível de rede.

Corte cerebral aguda do rato para investigar atividade espontânea da rede hipocampal

Este artigo tem como objetivo descrever um protocolo sistemático para obter fatias cerebrais hipocampais horizontais em camundongos. O objetivo desta metodologia é preservar a integridade das vias de fibra hipocampal, como o caminho perfurante e o trato de fibra de musgo para avaliar processos neurológicos relacionados ao giro dento.

Fatias hipocampais horizontais do cérebro do rato

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Preparação de fatias agudas do hipocampo dorsal para gravação de células inteiras e reconstrução neuronal no giro dentado de camundongos adultos

A taxa de consumo de oxigênio (OCR) é um proxy comum para a função mitocondrial e pode ser usada para estudar diferentes modelos de doenças. Desenvolvemos um novo método usando um analisador Seahorse XF para medir diretamente o OCR em fatias estriatais agudas de camundongos adultos que é mais fisiologicamente relevante do que outros métodos.

Medição da taxa de consumo de oxigênio em fatias estriatais agudas de camundongos adultos

Aprenda a minimizar danos hipóxicos em fatias hipocampais de camundongos adultos e envelhecidos usando perfusão transcardíaca com NMDG-aCSF gelado. Este método mantém a viabilidade celular por até 10 horas para estudos eletrofisiológicos de longa duração.

Minimizando a hipóxia em fatias hipocampais de camundongos adultos e envelhecidos

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