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DNAzyme 10-23 - Nanomáquinas baseadas para reconhecimento de ácidos nucleicos
DNAzyme 10-23 - Nanomáquinas baseadas para reconhecimento de ácidos nucleicos
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JoVE Journal Biochemistry
DNAzyme 10-23 – Based Nanomachines for Nucleic Acid Recognition

DNAzyme 10-23 - Nanomáquinas baseadas para reconhecimento de ácidos nucleicos

Full Text
1,510 Views
07:16 min
February 9, 2024

DOI: 10.3791/66461-v

Pavel V. Filatov1, Muhannad Ateiah1, Maria Y. Berezovskaya1, Maria S. Rubel1, Dmitry M. Kolpashchikov2

1ITMO University, 2University of Central Florida

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

As nanomáquinas baseadas em DNAzyme podem ser usadas para detecção altamente seletiva e sensível de ácidos nucléicos. Este artigo descreve um protocolo detalhado para o projeto de nanomáquinas baseadas em DNAzyme com um núcleo 10-23 usando software livre e sua aplicação na detecção de um fragmento de vírus Epstein-Barr como exemplo.

O maior avanço que nosso laboratório fez no campo da sonda de hibridização foi feito em 2007 por Dmitry Kolpashchikov, que sugeriu uma ADL dividindo as sondas de hibridização em metades avaliando cada uma das metades de sua própria função, por exemplo, aumentando a seletividade para incompatibilidades e variações de nucleotídeo único junto com o desenrolamento de sondas complexas. O segundo avanço foi feito uma década depois, quando foi sugerido adicionar braços de ligação multicomponentes adicionais. Junto com a plataforma Unitan.

Esses projetos foram capazes de funcionar mesmo com alvos complexos, por exemplo, ácidos nucléicos de fita dupla e ácidos nucléicos altamente estruturados. Os maiores desafios que nosso laboratório enfrenta agora vêm do problema da baixa sensibilidade dos nanossensores de DNA em comparação com as técnicas convencionais de amplificação. Até agora, os nanossensores de DNA em ensaio livre de amplificação apresentam baixa seletividade, e estamos tentando superar esse problema com novos designs moleculares e novas formas de detecção de nano sensores de DNA.

As principais vantagens de nossos sensores de DNA são sua sensibilidade em termos de baixa concentração detectada do analito e seletividade. Por exemplo, sua capacidade de detectar polimorfismo de nucleotídeo único Também como uma vantagem em comparação com outras técnicas de diagnóstico. Nossos sensores de DNA são capazes de desenrolar e detectar estruturas complexas de RNA e DNA de fita dupla.

A nova questão científica, nossos resultados abriram o caminho é: é possível encontrar DNA de fita dupla usando adereços de hibridização livres de proteínas? O suporte independente de proteína pode ser facilmente acessível por síntese automatizada de DNA, mais fácil de ser entregue nas células e ser compatível com modificação química e nanoestruturas complexas desenvolvidas por nanotecnologia de DNA combinada com enzimas de DNA, como lipídios Dnase e enzimas de DNA. Tal suporte pode se tornar uma base para nucleases livres de proteínas, uma ferramenta útil para edição e terapia de genes.

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