Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

Abstract

Источник: Zhang, G. L., et al. Ортотопическая инъекция клеток рака молочной железы в жировую подушку молочной железы мышей.J. Vis. Exp. (2019).

В этой статье мы обсудим, как создать модель рака молочной железы у самок мышей путем введения клеток рака молочной железы в жировую подушку молочной железы. В примере протокола показана ортотопическая инъекция.

Protocol

Эксперименты на животных проводились в соответствии с Положением и Общей рекомендацией Китайского законодательства по управлению экспериментальными животными и были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию Столичного медицинского университета (Ref no. AEEI-2014-052). Использовались самки мышей Balb/c в возрасте от 6 до 8 недель.

1. Подготовка клеток и животных

1. За сутки до операции сбрейте волосы вокруг четвертого соска, чтобы обнажить операционную зону.
   1. Используйте одну руку, чтобы крепко держать мышь сзади, чтобы убедиться, что мышь не будет свободно двигаться, поверните мышь, чтобы обнажить ее брюхо перед оператором, а затем используйте другую руку, чтобы сбрить шерсть вокруг четвертых сосков с помощью электронной бритвы.
   2. Нанесите тонкий слой крема для эпиляции вокруг сосков на 30 – 60 с, смойте крем дистиллированной водой, а затем высушите мышку мягкой бумагой.
2. В день операции соберите клетки рака молочной железы у мышей (4T1-luc2), подсчитайте количество клеток и отрегулируйте плотность клеток до 2 x 10⁵ клеток/мл в фосфатно-солевом буфере (PBS) в стерильных микроцентрифужных пробирках и держите их на льду. Для каждой мыши готовят 1 х^{10 4} клетки/50 мкл в шприце объемом 1 мл.

2. Ортотопическая инъекция

1. Обезболивание мышей
   1. Вызвать анестезию. Поместите мышей в закрытый прозрачный контейнер и включите 2% газ изофлуран для обезболивания мышей примерно на 5 минут, пока они все не лягут и не заснут.
   2. Поддерживайте анестезию. Переложите мышей из контейнера в индивидуальные маски для анестезии, нанесите немного ветеринарной мази на их глаза, чтобы избежать сухости, держите мышей на спине, подставив соски к оператору, и дайте им продолжать вдыхать газ изофлуран в течение нескольких минут, пока не будет выполнена инъекция.
   3. Подтвердить успешность обезболивания можно отсутствием рефлекса отмены при защемлении пальца ноги.
   4. Нанесите офтальмологическую мазь на глаза мышей, чтобы предотвратить сухость глаз.
      ПРИМЕЧАНИЕ В зависимости от размера контейнера и количества доступных индивидуальных масок для анестезии, группу мышей можно обезболить вместе и вводить по одной под индивидуальной анестезией.
2. Эффективность инъекции
   1. Используйте одну руку, чтобы закрепить кожу вокруг четвертого соска пинцетом, чтобы создать приподнятый «туннель», по которому будет следовать шприц. Другой рукой держите шприц иглой вверх, чтобы ввести в кожу подкожно на расстоянии 5 – 10 мм от соска; Затем следуйте по «туннелю», пока кончик иглы не приблизится к соску, осторожно переместите кончик иглы вверх в жировую подушку молочной железы, пока ушко иглы не войдет под кончик соска, выбросьте пинцет и медленно вводите клетки.
   2. Немного поверните иглу вокруг иглы и медленно втяните шприц; ватным тампоном прижмите рану иглы в течение 10-20 с, чтобы убедиться в отсутствии просачивания жидкости.
   3. Посмотрите на четвертый сосок, чтобы убедиться в успешном уколе: можно наблюдать одну белую прозрачную плоскую сферу с соском в центре (Рисунок 1).
3. Держите мышей под наркозом еще минуту, чтобы они не пришли в себя и не двигались слишком быстро, что приведет к открытию инъекционной раны и утечке опухолевых клеток.

Рисунок 1: Фотографии до и после ортотопической инъекции в жировую подушку молочной железы самок мышей Balb/c. Операция была выполнена, а снимки были сделаны в то время, когда мыши находились под анестезией изофлураном. А, до инъекции, Б, после инъекции.

Materials

anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
 isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	–	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	–	ophthalmic ointment