Мелких животных модель Ex Vivo нормотермических печени перфузии

Есть 14,578 больных в листе ожидания для трансплантации печени и приблизительно 7.000 пересадки выполняются за год^1,2. В ответ на этой нехватки доноров расширили критерии для печени доноров; они часто называют маргинальных органов или расширенные критерии доноров и, как ожидается, для выполнения менее хорошо после трансплантации, чем стандартные критерии аллотрансплантантов, с более высокими ставками первичных трансплантата дисфункции и задержки трансплантата функция^{3, 4,5,6}. В результате NEVLP была введена как метод для оценки и изменения функции органа^6,7. Мы разработали модель крыса NEVLP и использовал эту модель для демонстрации одной из ее важных потенциальных – тестирование приложений Роман молекулы добавок к печени perfusate.

NEVLP был оценен как Мурина (Крыса), так и свинину модели, а также в брошенные человеческие органы^6,8,9. Результаты первого испытания на человеке NEVLP были также недавно опубликованный¹⁰. Хотя явно гипотермического машина перфузии стал стандартом для сохранения почек, температура, при которой печени машина должна происходить перфузии остается спорным. NEVLP имеет много предлагаемые преимущества по сравнению с гипотермического и subnormothermic перфузии. К ним относятся сокращение сохранения травмы, восстановление нормальной орган функции в физиологических условиях, возможность оценить производительность орган и как платформа для органа ремонта, реконструкции и модификации^{7,11, 12,13,14,,1516,17}.

Значительное количество исследований были завершены с использованием свиных NEVLP моделей. Хотя эти модели являются сравнительно недорогой, при рассмотрении модели с помощью органов человека или клинические испытания на человеке, они являются очень дорогими по сравнению с нашей небольшой животных NEVLP модели. Важным компонентом в эксперимент стоит perfusate. Мы в состоянии выполнить 4 h перфузии с 300 мл perfusate при относительно низких затратах. Кроме того стоимость мелких животных, включая крысы является очень низким по сравнению со стоимостью свиней.

По сравнению с других моделей NEVLP в крыса модель, представленная здесь относительно прост в реализации и имеет широкий спектр применения. Перфузии цепи можно увидеть на рисунке 1. Perfusate начинается в perfusate водохранилище (1), который является контейнером с рубашкой воды. Perfusate вытащил из водохранилища с помощью валика насоса (2) и толкнул в windkessel (3), а затем Оксигенатор (4). Оксигенатор устанавливается противоточный газа и perfusate потока для обеспечения максимальной газообмена. Perfusate затем приступает к Отопление катушки (5) внутри камеры перфузии для обеспечения его физиологического температуре, и Пузырь ловушки (6) для предотвращения перфузии пузырьков воздуха там до органа (7) и после органа (8) образца порты, которые позволяют perfusate быть пробы. Perfusate затем поступает через канюлю воротной вены печени. Канюля воротной вены прилагается к давление монитор, что диаграммы значения на программное обеспечение сбора данных. Perfusate затем выходит из печени через канюлю МКВ и впадает в блоке эквалайзер давления (9). Наконец perfusate вытащил из блока давления обратно через насос ролик и опорожняется в водохранилище. Эта модель включает в себя непрерывное перфузии в воротной вены и оставляет пульсирующего поток печеночной артерии и диализа, используемых в некоторых других моделей, каждая из которых требует отдельного и дополнительного цепи, но показали, ранее, чтобы не быть необходимые^9,13.

Чтобы исследовать дополнение Роман терапевтические молекулы perfusate, мы выбрали фермента каталазы. Каталаза является эндогенного мусорщик ROS, которая является частью клетки внутренней обороны механизма для смягчения последствий ROS¹⁸. Каталаза выражение увеличение печени ишемии реперфузионных повреждений¹⁹. Для уменьшения ишемии реперфузии в глаз, головного мозга и легких^{20,21,22,,2324}была продемонстрирована экспериментальная дополнением каталазы. Было показано, что ПЭГилирование целевой каталазы в эндотелия и помощь в освоении каталазы в эндотелиальных клеток²⁵. ПЭГ-CAT находится под управлением системно, с ограниченной эффективности в снижении печеночная ишемии реперфузии травмы; Однако мы предположили, что добавление PEG-CAT к цепи перфузии изолированной органа приведет к улучшению результатов^26,27,28. Здесь, мы добавляем PEG-CAT для нашей базы perfusate и продемонстрировать его способности смягчить травмы печени сохранения.

Все процедуры были выполнены согласно указаниям институциональный уход животных и Национальный исследовательский совет руководство для гуманного ухода и использования лабораторных животных (IACUC) и претерпела утверждения IACUC университета Огайо государственного комитета.

1. Начальная настройка

1. Приготовляют раствор перфузии, объединяя следующие: 86 мл 25% альбумина, 184 мл Уильямс средств массовой информации, 30 мл пенициллина/стрептомицина (10 ед/мл пенициллин и 0,01 мг/мл стрептомицина), инсулин (50 U/L), гепарином (0.01 ед/мл), L-глютамин (0,292 г/Л), и гидрокортизон (0,010 г/Л) в суммарный объем 300 мл. Базовый perfusate, ПЭГ-CAT группы и добавьте 625 ед/мл PEG-Cat.
   1. Буферного раствора perfusate, с помощью трис (гидроксиметил) aminomethane (THAM) до рН 7,4. Используете машину газов артериальной крови для подтверждения perfusate рН.
2. Настройка цепи (рис. 1).
   1. Включите теплую ванну водой и установите его в 37 ° C. Позвольте камере орган для разминки.
   2. Вылить смешанные и буферизации perfusate в водохранилище и начать распространение.
      Примечание: Perfusate, упомянутых в этом шаге был подготовлен на шаге 1.1.1.
   3. Включите кислородом газ (95% кислорода и 5% двуокиси углерода) в счетчик потока через Оксигенатор в линии.
   4. Включите программное обеспечение сбора данных и нажмите кнопку «Пуск», чтобы записать в течение всего эксперимента.
3. Настройка хирургический микроскоп и операционной комнате (рис. 2).
   1. Включите все оборудование, включая Совет потепления, электрокоагуляции, анестезии и жизненно важные признаки (сердца и кислорода насыщения) мониторинг оборудования.
      Примечание: Микроскоп параметры будут зависеть от Микроскоп используется и может быть скорректирована для комфорта пользователя.
   2. Заполните шприц 10 мл анестезии с 10 мл жидкой изофлюрановая для ингаляции (молекулярная масса 184.5 г/моль) и место в группе анестезии.
   3. Поместите шприц 0,5 мл гепарина (50 ед), хирургические инструменты, 4-0 и 7-0 Шелковый шов, стерильные ватные тампоны и 4 x 4 см нетканый марлевые губки надлежащим образом (рис. 2).
4. Подготовьте изофлюрановая камеры.

2. индукции анестезии

1. Носить следующие средства индивидуальной защиты (СИЗ): хирургические маски, хирургические перчатки, одноразовые платье.
2. Взвешивание крыс.
   Примечание: Мы используем крысах Sprague-Dawley между 250-350 г.
3. Включите компрессор кислорода и изофлюрановая. Поместите крыса, после весил, в изофлюрановая камеру и закрепите крышку. Вызвать обезболивание с помощью 6% изофлюрановая поставляется с 2 Л/мин кислорода.
   Примечание: Точное изофлюрановая дозы, используемой будет зависеть от используемой системы конкретных анестезии.
4. Использование электронных Клипперс обрезать волосы животного брюшной.
5. Замените животного в изофлюрановая камере.
6. Включите блок анестезии, расположенный в операционной комнате.
7. Удаление крысы из изофлюрановая камеры при анестезии полностью индуцируется. Подтвердите глубины анестезии с помощью щепотку мыс.

3. закупки процедура

1. Подготовьте 16 G портала манжеты (рис. 3).
   1. Начинаются с 16 G angiocatheter. Вырежьте часть трубы 7 мм. Определить середину секции 7 мм, измеряя 3,5 мм. Incise на середину и снимите переднюю половину трубы.
   2. Используйте зажим для раздавить это теперь плоская часть. Используйте зажигалку таять на другом конце angiocatheter для создания губ. Место кончике непосредственно в пламени или он будет воспламеняться.
2. Подготовьте канюля желчных протоков.
   1. Возьмите angiocath 27 G и отрезали инъекционным портом, оставив только катетер. Подключите это 10 см раздел 27 G cannular труб.
3. Позиция Крыса с его носом в анестезии носовой конус и ее четыре конечности прикол. Контролировать жизненно важные признаки подключив монитор к левой задние конечности. Выполните щепотку мыс, чтобы подтвердить соответствующие глубины анестезии. Продолжить анестезии на 4% изофлюрановая (для животных, которые весят > 250 g).
4. Spray животного живота с 70% изопропиловый спирт. Дайте высохнуть. Место стерильным драпировка над животным.
5. Сделайте срединной разрез от мечевидного лобка с помощью острых ножниц и проходящий через кожу (рис. 4). Осторожно введите брюшины и надрезать мышцы. Позаботьтесь, чтобы избежать повреждения мочевого пузыря в нижней аспект этого разреза и печени в Улучшенный аспект этого разреза.
6. Расширить разрез сбоку слева и справа в форме креста на уровне нижней границы печени.
7. Поверните анестезии до 2% (для животных весом > 250 g).
8. Отказаться от мечевидного отростка, с использованием хомут изогнутые комаров и ребра, используя ребро ретракторы (рис. 5).
9. Вырезать серповидной, диафрагмальный и gastrohepatic связки с острыми ножницами.
10. Найдите и галстук офф диафрагмальный вен с 7-0 шва как недалеко от его происхождения, как можно предотвратить протечки.
11. Потрошение крыса, используя аппликатор наконечник стерильным хлопка смоченной и завернуть в марлю, смоченную 0,9% нормальное saline кишечника. Будьте осторожны чтобы не растянуть сосудистую тонкой кишки.
12. Вскрыть над нижней полой вены (IVC), чтобы удалить излишки ткани. Вскрыть за просто превосходит бифуркации МКВ и пройти цикл 4-0 Шелкового шва для последующего использования (рис. 6).
13. Убрать правой почки оказывать воздействия на право надпочечниковой Вены. Убрать правой доли печени сверху марлей. Галстук с право надпочечниковой Вены с Шелковый шов 7-0, как можно ближе к IVC как можно скорее и прижечь через его дистальнее галстук (рис. 7).
14. Тщательно анализировать, селезеночной вены, связать его с помощью двух 7-0 шелковыми швами и пересекают его между двумя швами.
15. Галстук с и перевязать дополнительные вен с помощью 7-0 Шелковый шов для дополнительной длины на воротной вены, при необходимости.
    Примечание: Иногда существуют мелкие ветви infrahepatic IVC между правом надпочечниковой Вены и уступает печени.
16. Вскрыть вокруг гастродуоденальной артерии, галстук с гастродуоденальной артерии с Шелковый шов 7-0 и перевязать гастродуоденальной артерии.
17. Вскрыть вокруг печеночной артерии и затем поместите 7-0 Шелковый шов галстук вокруг него (рис. 8).
18. Вскрыть из желчных протоков.
    1. Проверьте длину желчных протоков. Галстук с желчных протоков на дистальном конце с помощью 7-0 Шелковый шов. Место в цикле 7-0 Шелкового шва вокруг желчных протоков проксимально как можно скорее.
    2. Вырезать отверстие, что составляет половину диаметра протоков малых ножницами и 27 G катетер в желчных протоков проксимально. Галстук катетер на месте с помощью римские сандалии галстук шов (рис. 9).
19. Inject 0,5 мл гепарина (50 ед) в Вену полового члена или IVC животного, с помощью иглы 27 G.
    Примечание: 27 G шприц инсулина может также использоваться вместо.
20. Зажим и галстук с мкВ, используя ранее установленный Шелковый шов 4-0.
21. Галстук с печеночной артерии, используя ранее установленный Шелковый шов 7-0.
22. Зажим от воротной вены, с использованием микрохирургической клип. Иглу воротной вены, используя 22 G angiocatheter. Флеш воротной вены с 60 мл холодного физиологический 0,9% с 1 мл раствора гепарина (100 ед) до печени бланша (Рисунок 10).
    Примечание: Если печень не бланшировать сразу же он может массируют с аппликаторами наконечник стерильным хлопка.
23. Подвергать suprahepatic МКВ и вырезать через его как высокий в грудь как можно скорее.
24. Выполняйте гепатектомии. Вырезать вокруг диафрагмы, вырезать печеночной артерии, вырезать мкВ, вырезать воротной вены, вырезать любых дополнительных связок и вынуть печень. Место печени в лед холодной 0.9% нормальное saline (Рисунок 11).
25. Место 16 G сосудистого манжете в воротной вены (Рисунок 12). Место печени на контуре ex vivo нормотермических печени перфузии.

4. Ex Vivo нормотермических печени перфузии

Примечание: Perfusate, здесь был подготовлен протокол шаге 1.1.1.

1. Поместите канюля воротной вены в манжетами воротной вены (рис. 13).
2. Во время размещения канюля воротной вены поддерживать поток perfusate через цепь в 2 мл/мин для начала. Смотреть монитор для любой шипы в портальной Вене давления; Это может указывать на судно стали закрыта и репозиционирования канюлю необходима.
3. Шовный материал в IVC канюля для возвращаемого потока perfusate, с помощью 7-0 Шелковый шов.
4. Как только оба канюли в место, начните, поднимая потока в 1 мл/мин до достижения физиологической давления в диапазоне 10 – 16 КМЗ₂O.
5. Возьмите 1 мл образца от до и после портов на 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 и 240 мин перфузии. 1 мл капель делят на две пробы 0,5 мл.
   Примечание: 0,5 мл это будет использоваться в протоколе шаг 4.5.1 и 0,5 мл будет использоваться протокол шаге 4.5.2.
   1. Оснастки заморозить 0,5 мл данного образца в криогенных трубы в жидком азоте.
   2. Выполните анализ газов артериальной крови с помощью оставшиеся 0,5 мл perfusate.
   3. После запуска анализ газа крови в каждый момент времени (0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 и 240 мин) изучения уровня pH и буфера perfusate при необходимости вернуться к рН 7,4.
6. В конце 4 h перфузии отключите печени от цепи перфузии. Разделите 0,5 g сегментов печени. Оснастки заморозить ткани печени в криогенных трубы в жидком азоте.

5. после эксперимента анализ

1. Определите Аланинаминотрансфераза (АЛТ) (ALT) уровень в perfusate на 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 и 240 мин, с использованием коммерческих колориметрические пробирного комплекта.
   1. Короче говоря, инкубировать perfusate с реакция смеси реагентов при 37 ° C 60 мин измерения оптической плотности значений на 570 Нм, используя Считыватель микропланшетов.
2. Однородный 0,5 г с 100 мкл буфера lysis ткани печени и анализировать ткани lysate аденозинтрифосфатом (АТФ), глутатион (GSH) и диальдёгида (MDA).
   1. Короче говоря Измерьте уровни ATP с использованием коммерческих пробирного комплекта образцов ткани печени. Смешать образца с буфером реакции и инкубации при комнатной температуре за 30 мин измерения оптической плотности в 570 Нм, используя Считыватель микропланшетов.
   2. Измерения уровней GSH с использованием коммерческих пробирного комплекта образцов ткани печени. Смешайте образцы тканей с Пробирной коктейль. Измерение оптической плотности значений на 405-414 Нм.
   3. Измерения уровней MDA с использованием коммерческих пробирного комплекта образцов ткани печени. Смешать образцы с ТБА и тепла до 95 ° C 60 мин центрифуги реагент и передать плиту 96-луночных супернатант. Измеряют оптическую плотность на 532 нм.
3. Однородный 0,5 г с 100 мкл буфера lysis ткани печени и анализировать lysate для Относительная активность каспазы-3/7, используя набор коммерческих пробирного ткани.
   1. Смешать lysate ткани с буфером пробирного каспазы-3-7 реагента и инкубации при комнатной температуре за 30 мин.
   2. Измерьте уровень флюоресценции в каждой хорошо с помощью Считыватель микропланшетов.
4. Определите уровень apoptotic клеток в образцах тканей печени, используя набор коммерческих в месте обнаружения смерти.
   1. Предварительно обработать 0,5 g ткани разделы с 10 U/mL протеиназы K 10 мин и затем инкубации с реакционной смеси при 37 ° C 60 мин выполнять анализ, используя флуоресцентный Микроскоп.

Размер выборки три крыс каждой группы был использован. ALT была измерена на 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 и 240 мин перфузии. Мы использовали студента t-тесты для сравнения результатов между базовой perfusate и базовый perfusate плюс PEG-CAT групп на каждом этапе. Сравнивая базовый perfusate и базовый perfusate плюс PEG-CAT групп, существует значительно меньше (p < 0,05) ALT в базовый perfusate плюс PEG-CAT группы на 150, 180, 210 и 240 мин (Рисунок 14А).

Для того, чтобы анализировать повреждения тканей из базового perfusate и базовый perfusate плюс PEG-CAT групп было закуплено ткани печени. Мы использовали студента t-тесты для сравнения результатов между базовой perfusate и базовый perfusate плюс PEG-CAT групп. Ткани СПС была сохранена в базу perfusate плюс PEG-CAT группы по сравнению с группой только базовый perfusate (рисунок 14B, p < 0,05). Производство тканей MDA был значительно выше в группе базовый perfusate, чем в базовой perfusate плюс PEG-CAT группы (Рисунок 14C, p < 0,05). Общая GSH была сохранена в базу perfusate плюс PEG-CAT группы по сравнению с группой только базовый perfusate (Рисунок 14D, p < 0,05).

Чтобы проанализировать апоптоза, ткани печени активность каспазы-3/7 сравнивали между группами. Флуоресценции была измерена в каждой скважине. Мы использовали студента t-тесты для сравнения результатов между базовой perfusate и базовый perfusate плюс PEG-CAT групп. В базовый perfusate плюс PEG-CAT группы по сравнению с базовой perfusate только группа заметно снизилась активность каспазы-3/7 (Рисунок 15A, p < 0,05). Окрашивание маркировки Ник-конец (TUNEL) dUTP трансферазы (TdT) терминала deoxynucleotidyl был использован для сравнения апоптоз между группами. Процент apoptotic клеток была значительно меньше в базовый perfusate плюс PEG-CAT группы по сравнению с базовой perfusate одиночку группа (Рисунок 15B, p < 0,05).

Рисунок 1: схема перфузии. Компоненты контура помечены. Perfusate начинается в perfusate водохранилище (1), который является контейнером с рубашкой воды. Perfusate вытащил из водохранилища с помощью валика насоса (2) и толкнул в windkessel (3), а затем Оксигенатор (4). Оксигенатор устанавливается противоточный газа и perfusate потока для обеспечения максимальной газообмена. Perfusate затем переходит к нагревательной спирали (5) в камере перфузии чтобы убедиться, что это физиологическая температуры, и Пузырь ловушки (6) для предотвращения перфузии воздушных пузырьков. Есть предварительно органа (7) и после органа (8) образца порты, которые позволяют perfusate для выборки. Perfusate затем поступает через канюлю воротной вены печени. Канюля воротной вены прилагается к давление монитор, который регулирует давление эквалайзер (9). Наконец perfusate вытащил из блока давления обратно через насос ролик и опорожняется в водохранилище. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 2: операционной комнате и хирургический инструмент set-up. Хирургический микроскоп (1) должна быть скорректирована соответствующим высоту и масштаб для пользователя. Изофлюрановая могут быть предварительно загружены в анестезия машины (2). Нос животного помещается в носовой конус (3). Хирургические инструменты должны быть изложены где они могут быть легко доступны (4). Электрокоагуляции (5) поблизости полезно. Швы (6) должны быть предварительно нарезанные так куски могут быть получены быстро, когда это необходимо и дополнительно должны быть доступны (7). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 3: подготовить 16 G воротной вены манжету. Начинаются с 16 G angiocatheter. Вырежьте часть трубы 7 мм. Определить середину секции 7 мм, измеряя 3,5 мм. Incise здесь и снимите переднюю половину трубы. Используйте зажим для раздавить это теперь плоская часть. Используйте зажигалку сжечь на другом конце angiocatheter для создания губ. Место кончике непосредственно в пламени или он будет воспламеняться. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 4: срединная разрез. Сделайте срединной разрез от мечевидного (1) до лобка (2) с помощью острых ножниц и проходящий через кожу и мышцы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 5: получить достаточное опровержение. Отказаться от мечевидного отростка (1) с помощью изогнутой комаров зажим (2) и ребра, поставив ребром ретракторы (3, 4). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 6: рассечение нижней полой вены (IVC). Флип печени до подвергайте правой почки (1) и воротной вены (2). Вскрыть вокруг IVC (3) и поместите петлю шва 7-0 для использования в будущем. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 7: перевязка право надпочечниковой Вены. Убрать правой почки (1) предоставлять воздействия право надпочечниковой Вены. Галстук с правом надпочечниковой Вены и сократить его. Смачивают марлевые (2) может использоваться для защиты печени во время этот маневр. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 8: печеночная артерия диссекции. Вскрыть вокруг и место галстук вокруг печёночной артерии (1) возле где он проходит под воротной вены (2). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 9: желчных протоков катетеризации. Cannulate желчных протоков (1) с помощью angiocatheter 27 G (2) подключены к 27 G труб (3). Это поможет собрать желчи во время перфузии. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 10: печень заподлицо. Очистка печени (1) с 60 cc холодной физиологический 0,9% с 100 ед (1 мл) гепарина с помощью 16 G angiocatheter (2). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 11: после гепатектомии. Выполните гепатектомии и печени в холодной соленой. Будьте осторожны, не выбить канюля желчных протоков. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 12: воротной вены наручников. Найдите воротной вены. Используйте большой зажим (1) провести до Вены, оставив несколько миллиметр губы Вену выше зажима. Чтобы поместить сосудистого манжете 16 G (4) в воротной вены используйте микрохирургическое щипцы (2, 3). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 13: манжета воротной вены и Улучшенный IVC катетеризации. Иглу воротной вены манжеты (1) и Улучшенный IVC (2). Необходимо соблюдать осторожность не для того, чтобы выбить канюля желчных протоков (3) или расслабиться в сауне. Кроме того заботиться не крутить Улучшенный мкВ. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 14: анализ повреждения тканей в базовые основания и perfusate только perfusate и плюс PEG-CAT группы (N = 3/группа). Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение. (A) Аланинаминотрансфераза (АЛТ) (ALT) уровнях. Сравнивая ALT уровнях между базовой perfusate и базовый perfusate плюс Пегилированный каталазы (PEG-CAT) группы, существует значительно меньше ALT в базовый perfusate плюс PEG-CAT группы на 150, 180, 210 и 240 мин (p < 0,05). (B) аденозинтрифосфат уровни. Ткани аденозинтрифосфатом (АТФ) была сохранена в базу perfusate плюс PEG-CAT группы по сравнению с группой только базовый perfusate (p <0,05). (C) диальдёгида уровни. Производство тканей диальдёгида (MDA) был значительно выше в группе базовый perfusate, чем в базовой perfusate плюс PEG-CAT группе (p < 0,05). (D) глутатиона. Общая глутатиона (GSH) была сохранена в базу perfusate плюс PEG-CAT группы по сравнению с группой только базовый perfusate (p < 0,05). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 15: Анализ апоптоза в базовые основания и perfusate только perfusate и плюс PEG-CAT группы (N = 3/группа). Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение. (A) в базовый perfusate плюс PEG-CAT группы по сравнению с базовой perfusate только группа заметно снизилась активность каспазы-3/7 Activity.Caspase 3/7 (p < 0,05). (B) терминала deoxynucleotidyl трансферазы (TdT) dUTP Ник-конце маркировки (TUNEL) пятнать. Изображения были взяты с помощью 4 X флуоресцентный Микроскоп. Процент apoptotic клеток была значительно меньше в базовый perfusate плюс PEG-CAT группы по сравнению с базовой perfusate (p < 0,05). Зеленый: apoptotic клетки. Синий: ядерная. Масштаб баров = 1000 мкм. TUNEL позитивные клетки были количественно путем подсчета клеток от 4 случайных микроскопических полях. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Все авторы сообщают, что у них нет соответствующей информации.