Name: Подготовка одноклеточных суспензий из селезенки мыши с gentleMACS диссоциатор (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Узнайте автоматизированную диссоциацию ткани селезёнки мыши с помощью gentleMACS Dissociator для получения жизнеспособных одноклеточных суспензий. Этот метод обеспечивает воспроизводимое и контролируемое разрушение ткани.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Введение в оборудование <ol><li> Ткань мягко диссоциированных, используя фиолетовый C Трубы в жизнеспособные одноклеточных суспензий. </li><li> PBS / BSA ЭДТА буфер используется для диссоциации клеток. Буфер получают путем добавления 1 часть маточного раствора BSA до 20 частей autoMACS Полоскание раствором, содержащим ЭДТА. </li><li> MACS Предварительное разделение Фильтры используются, чтобы диссоциированных образцов тканей свободны от всех клеточных сгустков, способствующих успешному разделения MACS и последующего анализа. </li></ol> Диссоциирующего клеток селезенки <ol><li> Всего селезенки являются disscociated в одноклеточных суспензий спленоцитов использованием диссоциатор gentleMACS. </li><li> Чтобы начать процедуру, нагрузка труб С с объемом буфера в зависимости от массы селезенки. Здоровой селезенки молодых взрослых самок мышей BALB / с мышь весит около 80-120 мг. Каждый 1 до 2 селезенки этой массы требуют 3 мл буфера. Селезенки от старых животных или животных с инфекциями часто большие и должны быть взвешены в буфере. Буфера тома должны быть расширены соответственно. Не превышать общий объем буфера 10 мл. </li><li> Добавить расчлененный селезенки, чтобы труба С, содержащий 3 мл буфера. </li><li> Убедитесь, что крышка C Трубка плотно и прикрепите трубы С до диссоциатор с цоколем вниз. </li><li> Включите диссоциатор. Для 1-2 селезенки, выберите программу m_spleen_01. Программа займет 56 секунд. Если число селезенки больше, используйте программу m_spleen_04, эта программа может быть использована для до 720 мг ткани селезенки. </li><li> После завершения программы нативной ткани селезенки распадается на спленоцитов подвески. </li><li> Спином вниз все суспензии клеток в 300xg при комнатной температуре в течение примерно 30 сек. Это гарантирует, что ротор и статор, освобождаются от всех клеток, которые собираются в нижней части трубы C. </li><li> Удалить образец через перегородку уплотнением отверстие в крышке трубы С, используя 1000 мкл pipetter. </li></ol> Фильтрация шаг <ol><li> Для начала фильтрации шаг, примените диссоциированных тканей предварительного разделения фильтра или ячейки фильтра 30 мкм с размером пор. Фильтр должен соответствовать 15 мл трубки в течение 1-2 селезенки или 50 мл трубки более чем на 2 селезенки. </li><li> Пусть клеточной суспензии пройти. Затем промыть фильтр, применяя 5 мл буфера. </li><li> Теперь, центрифуги трубы с клеточной суспензии в 300xg, при комнатной температуре в течение 10 минут, чтобы собрать все спленоцитов в осадок клеток селезенки. </li><li> Теперь, что у нас есть гранул диссоциированных спленоцитов, мы должны аспирата супернатант и ресуспендируют осадок клеток в соответствующее количество буфера. </li></ol> Селезенка диссоциации использованием диссоциатор gentleMACS даст высокий процент жизнеспособных спленоцитов, о чем свидетельствует проточной цитометрии с использованием MACSQuant Analyzer. Мертвые клетки окрашиваются по йодида пропидий. В примере, при условии, передней стороне разброс точка графика видно, подготовленные спленоцитов.

Все протоколы и спецификации доступны на<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

Чтобы избежать утомительного и часто болезненных диссоциации по эксплуатации, диссоциатор gentleMACS позволяет отделить ткани очень эффективно в контролируемых и воспроизводимых условиях. Процедура ткани диссоциации нежно к клеткам и суспензий дает клетка с высокой скоростью жизнеспособность. Диссоциатор gentleMACS в сочетании с C Трубы предназначены для подготовки одноклеточных суспензий из различных тканей. Прибор оснащен рядом предустановленных программ отделить мыши селезенки, печени, легких или нервной ткани. Ряд программ и протоколов будет постоянно расширена за счет включения дополнительных тканей.

<table><tbody><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Стартовый набор</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>С-образные трубки</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/ru/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Пробирки объемом 13 мл</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-596</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx&quot;&gt;Пробирки объемом 13 мл для колонок LS&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; Промывочный раствор </td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>&lt;a href=&quot;Раствор для промывки autoMACS&quot;&gt;Раствор для промывки autoMACS&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS (магнитная активированная сортировка клеток)&amp;#174; Стоковый раствор БСА</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Фильтры для предварительной очистки (предсепарационные фильтры) </td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;Фильтры для предварительной сепарации&quot;&gt;Фильтры для предварительной сепарации&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Анализатор MACSQuant</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-197</td><td></td></tr><tr><td>Раствор пропидия иодида</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;Раствор пропидия иодида&quot;&gt;Раствор пропидия иодида&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

Подготовка одноклеточных суспензий из селезенки мыши с gentlemacs диссоциатор

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Single-клеточные суспензии, являются необходимым условием для проведения экспериментов в ячейке разделения, клеточный анализ и клеточных культур. Чтобы избежать утомительного и часто болезненных диссоциации ручной диссоциатор gentleMACS позволяет отделить ткани очень эффективно в контролируемых и воспроизводимых условиях. Диссоциатор gentleMACS может оптимально отделить селезенки мыши, сочетая экономию времени и стандартизации с пользователем безопасности. Это видео описывает, как отделить мыши селезенки использованием gentleMACS диссоциатор, автоматизированных настольный прибор, который может нарушить механически тканей с помощью специальных труб для получения жизнеспособных клеточных суспензий. После диссоциации, селезенки фильтруют, центрифугируют и ресуспендируют для дальнейшего применения.

Это видео описывает простой, экономящий время техника для автоматизированного диссоциации ткани с помощью диссоциатор gentleMACS подготовить одноклеточных суспензий мыши спленоцитов.

Подготовка одноклеточных суспензий из селезенки мыши с gentleMACS диссоциатор

Суспензии одиночных клеток являются необходимым условием для проведения экспериментов по разделению, анализу и культивированию клеток. Чтобы избежать трудоемкого и зачастую болезненного ручного...

В данном видеопротоколе вы увидите, как проводить диссоциацию селезёнок мыши с помощью Gentle Max — автоматического настольного устройства, которое позволяет механически разрушать ткани с использованием специальных пробирок для получения жизнеспособных клеточных суспензий. После диссоциации селезёнки фильтруют с помощью сепарационных фильтров Max Pres, центрифугируют и ресуспендируют для дальнейшего использования. Здравствуйте, меня зовут Мелани Млу.Я ученый компании Milton Biotech, работающий здесь, в BE Lab Park, Германия. Сегодня я продемонстрирую вам процесс приготовления суспензии единичных клеток из селезенки мыши с использованием системы GenX dissociation. Система GenX dissociation позволяет очень просто и быстро подготовить суспензию единичных клеток.Итак, приступим. Чтобы избежать трудоемкого и зачастую болезненного ручного разделения, прибор gentle max di associator позволяет эффективно диссоциировать ткани в контролируемых и воспроизводимых условиях. Ткани бережно диссоциируют с использованием пробирок violet C для получения жизнеспособных суспензий одиночных клеток.Пробирка типа C имеет отверстие с герметичной перегородкой-септой в центре крышки, что позволяет переносить содержимое пипеткой, постоянно поддерживая стерильность. Для суспендирования диссоциированных клеток необходимо использовать соответствующий буфер PBS-BSA-EDTA. Буфер готовится путем добавления одной части стокового раствора BSA к 20 частям раствора AutoMax fencing, содержащего EDTA.При использовании разделительных фильтров Max Pres образцы диссоциированной ткани очищаются от всех клеточных конгломератов, что способствует максимально эффективному разделению и последующему анализу. Для начала процедуры в C-пробирку вносится определенный объем буфера. В зависимости от массы селезёнок, здоровая селезёнка самки мыши для биопсии в возрасте шести-семи недель весит примерно 80–120 mg.На каждые одну-две селезенки такой массы требуется 3 mL буфера. Общий объем не должен превышать 10 mL. Теперь можно добавить препарированную селезенку в пробирку C, содержащую 3 mL буфера. Селезенки более старых животных или животных с инфекциями часто имеют больший размер, поэтому их необходимо взвешивать непосредственно в буфере.Объемы буфера должны быть соответственно масштабированы, но при этом общий объем не должен превышать 10 milliliters. Теперь убедитесь, что крышка пробирки C плотно закрыта, и установите пробирку C в аппарат для диссоциации. Установив пробирку крышкой вниз, включите аппарат для диссоциации от одной до двух селезёнок и выберите программу M spleen oh one. Выполнение программы займет 56 seconds; если количество селезёнок больше, используйте программу M spleen oh four.Данная программа может быть использована для обработки до 720 milligrams ткани селезенки. По завершении программы нативная ткань селезенки диссоциируется в суспензию клеток PLE; полученную смесь следует кратковременно центрифугировать для осаждения образца на дне пробирки. Это обеспечит очистку ротора и статора от всех клеток, которые соберутся на дне C-образной пробирки.Мы извлекаем образец через отверстие в крышке С-образного флакона, закрытое септой, используя дозатор на 1000 µL. Для начала этапа фильтрации мы переносим диссоциированную ткань на фильтр для предварительного разделения или сито с размером пор 30 µm. Сито должно подходить к пробирке объемом 15 мл для одного-двух селезёнок или к пробирке объемом 50 мл для более чем двух селезёнок.Пропустите клеточную суспензию через фильтр, затем промойте его, добавив 5 mL буфера. Теперь центрифугируйте пробирку с клеточной суспензией при 300 G при комнатной температуре в течение 10 минут, чтобы собрать все клетки в осадок клеток селезенки. После получения осадка диссоциированных клеток необходимо аспирировать супернатант и ресуспендировать клеточный осадок в соответствующем объеме буфера для диссоциации селезенки.Использование метода gentle max обеспечит высокий процент жизнеспособных клеток PLE, что подтверждается данными проточной цитометрии с использованием max quant. Мертвые клетки окрашиваются пропидиум-иодидом, как показано в приведенном примере. На диаграмме рассеяния (forward side scatter) представлены подготовленные клетки SP. Хорошо.Я продемонстрировал вам способ диссоциации ткани селезенки с использованием метода мягкой диссоциации Gentle X. При выполнении этой процедуры важно подобрать объем буфера в соответствии с размером образца и выбрать подходящую программу Gentle X. На этом всё.Желаем удачи в проведении вашего эксперимента.

preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-spleen-with-gentlemacs

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Мы описываем подготовки Т-клеток фактор роста для в пробирке расширения антиген-специфических Т-лимфоцитов крыс линии.

Подготовка T фактор роста клеток от Крыса Спленоциты

Диссоциирующего клетки определенных типов ткани требует специфических параметров для агитации ткани для получения большого количества жизнеспособных, culturable клеток. Miltenyi gentleMACS диссоциатор оптимизирует эту задачу с простым, практичным протокола. В этой публикации использование этого аппарата на легочной ткани объясняется.

Стандартизированные Подготовка одноклеточных суспензий от мыши легочной ткани использованием gentleMACS диссоциатор

Диссоциирующего клетки определенных типов ткани требует специфических параметров для ткани aggitation получить большой объем жизнеспособной, culturable клеток. Miltenyi gentleMACS диссоциатор оптимизирует эту задачу с простым, практичным протокола. В этой публикации использование этого аппарата на nerual тканей объясняется.

Генерация одноклеточных суспензий от мыши нервной ткани

Это видео демонстрирует процедуру адоптивного переноса обработанных солью антигенпрезентирующих дендритных клеток (ДК) мышам. Мышиные CD11c+ дендритные клетки (ДК) подвергаются воздействию среды, содержащей большое количество натрия, образуя в клетках аддукты изолевугландина (IsoLG). Эти аддукты служат неоантигенами и представлены на поверхности ДК. Обработанные солью клетки вводятся мышам путем адоптивного переноса клеток.

Метод высокосолевой обработки дендритных клеток и их адоптивного переноса мышам

Видео демонстрирует приготовление одноклеточной суспензии иммунных клеток из ткани мозга мыши. Он включает в себя ферментативное расщепление для высвобождения клеток из ткани мозга с последующим центрифугированием с градиентом плотности для выделения иммунных клеток на основе их плотности для получения суспензии одиночных клеток.

Приготовление одноклеточной суспензии иммунных клеток из ткани головного мозга мыши

Проточная цитометрия может быть использован для оценки состояния хроматина в Т-клетках. Этот протокол позволяет ученым интерпретировать доказательства хроматина деконденсации течение активации Т-клеток свидетельствует увеличение в средней интенсивности цветения (MFI) флуоресцентных антител гистона H3...

Использование проточной цитометрии для оценки состояния хроматина в Т-клетках

Здесь мы представляем протокол изолировать дендритные клетки из мышиных селезенки магнитные ячейку Сортировка и последующих приемных передачи в наивной мышей. Чтобы объяснить шаг за шагом процедуры приемных передачи и проточной цитометрии была выбрана модель высоким соли активированные дендритных клеток.

Изоляции и приемных передачи высоких соли лечить антиген представляя дендритные клетки

Мы описываем здесь простой анализ гетерогенности компартмента иммунных В-клеток мышей в тканях брюшины, селезенки и костного мозга с помощью проточной цитометрии. Протокол может быть адаптирован и распространен на другие ткани мыши.

Проточная цитометрическая характеристика развития В-клеток мышей

Здесь мы представляем простой и эффективный метод изоляции живых мейотических и постмейотических зародышевых клеток от взрослых мышей. Используя низкоцитотоксичность, фиолетовый возбужденный краситель связывания ДНК и флуоресценцию активированной сортировки клеток, можно изолировать высокообогащеные популяции сперматозоидов для многих нисходящих приложений.

Изоляция murine сперматогенных клеток с помощью фиолетово-возбужденных клеток проницаемых ДНК Связывание красителя

В данной статье описывается протокол агрегации и инкапсуляции клеток селезенки в полутвердой мембранной матрице. Матричные конструкции базальной мембраны могут быть использованы в трехмерной культуре для изучения развития органоидов или для трансплантации in vivo и исследований регенерации тканей.

Инкапсулированная агрегация клеток матрицы базальной мембраны для исследования формирования ткани селезенки мышей

В данной работе мы представляем протокол выделения экзосом, полученных из селезенки мышей, с использованием комбинации расщепления с коллагеназой I типа и ультрацентрифугирования.

Выделение и характеристика экзосом, полученных из тканей селезенки мыши

Узнайте автоматизированную диссоциацию ткани селезёнки мыши с помощью gentleMACS Dissociator для получения жизнеспособных одноклеточных суспензий. Этот метод обеспечивает воспроизводимое и контролируемое разрушение ткани.

Подготовка одноклеточных суспензий из селезенки мыши с gentleMACS диссоциатор

Больше видео