Внутригрудная инъекция: доставка соединения в сердце взрослой рыбки данио

- Для начала положите влажную губку с разрезом на чашку Петри. Далее обезболивают взрослую рыбу раствором трикаина и осторожно переносят ее в щель брюшной стороной вверх. Поместите чашку Петри под стереомикроскоп и понаблюдайте за движением бьющегося сердца под кожей.

Расположите иглу для минкроинъекций под углом 45 градусов от оси тела над бьющимся сердцем, расположенным между оперкулумом и грудным поясом. Осторожно продвигайте иглу через кожу в перикард, тонкую оболочку, которая окружает сердце. Введите инъекционную смесь в перикард.

Выстрел содержит трассирующий краситель, такой как феноловый красный, для отслеживания движения раствора. Извлеките иглу из грудной клетки. Немедленно переместите рыб в резервуар для восстановления, содержащий воду из системы, и следите за ее полным восстановлением после анестезии. В следующем протоколе мы выполним внутригрудную инъекцию для доставки исследуемого соединения и изучим его влияние на регенерацию сердца.

- С помощью сачка поймайте взрослую рыбу и переведите ее в обезболивающий раствор. Через одну-две минуты, когда рыба перестанет плавать и движение оперкулума уменьшится, прикоснитесь к рыбе пластиковой ложкой, чтобы убедиться, что она не реагирует ни на один контакт. Далее быстро и аккуратно переложите рыбу в углубление влажной губки брюшной стороной вверх. Голова рыбы должна быть направлена в сторону от доминирующей руки оператора.

Под стереомикроскопом внимательно наблюдайте за движением бьющегося сердца под кожей рыбы. Визуально определите точку инъекции над бьющимся сердцем и в середине треугольника, очерченного вентральными хрящевыми пластинами. Вводите кончик капилляра под углом от 30 до 45 градусов относительно оси тела. Аккуратно проникните в кожу кончиком микрокапилляра в перикард.

Как только игла окажется внутри перикарда, нажмите на педаль микроинъектора, чтобы завершить инъекцию. После инъекции аккуратно извлеките капилляр из грудной клетки, и сразу же пересадите рыбок в резервуар с водой системы для восстановления. Следите за рыбками до полного выздоровления от наркоза. Чтобы проанализировать эффекты инъекции, соберите сердце в нужный момент времени и подготовьте его к дальнейшему анализу.