Журнал
/
/
/
Подготовка и сортировка окрашенных CT-FR-клеток T-ALL рыбки данио для трансплантации и отслеживания опухолей
JoVE Journal
Онкологические исследования
Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove  Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
JoVE Journal Онкологические исследования
Preparation and Sorting of CT-FR-Stained Zebrafish T-ALL Cells for Transplantation and Tumor Tracking

Подготовка и сортировка окрашенных CT-FR-клеток T-ALL рыбки данио для трансплантации и отслеживания опухолей

English

Сгенерировано автоматически

69 Views

02:10 min

July 19, 2024

DOI:

02:10 min
July 19, 2024

1 Views
, ,

ТРАНСКРИПТ

Automatically generated

Для подготовки донорской пластины переложите 500 000 клеток рыбки данио-рерио дикого типа CG1 в коническую пробирку объемом 15 миллилитров. Добавьте пять миллилитров рыбьей среды, чтобы разбавить клеточный запас до 100 клеток на микролитр. Нанесите по 50 микролитров клеточной суспензии в каждую лунку 96-луночного планшета и поместите планшет при температуре четыре градуса Цельсия до сортировки.

Подготовьте элементы управления без пятен и одного цвета для настройки эксперимента по сортировке. Пропустите клеточную суспензию контрольных элементов и образцов через 35-микронный колпачок фильтра в факсимильную трубку на льду. Центрифугируйте 96-луночный планшет при температуре 2 500 G при четырех градусах Цельсия.

Осторожно удалите по 45 микролитров надосадочной жидкости из каждой лунки, оставив после себя пять микролитров жидкости. Ресуспендируйте клетки с помощью пипетки объемом 20 микролитров и с помощью микрошприца Hamilton введите клеточные суспензии в нужное количество рыбок данио-рерио CG1. После трансплантации рыбок данио-рерио CG1 с отсортированными клетками для анализа предельного разведения, высокие клетки CT-FR имели в четыре раза более высокую частоту лейкемических стволовых клеток по сравнению с клетками с низким содержанием CT-FR.

Репрезентативные изображения рыбок данио через 28 дней после трансплантации показали, что у 89% рыбок данио-рерио с высоким уровнем CT-FR развивается лейкемия по сравнению с 20% в группе с низким уровнем CT-FR. У рыбок данио-рерио с высоким уровнем CT-FR была значительно более короткая латентность к лейкемии. Рыбки данио-рерио с высоким содержанием CT-FR имели значительно более низкую общую выживаемость по сравнению с рыбами с низким уровнем CT-FR.

Read Article