Лечение стрептозоцином: модель сахарного диабета 1 типа на рыбках данио-рерио

- Сахарный диабет 1 типа – заболевание человека, при котором иммунная система разрушает инсулин, вырабатывающий бета-клетки в поджелудочной железе. Стрептозоцин может вызывать сахарный диабет 1 типа у рыбок данио. Во-первых, обезболите рыбу в растворе 2-феноксиэтанола в рыбьей воде. Возьмите рыбу и положите ее на чашку Петри брюшной стороной вверх. Рассчитайте дозу стрептозоцина из расчета 0,35 миллиграмм на грамм от веса рыбы и разведите ее в солевом растворе.

Вводите стрептозоцин путем внутрибрюшинной инъекции ниже тазового пояса на вентральной стороне рыбки данио. Стрептозоцин структурно похож на N-ацетилглюкозамин, лиганд, который связывается с рецептором GLUT2 на бета-клетках поджелудочной железы, что приводит к секреции инсулина. Таким образом, стрептозоцин связывается с рецепторами GLUT2, присутствующими на бета-клетках поджелудочной железы, которые транспортируют его внутрь клеток.

Попадая в бета-клетки, стрептозоцин запускает иммунный ответ, приводящий к высвобождению аутоантигенов. Аутоантигены заставляют иммунную систему распознавать бета-клетки как чужеродные и уничтожать их, что приводит к снижению уровня инсулина. Вводите повторные дозы стрептозоцина на третий и пятый дни, а затем еженедельные дозы, по одной раз в семь дней для поддержания иммунного ответа.

В следующем примере мы создадим модель сахарного диабета 1 типа на рыбке данио. Чтобы получить рыбок данио с сахарным диабетом, подготовьте восстановительный аквариум с обычной рыбьей водой и анестезирующий аквариум с рыбьей водой с разбавлением 2-феноксиэтанола от 1 до 1000. Под вытяжной шкаф приготовьте 0,3% раствор стрептозоцина или СТЗ, добавив 6 миллиграмм СТЗ на 2 миллилитра 0,09% хлорида натрия и сразу же поместите раствор на лед.

В отдельной трубке, аликвоте достаточно солевого раствора для контроля рыбы. Наполните шприц половиной CC, оснащенный иглой 27 и 1/2 калибра, с помощью STZ или контрольных растворов, следя за тем, чтобы в нем не задерживались пузырьки воздуха. Нанесите обезболивание одной рыбе, поместив ее в обезболивающую воду и подождите, пока плавательные движения прекратятся, примерно одну-две минуты.

После обезболивания ненадолго положите рыбу на бумажное полотенце, чтобы она впитала лишнюю воду. Затем поместите рыбу в лодку для взвешивания и взвесьте ее. Далее поместите рыбу на твердую поверхность. Затем введите иглу за скос в заднюю часть вентральной брюшины и введите либо 0,35 мг на грамм СТЗ, либо эквивалентный объем контрольного раствора в брюшную полость рыбы.

После инъекции поместите рыб в резервуар для восстановительной воды и следите за его нормальной плавательной активностью. После введения достаточного количества рыб для эксперимента пересадите их в обычные жилые резервуары и поддерживайте температуру от 22 до 24 градусов по Цельсию. Пониженная температура имеет решающее значение для эффективной индукции гипергликемии. Чтобы вызвать длительное состояние очень высокой гипергликемии, следуйте графику частых инъекций во время фазы индукции, за которыми следуют еженедельные поддерживающие инъекции, как показано здесь.