Имплантация под ультразвуковым контролем: методика имплантации клеток протоковой аденокарциномы поджелудочной железы взрослой мыши

- Ультразвуковое исследование позволяет получать изображения с высоким разрешением, которые помогают имплантировать раковые клетки в определенный участок ткани с минимальным воспалением во время инъекции опухолевых клеток. В первую очередь, мы используем ортотопические модели для пересадки опухолевых клеток в соответствующий орган опухолевого происхождения. Орган имитирует исходное микроокружение опухоли и способствует метастазированию.

Начните с суспензии опухолевых клеток в холодном PBS для поддержания pH и поместите трубку на лед. Затем поместите мышь для анестезии на ультразвуковой столик и закрепите конечности лабораторным скотчем. Нанесите необходимое количество геля для УЗИ на выбритый живот и отрегулируйте положение ультразвукового зонда до тех пор, пока поджелудочная железа не станет хорошо видна. Загрузите в шприц суспензию опухолевых клеток и осторожно введите клетки в поджелудочную железу.

На ультразвуковом снимке появляется пузырь жидкости, подтверждающий успешную имплантацию. Подождите 5 секунд, чтобы предотвратить обратный ток клеток и аккуратно извлеките иглу. Верните животное в чистую клетку и следите за ним, пока оно не оправится от наркоза. В течение нескольких недель после инъекции введенные раковые клетки в поджелудочной железе быстро делятся и образуют опухоль. В соответствии с данным протоколом мы выполним имплантацию клеток протоковой аденокарциномы поджелудочной железы под ультразвуковым контролем в поджелудочную железу ортотопической модели.

- Перед началом процедуры ресуспендируйте интересующую клеточную линию протоковой аденокарциномы поджелудочной железы в соответствующем объеме стерильного холодного PBS на льду. Поместите клетки на нагревательную пластину с температурой 37 градусов Цельсия и тщательно очистите шкаф биологической безопасности, индукционную камеру и ультразвуковой стол соответствующим стерилизатором. Установите согревающую функцию ультразвукового каскада на 37 градусов Цельсия и после индукции анестезии нанесите мазь на глаза первого животного.

Поместите мышь в спинное положение лежа на ультразвуковом столике и аккуратно прикрепите верхние и нижние конечности к столику с помощью ленты. С помощью стерильного аппликатора с ватным наконечником нанесите обильный слой крема для депиляции на верхний левый квадрант живота над областью селезенки до средней линии. Через 1 минуту с помощью сухой марлевой салфетки аккуратно удалите волосы, прежде чем удалить излишки крема для депиляции с помощью влажной марли с солевым раствором. Затем поместите мышь в одну из новых чистых клеток на тепловом устройстве.

Для имплантации опухолевых клеток под ультразвуковым контролем отрегулируйте ультразвуковую платформу так, чтобы поверхность была параллельна полу, и встаньте слева от животного головой мыши вправо. Отрегулируйте положение датчика так, чтобы было получено поперечное изображение брюшной полости, и закрепите конечности мыши на платформе с помощью ленты. Осторожно опустите датчик так, чтобы он соприкоснулся с брюшной полостью мыши, и отрегулируйте датчик до тех пор, пока поджелудочная железа не станет хорошо видна. Найдите левую почку и селезенку, чтобы обеспечить точную ориентацию в брюшной полости.

Когда место инъекции будет найдено, загрузите полудюймовый инсулиновый шприц 29 калибра 25 микролитрами суспензии опухолевых клеток и протрите кончик иглы стерильной спиртовой салфеткой. Используйте тупые краевые щипцы, чтобы захватить кожу мыши и стенку брюшины, чтобы увеличить напряжение в месте инъекции. Держа шприц под углом примерно от 25 до 45 градусов к поверхности ультразвуковой платформы, медленно продвигайте иглу через кожу и брюшную стенку. Убедитесь, что игла проколота через стенку брюшины, прежде чем использовать ультразвуковую визуализацию для направления иглы непосредственно в поджелудочную железу.

Когда игла будет на месте, медленно вводите опухолевые клетки. Образование болюса жидкости в поджелудочной железе будет очевидным при правильно введенной поджелудочной железе с помощью ультразвука. После того, как весь объем суспензии будет введен и с помощью ультразвука можно будет наблюдать комок жидкости, держите шприц очень неподвижно в течение нескольких секунд, прежде чем медленно втянуть иглу из брюшной полости мыши, стараясь не потревожить введенные клетки. Затем поместите мышь в новую чистую клетку на утеплитель с контролем до полного выздоровления.

- Правильное размещение иглы в поджелудочной железе, включая глубину и угол иглы, является критически важным этапом этого протокола. Визуализация болюса жидкости помогает подтвердить успешную инъекцию опухоли. Контроль глубины впрыска является самым сложным аспектом. Мой совет - практиковаться с инъекциями трипанового синего цвета и подтверждать болюсное введение жидкости как с помощью УЗИ, так и с помощью вскрытия.