В естественных изображений и лечебных процедур в Ортотопическая мышиной модели рака яичников

Рак человека и реакция на терапию лучше представлены в ортотопических моделях животных. В этом видео опухолевые клетки яичников человека, экспрессирующие люциферазу, вводятся непосредственно в мышиную сумку, где находится каждый яичник. Затем терапевтические препараты вводятся через пероральный зонд, чтобы доставить препарат непосредственно в желудок. Люцифериан.

Вводится субстрат люциферазы светлячков, в результате чего клетки, экспрессирующие люциферазу, генерируют сигналы биолюминесценции. Биолюминесцентные сигналы позволяют отслеживать рост, распространение и регрессию опухоли с помощью визуализации in vivo отдельных животных. Результаты визуализации свидетельствуют о том, что опухолевые клетки, введенные в яичник, остались в яичнике левой мыши и распространились в брюшную полость.

Основной очаг метастатического распространения рака яичников человека у правой мыши. Основное преимущество ортотопической модели на животных по сравнению с обычными моделями ксенотрансплантатов, такими как подкожные или внутрибрюшинные инъекции опухолевых клеток, заключается в том, что она лучше представлена для рака человека и, таким образом, обеспечивает лучшее понимание рака человека в ответ на терапию. Эта процедура требует помощи второго человека.

Все хирургические процедуры проводятся в асептических условиях, включая хирургическую одежду и стерильные хирургические инструменты. Шприц и иглы подтверждают, что животное находится под приемлемой плоскостью анестезии путем выполнения щипцами пальцев ног или пальцев рук до задних лап животного. Если есть педальный рефлекс, дождитесь более глубокой плоскости анестезии до тех пор, пока животное не перестанет реагировать на эту процедуру.

Расположите животное спинной стороной вверх на стерильной марлевой салфетке головой в сторону. Расположите точку разреза слева или справа от средней линии и над яичниками. Затем смочите участок 70%-ным этанолом с помощью щипцов.

Приподнимите влажную кожу и с помощью ножниц сделайте небольшой разрез в дорсальном медиальном положении прямо над яичниковым жировым пакетом. Яичниковый жировой пакет должен быть виден под поверхностью брюшинной стенки и легко узнаваем по белому цвету в отличие от окружающих его темно-розовых тканей. Далее аккуратно приподнимите облицовку брюшинной стенки и сделайте небольшой вертикальный надрез.

по-прежнему. Положите стерильную марлевую салфетку, смоченную в физрастворе, на среднюю линию, прилегающую к разрезу. Найдите жировую подушку яичника.

Аккуратно вытащите его и положите на марлю. Стабилизируйте яичник, зажав жировую подушку бульдожьим зажимом под препарирующим микроскопом, расположите яичник так, чтобы найти яйцевидный проток. Затем введите иглу 30 калибра в шприц, заряженный пятью микролитрами окара.

Пять клеток рака яичников человека, экспрессирующих люциферазу светлячка в изгибе яйцевода, ведущего к бурсе. Когда игла введена в правильное положение, она должна быть видна под бурсой, при этом один человек сохраняет положение иглы. Второй человек должен осторожно нажать на поршень шприца, чтобы ввести клеточную суспензию в пространство между бурсой и яичником.

Быстро извлеките иглу, чтобы запечатать место прокола. Следя за тем, чтобы не порвать бурсу и трубочку. Бурса должна казаться слегка вздутой.

Освободите жировую подушку от зажима бульдога и аккуратно переместите репродуктивный тракт и жировую подушку обратно в брюшную полость. Натяните верхнюю брюшинную оболочку на нижнюю, чтобы аккуратно закрыть стенку тела. Закройте кожу хирургическими скобами.

Поместите выздоравливающее животное обратно в клетку и обеспечьте безопасный источник тепла, чтобы избежать переохлаждения и ускорить выздоровление. Следите за частотой дыхания и облегчайте возвращение мышечного тонуса и способности к произвольному движению. Оральный зондирование выполняется При использовании иглы для зондирования 18-20 калибра, игла для зондирования не должна быть длиннее, чем расстояние от макушки головы животного до его последнего ребра.

Начните эту процедуру с осторожного захвата кожи на плечах мыши большим и указательным пальцами. Фиксатор должен быть достаточным для того, чтобы передние конечности вытягивались в обе стороны в сторону. Животное не должно иметь возможности ухватиться за иглу.

Аккуратно отведите голову животного назад, как показано здесь, образуя прямую линию через шею и пищевод. Поддерживайте спину животного внутренней стороной большого пальца мягко и без силы. Введите иглу для зондирования по обе стороны рта и над языком.

Одним плавным движением игла должна пройти по нёбу и вниз по пищеводу. Сила тяжести должна направлять иглу вниз и не должно быть сопротивления. Если есть какое-либо сопротивление, удалите иглу и начните сначала.

Во время введения у животных может срабатывать рвотный рефлекс и глотание. Однако у животного не должно быть вздохов. Когда игла будет на месте, убедитесь, что мышь дышит, проверяя движение ноздрей и грудной клетки.

Затем медленно нажмите на поршень шприца, чтобы выдать объем дозы. Аккуратно извлеките иглу зондажа под тем же углом и по тому же пути, в котором она была введена. Верните животное в клетку и следите за его дыханием и поведением в течение 5-10 минут.

Здесь система визуализации спектра ВСУЗИ используется для мониторинга поведения клеток, вводимых в эксперименты по внутрибурсальной полости. Использование системы обычно имеет временные рамки от четырех до 16 недель с момента имплантации опухоли. Загрузите раствор ЛЮЦИФЕРИАНА в шприц с прикрепленной иглой 30 калибра.

Проверьте глубину обезболивания изофтора, обезболенного мышью путем защемления пальца ноги. Затем введите 200 микролитров приготовленного раствора Люцифера путем впрыска IP. Затем поместите введенное Люцифером животное обратно в индукционную камеру.

Записывайте время инъекции, чтобы поддерживать постоянное время между инъекцией Люцифера и визуализацией. На протяжении всего исследования помещайте животное, находящееся под наркозом, спинной или вентральной стороной вверх на сцену визуализации. Расположите нос животного и носовой конус для поддержания правильной индукции анестезии.

Убедитесь, что животное находится в пределах сетки точки интереса, как указано зеленым светом. Установите соответствующие настройки системы визуализации. Обязательно инициализируйте систему перед получением первого изображения животного.

Закройте дверцу камеры визуализации в нужное время. Получите изображение. Извлеките животное из камеры визуализации и поместите его обратно в клетку.

Следите за выздоровлением животного. Как и до O carv, пять клеток, экспрессирующих люциферазу, были введены внутрь Салли в правый яичник мыши. И была проведена визуализация in vivo.

Снимки были сделаны через 13, 17 и 22 дня после инъекции. С помощью системы визуализации спектра ВСУЗИ дорсальная сторона отображается на верхней панели, а вентральная сторона — на нижней. Отметим, перитонеальное распространение опухолевых клеток.

Через 22 дня после инъекции клеток, экспрессирующих люциферазу. А технология визуализации in vivo позволяет использовать неинвазивные средства для отслеживания роста и распространения опухоли у отдельных животных. Рак человека и реакция на терапию лучше представлены на ортотопической животной модели.

Представленные здесь методы полезны для понимания развития и распространения рака яичников, а также для оценки новых терапевтических схем, которые могут в конечном итоге улучшить исход лечения пациентов с этим смертельным заболеванием.