Количественная полимеразная цепная реакция для перечисления бактериофагов

Приготовьте премикс для qPCR для 10 биопанированных образцов фагов неизвестной концентрации и 7 образцов стандартных концентраций в трех экземплярах, в результате чего получите премикс для 51 образца, содержащий 255 микролитров мастер-микса qPCR, 51 микролитр праймеров и 102 микролитра воды.

Аликвоту 8 мкл приготовленной ПЦР смешать в 51 лунку 96-луночного кПЦР-планшета. Затем добавьте по два микролитра термически обработанных образцов фага Т7 в каждую из этих лунок, распределив его под поверхностью премикса для количественной ПЦР. С помощью клеевой пленки заклейте пластину.

Оберните планшет алюминиевой фольгой, чтобы свести к минимуму флуоресцентное фотообесцвечивание, а затем приступайте к запуску планшета на оборудовании для количественной ПЦР. Настройте условия цикличности и параметры кривой плавления, как указано в текстовом протоколе.