Последовательные испытания Аллеи тревоги у мышей и крыс
June 17th, 2013
Крестообразный лабиринт меры тревоги-подобное поведение у грызунов. Есть два противоположных закрытых и двух противоположных распростертыми объятиями; тревожно грызунов избежать распростертыми объятиями. Центральная область не является ни полностью открыты и не закрыты, так что время, проведенное здесь неоднозначна и трудно интерпретировать. Здесь модификации крестообразного лабиринта протокол устранения этой области описывается.
Общая цель следующего протокола — измерить тревожное поведение у грызунов. Это достигается за счет использования специально разработанного оборудования, называемого последовательным аппаратом Олла. Аппарат последовательных аллей состоит из ряда прогрессивно сужающихся аллей, высота стен которых также уменьшается.
Анксиогенная природа аллей увеличивается по мере продвижения животного к узкому открытому концу, и получаются результаты, которые демонстрируют изменения в тревожном поведении после генетического или фармакологического вмешательства. Главное преимущество успешной методики Али, в отличие от существующих методов, подобных лабиринту «возвышенный плюс», заключается в том, что в ней отсутствует центральная область, где характер исследовательского поведения довольно неоднозначен. Аппарат последовательной аллеи состоит из четырех линейно соединенных аллей, выполненных из дерева.
Аллеи спроектированы таким образом, чтобы увеличивать свою тревожность по мере удаления от начальной точки. Каждая аллея имеет длину 25 сантиметров. Ширина каждой аллеи постепенно уменьшается.
Точно так же высота стен уменьшается с каждым последующим переулком. Зажим крепит аппарат к лабораторному столу, поднимая его примерно на 50 сантиметров над полом. Открытый конец Аллеи должен находиться на расстоянии не менее 10 сантиметров от опоры, чтобы мыши не могли на нее забраться.
Подложите под аппарат набивку, чтобы смягчить животное, если оно упадет. Для начала приведите мышей в экспериментальную комнату на пять-20 минут перед тестированием на акклиматизацию. Хорошей практикой при наблюдении за поведением нового устройства является сначала воздействие на него мышиной газировки от неэкспериментального животного.
После извлечения животного очистите прибор, как вы обычно делаете это перед тестированием, подготовьте таймеры, которые вам понадобятся для эксперимента. Комбинированное событие, счетчик и таймер, как показано здесь, работает хорошо. Когда будет готово.
Поместите мышь в закрытый конец аллеи, один из которых обращен к стене. Немедленно запустите таймер, который будет определять общую продолжительность теста, и другой, который будет записывать время, проведенное в первом переулке. Понаблюдайте за исследовательским поведением животного и запишите задержку входа, а также общее время, проведенное в последовательных переулках, которые необходимо подсчитать.
В качестве входа мышь должна поставить все четыре ноги на следующую аллею. Учтены травмы, движение как вперед, так и назад. Запишите количество фекальных боли и то, происходило ли мочеиспускание.
Если мышь отвалилась, остановите часы и замените их на той аллее, с которой она выпала, лицом к первому переулку. По истечении пяти минут извлеките животное и очистите аппарат влажной тканью, а затем сухой салфеткой. Для каждого животного запишите задержку при входе в каждый переулок, количество входов в каждый из них и общее время, проведенное там.
В этом примере мыши с поражениями медиальной префронтальной коры были протестированы в традиционном лабиринте с повышенным плюсом. Пораженные животные, обозначенные как М, проводили больше времени в распростертых объятиях по сравнению с контрольной группой, показанной здесь как группа С, что подразумевает снижение тревожности по сравнению с контрольной группой. Точно так же при успехе всех аппаратов испытуемые животные проводили больше времени в самых дальних и наиболее тревожных аллеях аппарата по сравнению с контрольной группой.
Следуя этой процедуре. Другие методы, такие как лабиринт «возвышенный плюс», могут быть использованы для дальнейшей характеристики изменений в тревожности.
Обзор
В этой статье описан модифицированный протокол плюс-лабиринта для измерения поведения, похожего на тревогу, у грызунов. Новый метод исключает двусмысленную центральную область, присутствующую в традиционных конструкциях плюс-лабиринта, что позволяет получить более ясные интерпретации исследовательского поведения.
Ключевые компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Анализ поведения
- Модели на грызунах
Фон
- Плюс-лабиринт является распространенным инструментом для оценки тревоги у грызунов.
- Традиционные конструкции включают центральную область, которая усложняет интерпретацию поведения.
- Исключение этой области может улучшить ясность результатов.
- Аппарат последовательных аллей предлагает новый подход к измерению поведения, похожего на тревогу.
Цель исследования
- Разработать более эффективный метод оценки тревоги у грызунов.
- Предоставить ясную альтернативу возвышенному плюс-лабиринту.
- Ускорить исследование поведения, связанного с тревогой, после генетических или фармакологических вмешательств.
Использованные методы
- Использование аппарата последовательных аллей с постепенно сужающимися аллеями.
- Измерение латентности входа в аллеи и времени, проведенного в каждой аллее.
- Запись исследовательского поведения и физиологических реакций (например, фекалий).
- Сравнение поведения между лезированными и контрольными животными.
Основные результаты
- Лезированные животные проводили больше времени в открытых аллеях по сравнению с контрольными.
- Изменения в поведении были стабильны как в традиционном плюс-лабиринте, так и в аппарате последовательных аллей.
- Новый аппарат обеспечил более ясные представления о поведении, похожем на тревогу.
- Результаты подтверждают валидность метода последовательных аллей для оценки тревоги.
Выводы
- Аппарат последовательных аллей является многообещающим инструментом для исследования тревоги.
- Исключение центральной области улучшает интерпретацию исследовательского поведения.
- Этот метод может улучшить понимание механизмов тревоги у грызунов.
Часто задаваемые вопросы
Executive Industry Relevance
The successive alleys apparatus addresses a key limitation in rodent anxiety testing by eliminating the ambiguous central area of the plus-maze, thereby improving the clarity of behavioral readouts. This enhancement supports more reliable target validation and mechanistic de-risking in early discovery, particularly when confirming phenotypes from genetic or pharmacological interventions. The method provides a complementary assay that can increase predictive confidence in anxiety-related drug discovery programs.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses by measuring anxiety-like behavior with reduced interpretive ambiguity.
- Operational Value: Supports biological de-risking through consistent readouts across alleys, facilitating target confirmation in mutant models.
- Predictive Value: Offers orthogonal validation of plus-maze results, improving confidence in phenotypic screening outcomes.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Produces quantitative dependent variables such as latency to enter alleys and time spent per alley, enabling dose-response and genotype-phenotype correlations.
- Operational Value: Features a simple, linear design with standardized alley dimensions (25 cm length, decreasing width and wall height) that supports assay reproducibility.
- Scalability: Can be adapted for high-throughput screening readiness due to its ease of cleaning, setup, and cross-lab standardization.
Translational & Preclinical Research
- Translational Continuity: Aligns with disease-relevant systems by modeling anxiety-like traits applicable to neuropsychiatric disorder research.
- Mechanistic De-risking: Helps distinguish between general locomotor changes and specific anxiety phenotypes when used alongside complementary tests.
- Preclinical Model Support: Useful in ENU-based mutagenesis programs where only single mutant examples are available, providing confirmatory behavioral data.
Pipeline & Workflow Integration
The successive alleys apparatus fits within the discovery continuum from early target validation through lead identification, offering a refined behavioral readout that reduces noise in exploratory assays.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by isolating the independent variable (alley position/anxiogenic gradient) to measure dependent variables like exploratory avoidance.
- Screening: Enables assay readiness through standardized timing, entry counting, and fecal boli recording as quantitative outputs.
- Analytics: Generates measurable endpoints such as alley entry latency and total time spent, which help compare conditions across treatment groups.
- Translational Research: Connects to preclinical validity by confirming anxiety-related phenotypes observed in other models, reducing false-positive advancement.
- Enterprise Reuse: Functions as a reusable behavioral platform across multiple projects due to its simple construction and minimal training requirements.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by reducing mechanistic ambiguity in anxiety-like behavior assessment.
- Operational Value: Enhances reproducibility through standardized apparatus dimensions and clear scoring criteria (e.g., all four feet required for alley entry).
- Strategic Value: Improves go/no-go decision-making by providing confirmatory data that reduces reliance on single-assay outcomes.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of compounds or genetic targets based on convergent anxiety phenotypes across multiple behavioral paradigms.
Implementation Considerations
- Requires basic neuroscience or behavioral pharmacology expertise to interpret exploratory patterns and distinguish anxiety from locomotion.
- Needs standard laboratory timers and counters; no specialized instrumentation beyond the wooden apparatus and clamping system.
- Demands cross-team standardization in acclimation periods (5–20 min), cleaning protocols, and scoring rules to ensure reproducibility.
- Involves adaptation considerations when translating across species (e.g., mice vs. rats) due to differences in size and exploratory thresholds.
- Limited by the need for manual observation scoring unless paired with automated tracking systems, which may increase implementation complexity.
