Перитонеальная изоляция нейтрофилов низкой плотности: метод получения нейтрофилов низкой плотности из жидкости перитонеального лаважа с использованием магнитно-активированной сортировки клеток

Нейтрофилы низкой плотности, или LDN, представляют собой отдельную субпопуляцию нейтрофилов, обнаруженную в повышенном количестве при патологических состояниях, таких как рак желудочно-кишечного тракта. LDN могут быть выделены из полостных полостей или жидкости для промывания брюшины пациентов.

Сначала отфильтруйте жидкость для промывания для удаления остатков тканей. Центрифугируйте фильтрат для получения гранулы, содержащей клетки крови, в том числе LDN. Повторно суспендируйте его в подходящем буфере. Нанесите слой этой суспензии на подходящий градиент плотности, оптимальный для изоляции LDN.

Центрифуга для разделения различных компонентов крови на основе их относительной плотности. Более плотные эритроциты образуют нижний слой, в то время как наименее плотная плазменная фракция образует самый верхний слой. Менее плотные ЛДН занимают промежуточный слой наряду с другими мононуклеарными ячейками.

Переложите промежуточный слой в свежую пробирку, содержащую блокирующий реагент. Компоненты реагента блокируют неспецифические сайты связывания на всех поверхностях клеток, не являющихся мишенями, и повышают специфичность к LDN при последующем мечении.

Добавьте конъюгированные антителами м