УФ-видимая спектроскопия для мониторинга образования тромбов фибрина

В ответ на рану ряд ферментативных реакций инициирует образование нерастворимой белковой сети — фибринового сгустка, который запечатывает кровеносные сосуды и предотвращает чрезмерную кровопотерю.

Чтобы контролировать образование фибринового сгустка in vitro, начните с многолуночного планшета, содержащего буфер для образования тромба. Буфер состоит из ионов кальция — кофактора — и фибриногенов — растворимых гликопротеинов, необходимых для свертывания.

Обработайте лунку тромбинами — протеолитическим ферментом, который инициирует реакцию.

Вставьте пластину в УФ-видимый спектрофотометр. Освещайте лунку светом с длиной волны 350 нанометров и записывайте поглощение раствора через равные промежутки времени.

Первоначально падающий свет проходит через прозрачный раствор, содержащий растворимые фибриногены, демонстрируя минимальное поглощение света и максимальное пропускание. Детектор собирает проходящий свет и генерирует спектры, показывающие зависимость поглощения от времени, коррелируя с мутностью раствора.

Со временем, в присутствии ионов кальция, тромбин расщепляет растворимые фибриногены, высвобождая фибрины. Эти нерастворимые фибрины взаимодействуют, образуя трехмерную сеть фибрина —