Индуцирование проникающего черепно-мозгового повреждения у взрослых мух дрозофил

Возьмем, к примеру, недавно появившихся, генетически модифицированных взрослых мух дрозофилы.

Грибовидные тела в мозге мухи содержат нейроны, которые экспрессируют зеленые флуоресцентные белки.

Грибовидные тела — это структуры, содержащие сложные нейронные сети, необходимые для обучения и памяти.

Обезболите мух на углекислой салфетке.

Под стереомикроскопом, оснащенным необходимыми фильтрами, визуализируйте тела грибов, выражающие зеленую флуоресценцию.

Возьмите продезинфицированную булавку Minutien и протолкните ее через капсулу головки в тело гриба.

Это приводит к повреждению нейронов тела гриба и нарушает работу нейронных сетей, нанося проникающую черепно-мозговую травму.

Далее аккуратно снимите булавку с ширинки.

Поместите раненых мух во флакон с едой и дайте им восстановиться для дальнейших исследований.

После обезболивания мух на углекислом газе отсортируйте только что закрытых молодых самцов мух F1 в течение шести часов после их выведения и поместите их в чистые флаконы, содержащие пищу, с 40 или менее мухами во флаконе. Затем продезинфицируйте мельчайшие булавки, поместив примерно 100 булавок в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитра, заполненную 70% этанолом, на пять минут. Затем продезинфицируйте подушечку с углекислым газом в кисти, распылив 70% этанол и вытерев насухо чистой салфеткой без ворса.

Когда инструменты станут чистыми и сухими, перенесите 40 или менее отсортированных самцов F1 на чистую площадку и разделите их на две группы. Одна группа будет служить контрольной для неповрежденных мух, а вторая экспериментальная группа будет подвергаться проникающей черепно-мозговой травме. Затем с помощью щипцов вытащите четыре-пять новых мельчайших булавок из микроцентрифужной пробирки и поместите их рядом с краем прокладки для углекислого газа. Затем под рассекающий прицел выберите прямой мельчайший булавку с острым концом. Повторно используйте острые булавки и поместите поврежденные или тупые булавки в отдельную пробирку, содержащую 70% этанола, для безопасной утилизации.

Затем для мух со стандартным кросс-генотипом включите светодиодную лампу стереомикроскопа, оснащенную соответствующими фильтрами возбуждения и излучения зеленого флуоресцентного белка, который обеспечивает возбуждение на частотах от 440 до 460 нанометров и визуализацию на глубине от 500 до 560 нанометров. Затем выберите муху из экспериментальной группы и расположите муху так, чтобы экспериментатор имел дорсальный вид на головную капсулу с головой мухи вправо. С помощью щипцов возьмите и держите выбранную мельчайшую булавку в одной руке, а кисть в другой руке. Затем поместите щетку на внутреннюю часть спинной грудной клетки и осторожно надавите вниз, чтобы стабилизировать муху.

Направьте кончик мельчайшей булавки на тела грибов, тела клеток с правой стороны головы и проникните в капсулу головы. Если вы используете ориентиры, нацельтесь на тыльную кутикулу головы между глазом и тыльным ободком глаза. После завершения травмы с помощью кисти аккуратно оттолкните головку от мельчайшего штифта. При использовании мозга для секвенирования РНК или qRT-PCR сделайте вторую травму на левой стороне головы. После того, как все подопытные мухи будут повреждены, поместите контрольную и поврежденную мухи в отдельные промаркированные флаконы с пищей.