Использование животных Модель Сепсис для оценки Роман травяной терапии

Общая цель этой процедуры заключается в создании мышиной модели сепсиса с помощью хирургической процедуры, называемой лигированием и пункцией SQL, или CLP. Для этого сначала делается разрез средней линии размером от 1,5 до двух сантиметров на животе мыши. Затем секум обнажается и перевязывается, затем сыворотка прокалывается, чтобы вызвать бактериальную транслокацию.

Наконец, разрез закрывается. В конечном счете, могут быть получены результаты, которые показывают повышение уровня системных и перитонеальных цитокинов, а также такие симптомы, как вялость и летальность. Я собираюсь показать вам создание модели мышиного сепсиса под названием «Сация и пункция», которая модифицирована из оригинальной модели, разработанной доктором Чандри и его сотрудниками.

Главное преимущество этой модели заключается в том, что она является наиболее актуальной моделью сепсиса. Кроме того, он прост, хорошо охарактеризован и экономически целесообразен, поэтому широко используется в области исследований сепсиса и воспаления. В качестве примера мы продемонстрируем использование этой модели для оценки терапевтического потенциала экстракта трав при сепсисе.

Чтобы приготовить травяной экстракт, замочите 10 грамм травы в 200 миллилитрах воды при температуре 85 градусов Цельсия на один-четыре часа, чтобы удалить нерастворимые частицы, центрифугируйте водную фракцию при 3300 г в течение 20 минут при четырех градусах Цельсия. Далее отфильтруйте надосадочную жидкость через фильтр 0,2 мкм. Затем дополнительно концентрируют фильтрат с помощью центробежного фильтра с молекулярной массой 10 000 килодальтон и вращением при 5 000 G в течение 60 минут при четырех градусах Цельсия.

С помощью макрофагальных культур проводили скрининг низко- и высокомолекулярных фракций на предмет ингибирования активности поздних провоспалительных медиаторов, таких как высокоподвижный групповой бокс один или гемоглобин один. Чтобы начать выделение макрофагов первыми, межбрюшинный вводил два миллилитра 4%-го гликолевого бульона нормальным мышам после трех дней сбора первичной культуры перитонеальных макрофагов, макрофаги в DMEM добавляли 10% FBS, два миллимоляра глутамина и 1% пенициллин. Стрептомицином аккуратно промойте адгезивные макрофаги Оптимом и выдержите их в той же среде в течение двух часов.

Затем стимулируйте их бактериальным эндотоксином липополисахаридом или ЛПС через 16 часов после стимуляции. Соберите клеточную кондиционированную среду и используйте ее для проведения вестерн-блоттинга. Для измерения уровня HM GB one.

Количественно оцените интенсивность полосы с помощью стандартной кривой, полученной с помощью очищенного H. mgb one, чтобы установить сепсис после анестезии мыши с внутримышечной инъекцией 75 мг на килограмм кетамина и 20 мг на килограмм ксилазина. И с помощью щипки на пальце ноги проверить его уровень седативного эффекта. Поместите мышь в лежачее положение, очистите живот, затем сделайте 15-миллиметровый разрез по средней линии, чтобы обнажить слепую кишку примерно в пяти миллиметрах от кончика сиквела, с помощью шелкового шва из четырех ох.

Перевязайте слепую кишку, а затем с помощью иглы 22 калибра проколите перевязанную культю продолжения один раз, чтобы обеспечить выдавливание стула, немедленно верните слепую кишку в ее нормальное внутрибрюшное положение и закройте брюшную полость. После животные вновь обретают сознание и подвижность. Верните клетку обратно в помещение для животных через 24 часа.

После CLP внутрибрюшинно вводите 200 микролитров травяного экстракта или контролируйте ежедневно в течение трех дней. Следите за выживанием животного до тех пор, пока это необходимо, в течение нескольких часов после последовательного лигирования и пункции или операции CLP. У животных проявляются клинические признаки сепсиса, которые включают пилоэрекцию, вялость, сбивание в кучу и снижение потребления пищи и воды.

Животные, у которых развивается тяжелый перитонит с последовательной системной инфекцией, обычно умирают в течение 48-96 часов. Тем не менее, даже сопоставимые по возрасту, полу и генетическому происхождению животные могут отчетливо реагировать на операцию в ходе экспериментального сепсиса, например, через 48 часов после CLP. В то время как некоторые животные могли приблизиться к состоянию кургана, определенному здесь, другие могут оставаться в неумирающем состоянии.

Всестороннее исследование циркулирующих цитокинов выявило значительные различия в уровнях нескольких цитокинов, включая IL 6, kc, MIP 2 и ST nfr, один между мышами в умирающем и неумирающем состояниях. Примечательно, что эти медиаторы воспаления были классифицированы как суррогатные маркеры сепсиса, поскольку их циркулирующие уровни являются надежными предикторами летального исхода при экспериментальном или клиническом сепсисе. Кроме того, CLP индуцировал местное высвобождение различных про- и противовоспалительных цитокинов и хемокинов, например, через 48 часов после CLP значительные количества цитокина IL 6 и хемокинов KC и MI P 2 все еще могут быть измерены не только системно в крови, но и локально в жидкости брюшинного лаважа.

Здесь были оценены способности различных растительных экстрактов или контрольных соединений на предмет их способности ингибировать индуцированное эндотоксином однократное высвобождение HGB. Те из них, которые обладали способностью ингибировать однократное высвобождение HGB, были дополнительно протестированы in vivo с использованием мышиной модели сепсиса. Из-за поздней и продолжительной кинетики накопления HGB one при экспериментальном сепсисе, первая доза ингибиторов HGB one была введена через 24 часа после начала сепсиса, в тот момент, когда у мышей развились явные признаки сепсиса, включая вялость, диарею и пилоэрекцию, как показано здесь, отсроченное и повторное введение основного зеленого компонента T epi Gallo. катехин 3 ГАЛЛАТ или EGCG, начиная через 24 часа после начала сепсиса, значительно спас мышей от летального сепсиса, даже при пероральном приеме EGCG все еще спасал мышей от смертельного сепсиса, значительно увеличивая выживаемость животных с 16% до 44%. После освоения этой лигирования и модели пункции можно закончить менее чем за пять минут, если она выполнена правильно.