Мышиной модели для неинвазивной визуализации для выявления и мониторинга рака яичников Рецидив

Общая цель этой процедуры заключается в создании внутрибрюшинной модели ксенотрансплантата при раке яичников, которая имитирует клинический профиль, наблюдаемый у пациенток с раком яичников. Это достигается путем внутриматочного введения стволовых клеток рака яичников, меченных флуоресценцией mCherry, у голых мышей. Затем установление опухолевой прогрессии и ответ на терапию определяются путем измерения флуоресценции в качестве суррогата опухолевой нагрузки.

Это позволяет в режиме реального времени отслеживать прогрессирование опухоли или реакцию на лечение без необходимости жертвовать мышами. Модель, которую мы здесь показываем. B резюмирует клинический профиль, наблюдаемый у пациенток с раком яичников, и, следовательно, позволяет нам не только изучать биологию заболевания, но и выявлять новые методы лечения, особенно при рецидивирующем раке яичников.

Модель позволяет нам следить за прогрессированием опухоли, чтобы в режиме реального времени определить, реагируют ли они на химиотерапию, а также определить, будет ли заболевание рецидивировать, если прекратить химиотерапию. Чтобы начать эту процедуру, обезболите семи-восьминедельную голую мышь тимуса с 2% фтора. Затем убедитесь, что он полностью обезболился, ущипнув его подушечку ноги.

Далее положите животное на правый бок на него, стерильную марлевую салфетку головой в сторону от экспериментатора. Нанесите мазь на оба глаза, чтобы предотвратить сухость во время анестезии после этого. Быстро вставьте голову животного в систему носового обтекателя, подключенную к исофурановому вапорайзеру.

Продезинфицируйте правую сторону живота с помощью спиртовых салфеток, а затем йода. Затем поместите на него стерильную хирургическую простыню с помощью стерильных хирургических ножниц и щипцов. Сделайте разрез кожи в один-два сантиметра в нижнем левом квадранте мыши.

После этого приподнимают мышцу и делают разрез для того, чтобы добраться до брюшины. Впоследствии рассеките косую мышцу, чтобы обнажить брюшную полость. Затем с помощью стерильного зажима гемостата расположите левый маточный рог как с передней, так и с задней стороны рога.

Поместите передний зажим прямо под фаллопиевой трубой, а задний зажим — прямо над шейкой матки. На этом этапе предложите второму экспериментатору. Введите клеточную суспензию, поместив содержащую клетки иглу под углом 45 градусов перпендикулярно рогу.

Затем медленно вводят 50 микролитров клеточной суспензии в просвет маточного рога. Затем отпустите передний зажим, а затем задний. После этого поместите маточный рог обратно в брюшную полость.

Закройте брюшину с помощью синтетического рассасывающегося шва. Затем закройте кожу с помощью тканевого клея. Когда закончите, извлеките мышь из носового конуса и поместите ее обратно в клетку.

Убедитесь, что животное бодрствует и активно, прежде чем оставлять его без присмотра. Добавляйте ибупрофен в питьевую воду в течение первых 48 часов после операции. Теперь откройте программное обеспечение для молекулярной визуализации, затем откройте программное обеспечение Mars Capture.

Этот модуль обеспечивает скоординированное управление настройками съемки Марса с использованием возможностей систем съемки и анализа изображений. Затем введите предопределенные значения захвата. Впоследствии сохраните параметры в виде отдельных файлов сеанса.

Затем создайте протокол последовательности вращения, нажав кнопку «Создать редактировать протоколы» В окне получения системного интерфейса выберите ранее сохраненный файл флуоресцентного сеанса и сохраните его в качестве первого шага. Затем выберите соответствующий файл сеанса рентгена и сохраните его на втором шаге. Выбрав первый шаг.

Используйте набор серий поворотов из всплывающего меню «Перед захватом изображения», чтобы задать желаемый диапазон и приращение начального угла. Чтобы обеспечить бесшовную визуализацию объектов, конкретные значения включают начальный угол минус 180 градусов, диапазон 375 градусов и шаг 15 градусов. Сохраните протокол и нажмите кнопку «Готово» для инициализации Марса.

Затем запустите выравнивание, нажав кнопку предварительного просмотра в меню захвата, чтобы открыть вкладку вращателя, используйте настройку захвата флуоресценции, как указано для визуализации вишни M. Держите дверцу открытой во время предварительного просмотра, чтобы ускорить позиционирование, что также позволяет визуально контролировать положение мыши во время процедуры выравнивания. Далее выберите опцию загрузки мыши и пройдитесь по ряду меню позиционирования.

Убедитесь, что трубчатый конец складного носового обтекателя находится в углублении носового обтекателя. Затем поместите мышь под наркозом в положение лежа так, чтобы ее голова находилась в носовом конусе. Начните калибровку в положении нулевого градуса брюшной стороной животного вниз.

С помощью двух ручек системы вращения расположите животное так, чтобы оно выглядело по центру в окне предварительного просмотра. Повторите процесс, как было предложено для положений минус 180, минус 90 плюс 90 и плюс 180 градусов, и нажмите «Готово». Вот пример фильма, созданного на основе полученных изображений.

На этом рисунке показана корреляция между внутрибрюшинной опухолевым бременем и изображением, полученным с помощью флуоресцентного рентгеновского излучения. Примерно через 32 дня после инъекции клеток рака яичников вишни F two M была проведена 2D-визуализация, и мыши были принесены в жертву, чтобы соотнести полученное изображение с фактической опухолевой нагрузкой. Здесь показаны наборы данных о вращении, которые позволяют получать многоракурсную визуализацию и обнаруживать опухоли в контрольной группе, обработанные паклитакселом и рецидивирующие мыши.

Изображение одной мыши на каждой панели отображается при ее вращении с помощью системы Марса. Обратите внимание, что даже у контрольных мышей со значительной опухолевой нагрузкой размер опухоли может быть недооценен в зависимости от угла, под которым было получено изображение. После просмотра этого видео вы сможете установить внутрибрюшинную модель ксенотрансплантата рака яичников с помощью внутриматочного пути, а также сможете выполнять визуализацию живых животных с помощью мультимодальной системы вращения.