Intraportal трансплантация панкреатических островков в мышиной модели

Меня зовут Томас Линн, я главный исследователь Исследовательской группы по диабету в Университете Юстуса Либиха, Гиссен, Германия. Трансплантация островковых клеток поджелудочной железы является методом лечения сахарного диабета 1 типа. Экспериментальная трансплантация островков проводится в капсулу почки, в то время как клинические программы отдают предпочтение внутрипортальному пути.

Поэтому мы считаем, что необходимы дополнительные исследования по трансплантации внутрипортальных островков в доклинических моделях. Например, участки островков подвергаются воздействию крови, так как место трансплантации является внутрисосудистым. Кроме того, техника микрохирургии требует определенного опыта.

Например, после инъекции в воротную вену может возникнуть кровотечение, или могут возникнуть проблемы с анестезией или с поддержанием массы тела мыши-реципиента. Поэтому мы считаем, что визуальное объяснение процедуры имеет решающее значение. В этом видео основное внимание уделяется внутрипортальному пути трансплантации островковых клеток.

Для достижения нормальной гликемии у мышей с диабетом его можно использовать для сингенной и аллогенной трансплантации у черных мышей, а также в сингенных моделях у голых мышей-реципиентов. Извлеките изолированные островки из инкубатора и поместите их под проточную скамейку. Центрируйте островки круговыми покачивающими движениями чашки Петри.

Налейте 100-микролитровую среду в одномиллилитровый шприц с помощью синей иглы. Затем добавьте 350 островков в 300 микролитров раствора Хэнка. Держите шприц в вертикальном положении, чтобы островки осели.

Уменьшите объем до 50 микролитров. Замените синюю иглу на коричневую. К этому же шприцу добавьте 150 микролитров градиентной среды доверху, чтобы довести до конечного объема 200 микролитров в шприц.

Избегайте появления пузырьков воздуха. Держите шприц в вертикальном положении. Слегка поверните его, чтобы избежать слипания островков.

Островки осядут на конусе шприца в течение двух-трех минут. После трех дней инъекции стрептозотоцина проверьте уровень глюкозы в крови, проколов хвостовую вену с помощью портативного глюкометра. Обезболивайте мышей дальзилозином и кетамином путем внутрибрюшинного введения.

Поместите мышей в лежачее положение на теплой термопластине. Проверьте глубину анестезии, зажав палец ноги. Очистите кожу от бескожного инфекта.

Чтобы предотвратить пересыхание глаз, поддерживайте их во влажном состоянии с помощью глазной мази. Начните с электротомии, удерживая кожу щипцом и делая ножницами средний разрез длиной от двух до трех сантиметров. Наложите на края раны стерильную влажную марлю, чтобы она оставалась влажной.

Держите кишечник на месте слева и снаружи брюшной полости. Переместите двенадцатиперстную кишку и найдите поджелудочную железу. С помощью большого и указательного пальцев обнажите воротную вену.

Медленно вводите островки по 200 микролитров в воротную вену. Надавите указательным пальцем на место прокола на шесть минут, чтобы остановить кровотечение. Осторожно верните в исходное положение кишку, брюшину и слой мышц брюшного пресса.

С помощью щипцов подтяните кожу, закройте мышцы разрезом, а верхний слой кожи нанесите рассасывающимся шелковым швом. Примените ранозаживляющее средство. Поддерживайте температуру тела на уровне 37 градусов Цельсия на теплой термопластине.

Наблюдайте за мышью до тех пор, пока она не придет в сознание. Принимайте трамадол вместе с жидкостью для снятия боли. После трансплантации островков в первые сутки наблюдалось резкое падение уровня глюкозы в крови с 23 миллимоляров на литр до 4,6 миллимоляров на литр у мышей с стрептоиндуцированным диабетом.

Нормальная гликемия сохранялась до 121 дня. Масса тела и уровень глюкозы в крови примерно следовали той же схеме. После инъекции стрептозотоцина и хирургического вмешательства масса тела снизилась; Со второго дня он имеет тенденцию повышаться до нормы, с 25,3 грамма до 29,7 грамма.

У мышей с большим несоответствием гистосовместимости после трансплантации островков уровень глюкозы в крови снизился до 4,4 миллимоль на литр, а нормальная гликемия наблюдалась до 10 дней. После этого он начинает отторгаться. Масса тела мышей с диабетом также следует аналогичной схеме.

При успешном приживлении пересаженных островков поджелудочной железы в печень. В данном исследовании исследуется внутрипортальный путь трансплантации островковых клеток. Этот протокол очень эффективен в снятии диабетического стресса и предоставляет всестороннюю возможность изучить трансплантацию островковых клеток.

Этот протокол подтверждает, что около 350 островков способны обратить вспять гипергликемическое состояние. Более того, ни одна из мышей не умерла во время процедуры, и гликемический контроль был сохранен.