Дизайн Цекал Лигация и прокол и интраназальные инфекции Двойная модель сепсиса индуцированной иммуносупрессии

Этот протокол описывает методы для измерения инфекционных исходов, лежащих в основе вторичных больничных приобретенных инфекций в иммуносупрессивном состоянии, сначала путем создания цекальной перевязки / прокол амышки затем бросая им вызов с интраназальной инфекцией создать клинически актуальную модель иммуносупрессионного сепсиса.

Подготовь мышь к операции. Бритье нижних квадрантов живота с помощью бритвы и дезинфицировать область йодом. Поместите мышь на чистую рабочую поверхность на спине с головой, указывающей от оператора.

Сделайте продольный разрез кожи длиной около полуметра в левой нижней части живота. Будьте осторожны, чтобы не проникнуть в брюшную полость. Используйте маленькие ножницы, чтобы продлить разрез примерно на один-два сантиметра.

Сделайте внутримышечное разрез, чтобы получить доступ в брюшную полость. В большинстве случаев, cecum находится на левой стороне живота. Изолировать cecum.

Используя тупые, анатомические типсы, аккуратно и осторожно подвергайте cecum через разрез. Шаг четвертый - перевязка. Положение перевязки на cecum определяет уровень тяжести сепсиса.

Лигатинг примерно 75% cecum вызывает тяжелый сепсис. Лигатирование 50% cecum вызывает сепсис среднего уровня. В то время как лигатинг 25% или менее cecum приведет к незначительному сепсису.

Ligate cecum в назначенном положении. Убедитесь в том, чтобы не ligate илеоцекал клапана. Пятый шаг заключается в проколе cecum.

Используя иглу, перфорировать cecum с одного через и через прокол на середине пути между перевязки и кончик cecum. Убедитесь, что вы не проколоть кровеносные сосуды. Чтобы убедиться, что был полный прокол, выдавить небольшую каплю кала из обоих отверстий иглы.

Тщательно замените cecum в брюшную полость. Закройте брюшную мускулатуру, применяя простые бег шовы и закройте кожу. Очистите кожу йодом.

Введать мышь с предварительно разогретым солевым раствором, чтобы реанимировать. Поместите мышь обратно в клетку с неограниченным доступом к пище и воде. Примерно через три дня после cecal перевязки и прокола или процедуры CLP, мы подвергаем мышь второй удар с интраназальной инфекцией, чтобы стимулировать пневмонию, которая часто возникает при сепсисе.

Подойдите к шее мыши сзади, плавно и нежно. Большой и указательный пальцы левой руки образуют U-образное положение. Держите шею сразу за ушами, чтобы голова мыши была полностью сдержана.

Ввести интраназальной инфекции. Используя 100 микролитровую пипетку, привить штамм золотистого стафилококка интраназально. Держа мышь в вертикальном положении, медленно опускайте два-три микролитера бактериального раствора в обе ноздри мыши.

Поднимите мышь вверх и вниз с головой вверх и хвостом вниз, чтобы помочь бактериальному раствору войти в трахею. Поднимите мышь быстро, нежно и медленно опуская ее. Повторите закапывания 15 раз или до тех пор, пока все бактериальные растворы прививается.

Последним шагом является завершение процедуры. Положите мышь на угловой постельных принадлежностей примерно под углом 35 градусов, чтобы восстановиться. Убедитесь, что мышь на спине с головой заложить.

Следите за мышью, чтобы убедиться, что она полностью оправилась от анестезии и процедуры. После уплощения постельных принадлежностей поместите мышь обратно в клетку с неограниченным доступом к пище и воде. Мыши начали умирать примерно через 12 часов после индукции перитонита.

Смертность была гораздо выше для мышей с CLP до пневмонии. Через три дня после операции, CLP мышей было больше смертности с интраназального введения золотистого стафилококка. Уровни провоспалительных цитокинов в сыворотке крови значительно возросли через 24 часа после бактериального закапывания у мышей сепсиса по сравнению с мышами, у которые имели только CLP или Sham оперировали мышей со вторым ударом.

Тем не менее, дважды хит мышей выставлены значительное снижение bal жидкости цитокинов уровнях по сравнению с SA и Шам хирургии плюс SA мышей. Таким образом, CLP ухудшает защиту хозяина и повышает восприимчивость к инфекции. Эта двойная ударная модель является ценным инструментом для понимания молекулярных механизмов взаимодействия хозяина и патогена, которые могут открыть путь для разработки новых, эффективных препаратов и других терапевтических средств для супербактерий инфекций.