Isolation of Myoepithelial Cells from Adult Murine Lacrimal and Submandibular Glands

Tatiana Zyrianova; Liana  V. Basova; Helen Makarenkova

doi:10.3791/59602

Изоляция миоэпителиальных клеток от взрослых Мурина Лакрималила и Субмандибулярных желез

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Isolation of Myoepithelial Cells from Adult Murine Lacrimal and Submandibular Glands

Изоляция миоэпителиальных клеток от взрослых Мурина Лакрималила и Субмандибулярных желез

Full Text

8,556 Views

07:15 min

June 11, 2019

DOI: 10.3791/59602-v

Tatiana Zyrianova¹, Liana V. Basova¹, Helen Makarenkova¹

¹Department of Molecular Medicine,The Scripps Research Institute

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for the isolation and separation of two smooth muscle cell types from the lacrimal gland: myoepithelial cells (MECs) and pericytes. Using genetic labeling, the method enables purification for comparative analysis of healthy and diseased cells, thereby contributing to our understanding of cell function and regenerative abilities.

Key Study Components

Research Area

Cell biology
Regenerative medicine
Exocrine gland research

Background

MECs and pericytes play crucial roles in glandular function and vascular stability.
This protocol is adaptable for isolating similar cell types from other exocrine glands.
Understanding their functions can provide insights into various biological processes and diseases.

Methods Used

Genetic labeling and purification of myoepithelial cells and pericytes.
Murine model with tamoxifen-inducible alpha SMA driven reporter mice.
Fluorescence-activated Cell Sorting (FACS) for cell analysis.

Main Results

Successfully isolated and labeled MECs and pericytes from murine lacrimal glands.
Facilitated downstream applications including cell culture and gene expression studies.
Demonstrated differences in cell morphology and labeling efficiency.

Conclusions

The study provides a valuable protocol for the isolation of specific cell types within the lacrimal gland.
This advancement may enhance future research related to exocrine glands and their cellular functions.

Frequently Asked Questions

What are the key benefits of this isolation protocol?

It allows the purification of specific cell types for detailed analysis of their functions and regenerative abilities.

Can this method be used for other tissues?

Yes, the protocol can be adapted for isolation from other exocrine glands.

What is the role of myoepithelial cells?

Myoepithelial cells assist in glandular secretion and contractile functions.

What are pericytes and their significance?

Pericytes are essential for vascular stability and regulation of blood flow in capillaries.

What applications can the isolated cells be used for?

The cells can be utilized for in vivo/in vitro experiments, including cell culture and molecular studies.

How is cell labeling achieved in this protocol?

Cell labeling is accomplished through injection of tamoxifen to activate the desired reporting mechanism.

What technologies were critical for this study?

Fluorescence microscopy and FACS were essential for cell analysis and sorting.

Лакримальная железа (LG) имеет два типа клеток, выражающих атоин(ЗСМА) ( и миоэпителиальные клетки (МЭК) и перициты. MECs имеют эктодермального происхождения, найденные во многих железистых тканях, в то время как перициты являются сосудистыми гладкими мышечными клетками эндодермального происхождения. Этот протокол изолирует МЭЦ и перициты из мурин-ЛГ.

Этот протокол имеет важное значение, поскольку он позволяет разделение и изоляцию двух гладких линий мышечных клеток, миоэпителиальных клеток и перицитов. Этот метод сочетает в себе генетическую маркировку гладких мышечных клеток с помощью маркеров поверхности клеток для очистки популяций миоэпителиальных клеток и перицитов. Этот протокол позволяет сравнить функцию и регенеративные способности здоровых и больных миоэпителиальных клеток и обработку этих клеток для изучения экспрессии генов.

Миоэпителиальные клетки существуют в других экзокринных железах, таких как молочная железа, слюна и поджелудочная железа, что позволяет адаптировать этот протокол путем изоляции миоэпителиальных клеток и перицитов от любой другой ткани. Чтобы обозначить альфа гладкий мышечный актин или SMA экспресс-клеток, вводить от трех до четырех недель тамоксифен-неопружимый альфа SMA приводом репортер мышей с 100 микролитров тамоксифена на 20 граммов массы тела intraperitoneally один раз в день в течение двух дней. Для сбора лакримальной железы, через два-три дня после последней инъекции, используйте пинцет, чтобы осторожно тянуть одну железу и в то же время царапин соединительной ткани вокруг железы с острым кончиком ножниц, чтобы освободить железу.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos