Интрачехное закапывание стволовых клеток в термине неонатальных крыс

Описанный протокол для выполнения интракачальной трансплантации мезенхимальных стромальных клеток (MSCs) через интрачехальные инъекции в термине неонатальных крыс. Этот метод является клинически жизнеспособным вариантом для доставки стволовых клеток и препаратов в легкие неонатальной крысы, чтобы оценить их эффективность.

Интратрахеальная закапывания является клинической биотехнологической для доставки стволовых клеток и препаратов в неонатального легкого для оценки эффективности Chilman. Этот метод может быть добросовестным для использования с различными первичного применения в неонатальной крысы и является относительно легкой и экономически эффективной мерой для лечения легочных заболеваний. На послеродовой день пять, сдерживать анестезированные Sprague-Dawley крыс щенков, на 60 градусов угловой intubation стенд.

И прикрепить лабораторной маркировки ленты для всех четырех конечностей каждого щенка, чтобы обеспечить их на месте. Нанесите ленту под каждым носом, чтобы исправить головы. И определить первую шею для прокола трахеотомии.

Используйте 75%alcohol prep pad для дезинфекции области разреза. И сделать вертикальный 3-сантиметровый разрез средней линии над трахеей, чтобы избежать повреждения сонных артерий. Используйте изогнутые конические пинцеты без крючка, чтобы отмежеваться от жира и мышечных слоев, чтобы найти трахею.

Когда трахея может наблюдаться, используйте пинцет, чтобы схватить трахею и использовать 100 микролитров шприц оснащен 30 калибровочной иглой, чтобы ввести один раз десять пятой светлячок люциферазы GFP помечены мезенхимальных стромальных клеток в 30 микролитров солевого раствора в трахею, во время видочковой фазы. Когда все клетки были введены, закройте разрез с 160 шелковый стежок связывая узел как можно плотнее. И резки концы шва как можно короче.

Затем позвольте щенку оправиться от анестезии, в теплом месте с мониторингом, пока он не теплый, розовый, и способны спонтанного движения, прежде чем вернуть животное в клетку. Для отслеживания пересаженной мезенхимальных стромальных клеток человека через 15 минут после того, как крысы оправились от операции, интраперитонически вводят повторно анестезированной щенков с 125 миллиграммов на килограмм соли калия Люцифера в PBS. Через 10 минут после инъекции используйте небольшую систему визуализации животных для получения последовательных изображений с интервалом 5-15 секунд со средним биннингом, 1 f-стопом и 26-сантиметровым полем зрения.

Затем используйте программное обеспечение для визуализации для количественной оценки активности люминесценции из легких на основе автоматических областей интереса. Высокий уровень экспрессии GFP наблюдается в светлячках люциферазы, помеченных человеческими мезенхимальными стволовыми клетками. Мезенхимальные стволовые клетки могут быть дополнительно охарактеризованы их экспрессией маркера поверхности клеток и их способностью дифференцироваться в остеоциты, хондроциты и адипоциты.

Люминесценция изображений пересаженной мезенхимальных клеток человека в VIVO, показывает отсутствие люминесцентной сигнализации в легких регионах крыс, обработанных нормальным солевым раствором. У крыс, обработанных мезенхимальными стволовыми клетками, люминесценция наблюдается в трахее и центральных областях легких этих животных. Действительно, в этом репрезентативном анализе, количественная оценка интенсивности люминесценции показали, что крысы, обработанные мезенхимальными стволовыми клетками, продемонстрировали примерно в 13 раз увеличение активности люминесценции по сравнению с крысами, обработанными нормальным солевым раствором.

При попытке этой процедуры, важно, чтобы вскрыть и изолировать трахею, не ограничивая окружающие артерии. Этот метод позволяет изучать эффекты внутритрахального введения клеток и препаратов неонатальной болезни Палмера с помощью лучей с режимом человеческого пациента.