Хирургическая трансплантация опухолевых клеток в спинной мозг мышей

Целью нашего исследования является разработка мышиной модели глиомы спинного мозга. Мы стремимся ответить на такие вопросы, как: как можно улучшить воспроизводимость модели? Какие существуют оптимизированные хирургические методы имплантации опухолевых клеток?

И как эта модель может помочь в разработке эффективного лечения глиомы спинного мозга? Современные экспериментальные проблемы в основном заключаются в трех аспектах. Во-первых, практика определения положения инъекции в спинном мозге затруднена.

Во-вторых, решающее значение имеет минимизация расщепления клеток после инъекции. Наконец, уменьшение физического повреждения спинного мозга во время этого процесса требует отточенных операционных навыков. Наш протокол восполнил пробел в исследованиях в существующих моделях глиомы спинного мозга у мышей.

Современным моделям часто не хватает воспроизводимости и оптимизации хирургических методов. Мы стремимся способствовать этому, разрабатывая более надежную модель с точными методами впрыска и минимизируя физические повреждения, чтобы улучшить исследования и разведку лечения. Для начала культивируйте клеточную линию GL261-люциферазы в полной DMEM до фазы логарифмического роста.

Затем дважды промыть опухолевые клетки стерильным PBS и инкубировать с 0,05% раствором трипсина ЭДТА в течение трех минут. Переложите полученную клеточную суспензию в новую пробирку и центрифугируйте при температуре 500G в течение пяти минут. Выбросьте надосадочную жидкость с помощью пипетки и повторно суспендируйте гранулу в PBS.

Далее окрасьте клетки трипановым синим цветом и подсчитайте жизнеспособные клетки с помощью счетчика клеток. Приготовьте клеточную суспензию в концентрации пять умно-10 в степени шести клеток на миллилитр в стерильном ПБС. Для начала поместите мышь под наркозом на операционный стол.

Обнажите кожу и подготовьте чистое хирургическое окно. После сбривания волос в области спинной части шеи продезинфицируйте кожу раствором йода с последующим протиранием 75%-ным спиртом для дейодирования. Расположите мышь тыльной стороной вверх и закрепите конечности на столе с помощью медицинской ленты.

Поместите марлевую салфетку толщиной от одного до двух сантиметров под область шеи для поддержки, чтобы обеспечить лучший доступ к спинному мозгу. Далее с помощью хирургического скальпеля и лезвия сделайте продольный разрез примерно 1,5 сантиметра вдоль шеи. Аккуратно разделите мышцы шеи с помощью тупого рассечения, при этом не травмируя любые кровеносные сосуды.

Теперь тщательно рассеките мышцы, прилегающие к шейным позвонкам, чтобы обнажить седьмой шейный позвоночный остистый отросток, отчетливый костный ориентир у мышей. Установите точку прокола на расстоянии от 0,5 до 0,9 миллиметра от средней линии позвоночника. Тщательно промойте шприц с плоской иглой объемом 10 микролитров стерильным PBS два-три раза.

Наберите в шприц два микролитра суспензии опухолевых клеток, не вводя пузырьков воздуха. Стабилизируйте шейный позвоночный остистый отросток, мягко захватывая и поднимая его щипцами. С помощью скошенной иглы проколите твердую мозговую оболочку.

Затем переключитесь на плоский игольчатый шприц, чтобы ввести опухолевые клетки. После инъекции закройте разрез кожи, наложив шов на нейлоновый шов 3/0. Через 10 дней после операции у мышей, инокулированных клетками GL261-люциферазы, наблюдалась слабость задних конечностей и значительная потеря веса примерно на 20% со снижением выживаемости, прогрессирование до паралича задних конечностей с опухолями, что подтверждалось биолюминесцентной визуализацией, общей визуализацией и гистологическим исследованием.

Модель меланомы B16-F10 показала прогрессирование опухоли, аналогичную GL261, с биолюминесцентной визуализацией и общей визуализацией, подтверждая образование опухоли спинного мозга наряду с потерей веса и смертностью в течение 18 дней. Послеоперационный анализ показал легкие повреждения спинного мозга у 54 мышей в течение трех часов и умеренные травмы у трех мышей в течение трех дней. Мыши с травмами средней степени тяжести показали более значительную потерю массы тела по сравнению с мышами с легкими травмами.