Создание крысиной модели внутриматочных спаек через двойную травму: выскабливание и инфекция

Внутриматочные спайки (ВМС), наиболее распространенное патологическое последствие повреждения эндометрия, серьезно нарушают репродуктивную функцию. Травма и инфекция широко признаны ключевыми факторами риска развития ВМС. Мы успешно создали воспроизводимую модель ВМИ на крысах, объединив два метода критической травмы: механическое кюретаж и индукцию инфекции липополисахаридом.

Внутриматочные спайки, ВМИ, наиболее частое патологическое последствие повреждения эндометрия, серьезно нарушают репродуктивную функцию. Опухоль и инфекция широко признаны ключевыми факторами риска развития ВМА. Мы успешно создали воспроизводимую модель ВМИ на крысах, интегрировав два критических патогенных механизма: кюретаж и инфекцию.

Содержать самок крыс SD в возрасте от 8 до 10 недель, половозрелых и непарных в группах в условиях SPF. Ежедневно сдавайте мазок из влагалища крыс, чтобы определить стадию их эстрального цикла. Предметные стекла окрашивают гематоксилином.

Проводят хирургическое вмешательство в период течки. Перед операцией растворите липополисахарид, ЛПС, порошок в PBS в концентрации шесть миллиграмм на литр. Погрузите стерильные хирургические режущие швы 4/0 в раствор ЛПС на 24 часа.

Затем храните их в холодильнике при температуре четыре градуса по Цельсию, чтобы приготовить швы, пропитанные LPS. Перед индукцией анестезии введите бупренорфин подкожно в качестве предоперационной анальгезии. Затем обезболите крысу с помощью ингаляции изофлурана.

Оцените глубину анестезии с помощью рефлекса щипкового рефлекса на пальцах ног. Продолжайте действовать только в том случае, если не наблюдается никакой реакции на вывод средств. Выбрейте четырехсантиметровую плюс шестисантиметровую область на нижней брюшной стенке крысы с помощью машинки для стрижки волос.

Продезинфицируйте область тремя чередующимися скрабами 1%-ного повидон-йода и 70%-го этанола и накройте стерильной одноразовой хирургической простыней. Сделайте разрез кожи по средней линии нижней части живота над лобковым симфизом. Обнажите мышцу живота.

Аккуратно сделайте небольшой разрез в брюшной полости и продлите разрез. Следите за тем, чтобы случайно не повредить органы брюшной полости. Поверните и обнажите два маточных рога, расположенных над лобковым симфизом за мочевым пузырем.

Сделайте трехмиллиметровый разрез в правых маточных рогах на пять миллиметров выше разветвления, избегая при этом кровеносных сосудов. Вставьте скребковую ложку в правый рог через разрез матки. Соскабливайте полость матки до тех пор, пока она не станет неровной, а внутренняя стенка не станет шероховатой.

Поскребите примерно 30 раз в каждом направлении: спереди, сзади, влево и вправо. При расчесывании в направлении маточного рога равномерно прикладывайте усилие, чтобы предотвратить разрыв или перфорацию стенки матки. Ввести выпрямленную хирургическую иглу с пропитанным ЛПС швом через разрез правого маточного рога до конца полости.

Затем извлеките иглу, оставив шов ЛПС внутри всей правой полости матки с тремя или четырьмя сантиметрами длины шва, обнаженными над раздвоением. Оставить шов ЛПС в полости матки на 48 часов. Периодически закрывайте разрез на правом роге рассасывающимися швами 7/0.

Таким же образом обрабатывают правый маточный рог. Тщательно промойте брюшную полость стерильным физиологическим раствором, чтобы удалить остатки эндометрия. Закройте брюшную полость непрерывными рассасывающимися швами 4/0.

Введите 0,5% раствор цефазолина натрия в мышцу брюшной стенки для предотвращения инфекции в области хирургического вмешательства. Закройте кожу непрерывными рассасывающимися швами 4/0. Оставьте примерно два сантиметра шовной нити ЛПС, выступающих за пределы кожи.

Чтобы крысы не прогрызли оставшиеся швы, зафиксируйте их на коже рассасывающимся швом 4/0 в одном сантиметре от разреза брюшной полости. Обрежьте излишки шовного материала. Не выполняйте процедуры травмирования матки, если маточные рога обнажены после лапаротомии.

Промойте брюшную полость стерильным физиологическим раствором. Закройте брюшинную полость и кожу рассасывающимися швами 4/0. Через два дня после операции используйте щипцы для бережного извлечения швов ЛПС из полости матки крыс в группе двойной травмы.

Соберите и осмотрите матку через 7 и 14 дней после первоначальной операции в обеих группах, что соответствует примерно двум и четырем регулярным эстральным циклам соответственно. Вновь откройте брюшную полость после обезболивания крысы изофлураном. Удалите оба рога матки и оцените макрохарактеристики.

Наблюдайте за набуханием, застойными явлениями, сужением света, шероховатостью поверхности или потерей эластичности. Проверьте двустороннюю симметрию рогов и осмотрите полости матки на предмет окклюзий, стеноза или выпота. Усыпляйте крыс путем передозировки ингаляции изофлурана, одобренной Комитетом по этике животных, после сбора маточных рогов, поскольку это не является операцией, не приводящей к выживанию.

Грубое морфологическое наблюдение за рогами матки. Через семь дней после операции двусторонние рога матки в группе имитации операции остаются симметричными, острыми и эластичными без признаков локализованной скованности или накопления жидкости. Напротив, двусторонние рога в группе двойной травмы демонстрируют легкую ригидность, неравномерную толщину стенки матки, очаговую ригидность и стеноз рубца.

Через 14 дней после операции двусторонние рога матки сохранили морфологию, сопоставимую с дооперационным исходным уровнем в группе симуляции операции, с неповрежденной симметрией и текстурой. Однако в группе двойной травмы оба рога демонстрируют контрактуру, бледную окраску, снижение эластичности и неравномерную толщину стенок. Локализованная жесткость и сужение просвета усугубились.

Гистологическое изменение через семь дней после операции. В группе фиктивной операции при ПЭ и трихромном окрашивании по Массону эпителий эндометрия, железистая архитектура и морфология просвета матки очень напоминали нормальные структуры матки. Поверхность эндометрия имеет волнообразный контур, а железы имеют круглую или эллиптическую форму.

Строма не демонстрирует никаких признаков отека, застойных явлений или кровоизлияния, а коллагеновые волокна остаются разрозненными и слабо организованными. В группе двойного повреждения при окрашивании ПЭ полость матки демонстрирует сужение, частичную окклюзию или заполнение некротическими остатками и лейкоцитами. Однослойный столбчатый эпителий тонкий или отсутствует, заменяется плоскими или рядно-столбчатыми эпителиальными клетками.

Эндометриальные железы уменьшены в количестве или отсутствуют. При трихромном окрашивании по Массону количество эндометриальных желез уменьшается с относительным уменьшением эпителиальной площади. И наоборот, окрашенный в синий цвет фиброз в строме увеличивается в количестве, демонстрирует неорганизованное расположение и кажется более темным по интенсивности окрашивания.

Гистологическое изменение через 14 дней после операции. В группе симуляции операции с ГЭ и трихромным окрашиванием по Массону эндометрий крыс не показал существенных изменений, морфология которых соответствовала той, которая наблюдалась через семь дней после операции. В группе двойной травмы, при окрашивании ПЭ, регенерация желез и эпителия практически отсутствует.

Вместо этого происходит обширное отложение коллагена и развивается интерстициальный фиброз, что приводит к внутриматочной спайке и почти полной или полной окклюзии полости. При трихромном окрашивании по Массону нормальный столбчатый эпителий и железы замещаются фиброзной тканью, и развиваются внутриматочные спайки, которые проявляются большим количеством атрофических желез и окружены массой коллагеновых волокон. Интерстициальная фиброзная ткань значительно увеличивается, при этом коллаген кажется более плотным и темным по сравнению с семидневным послеоперационным этапом.

Через 14 дней после операции соотношение площадей фиброза эндометрия в группе с двойной травмой значительно выше, чем в группе симуляции операции. Наши результаты показывают, что подход с двойной травмой создает стабильную, воспроизводимую модель ВМА у крыс с процедурной осуществимостью и постоянными патологическими особенностями. Эта модель обеспечивает практический подход к исследованию патогенеза ВМИ и тестированию терапевтических стратегий.