SCIENCE EDUCATION > Chemistry

Fundamentos de la bioquímica

Esta colección presenta métodos de purificación comúnmente usados, como la cromatografía de afinidad, así como métodos analíticos, como MALDI-TOF. Además, los videos muestran métodos para evaluar la interacción y la función de la biomolécula, como la coprecipitación y la etiqueta metabólica.

  • Biochemistry

    05:25
    Diálisis: Difusión basado en la separación

    Diálisis es una técnica común utilizada en bioquímica para separar moléculas basadas en difusión. En este procedimiento, una membrana semipermeable permite el movimiento de ciertas moléculas basado en el tamaño. Este método puede ser aplicado a la remoción de búfer, conocida como la desalación, o intercambiando buffer moléculas o iones de una solución proteica.

    Este video cubre los principios de la diálisis junto con un procedimientoan varias aplicaciones de la diálisis, incluyendo la eliminación de reactivos degradados después de ultracentrifugación, quitando detergente después de una proteína de membrana extracción y la reconstitución de proteínas cambiando el ambiente de solución. muestras bioquímicas suelen tienen concentraciones de tampón alta que pueden interrumpir el procesamiento descendente y análisis. La diálisis es una técnica común y económica utilizada para separar moléculas basadas en difusión. El método utiliza una membrana semipermeable que permite el movimiento de ciertos componentes, basado en el tamaño. Este video le mostrará los conceptos de diálisis, un procedimiento general y algunas de sus aplicaciones en bioquímica. el aspecto más importante de la diálisis es una membrana semipermeable que tiene poros que imponen un peso molecular de corte, permitiendo que las moléculas por debajo de un cierto tamaño para pasar a través. Por ejemplo, una membrana k 10 generalmente conserva

  • Biochemistry

    08:06
    Pruebas enzimáticas y cinética

    Cinética de la enzima describe los efectos catalíticos de las enzimas, que son biomoléculas que facilitan las reacciones químicas necesarias para los organismos vivos. Las enzimas actúan sobre moléculas, contempladas como sustratos a los productos de la forma. Parámetros cinéticos de la enzima se determinan mediante ensayos que directa o indirectamente medir los cambios en la concentración de substrato o producto con el tiempo.

    Estebre los principios básicos de la cinética de la enzima (incluyendo las ecuaciones de velocidad) y modelos cinéticos. También se discuten los conceptos que rigen los ensayos enzimáticos, seguido por un típico análisis colorimétrico. Aplicaciones discute un análisis enzimático mediante el análisis de la transferencia (traste) de Förster Resonancia energética, caracterización de la actividad enzimática extracelular en el medio ambiente, y sondas de investigación ADN reparación cinética utilizando molecular. Las enzimas son catalizadores bioquímicos que son esenciales para la vida. Análisis de enzima se utilizan para estudiar las propiedades cinéticas de reacciones enzimáticas, elucidar los efectos catalíticos de las enzimas. Este video cubre cinética de la enzima y ensayos, pasar de un procedimiento general y mostrar algunas aplicaciones. Las enzimas son proteínas o moléculas similares a proteínas que actúan sobre una molécula de reactivo, conocida como el substrato. Las

  • Biochemistry

    07:26
    Espectrometría de masas MALDI-TOF

    Ionización de la desorción del laser asistida por matriz (MALDI) es una fuente de iones espectrometría de masas ideal para el análisis de biomoléculas. En lugar de radiaciones ionizantes compuestos en estado gaseoso, las muestras son embebidas en una matriz, que es golpeada por un láser. La matriz absorbe la mayoría de la energía; entonces algo de esta energía se transfiere a la muestra, que se ioniza como resultado. Los iones de la muestradentificarse entonces con un analizador de tiempo de vuelo (TOF). Este video cubre principios de MALDI-TOF, incluyendo selección de matriz y cómo TOF se utiliza para aclarar relaciones masa / carga. Este procedimiento muestra la preparación de una placa MALDI, la carga de muestras en la placa y la operación del espectrómetro de masas TOF. En la sección final, aplicaciones y variaciones se muestran, incluyendo análisis de celulares, caracterización de muestras biológicas complejas e ionización del electrón spray. Ionización de desorción láser asistida por matriz MALDI, es una fuente de iones espectrometría de masas ideal para el análisis de biomoléculas. Más fuentes de iones quitar información estructural de biomoléculas grandes, frágiles. MALDI mantiene la integridad estructural y por lo tanto información, aceleración de las moléculas en el analizador de masas, que separa los compuestos basados en el tamaño y la carga. El más comúnmente junto con MALDI es el tiempo de vu

  • Biochemistry

    07:08
    Spectrometry total en tándem

    En spectrometry total en tándem biomoléculas de interés es aislada de una muestra biológica y luego se fragmentó en múltiples subunidades con el fin de ayudar a elucidar su composición y secuencia. Esto se logra con espectrómetros de masas en serie. El primer espectrómetro ioniza una muestra y el filtro de iones de una masa específica para cargar cociente. Filtrado iones entonces son fragmentados y pasa a un segundo espectrómetro de masasnalizan los fragmentos. Este video presenta los principios de la espectrometría total en tándem, incluyendo métodos de selección y disociación de ratio de masa. También se muestra es un procedimiento general para el análisis de un compuesto bioquímico usando spectrometry total en tándem con la disociación colisión-inducida. La sección de aplicaciones cubre reacción selección supervisión, determinación de las modificaciones post traducción en proteína y la detección de los niveles de tacrolimus en sangre. Enlaces de espectrometría de masas tándem juntos múltiples etapas de espectrometría de masas primero aislar una biomolécula y luego determinan los aspectos de su composición química. Biomoléculas tienen estructuras grandes y complejas, lo que hace difícil determinar su composición molecular. Espectrometría de masas tándem selecciona una molécula de interés que más tarde se fragmentó en múltiples subunidades, que pueden ayudar a elucidar su identificación y secuencia. Est

  • Biochemistry

    07:38
    Cristalización de proteínas

    Cristalización de proteínas, obteniendo un sólido entramado de biomoléculas, aclara la estructura de la proteína y permite el estudio de la función de la proteína. Cristalización consiste en secado purificado de la proteína en una combinación de muchos factores, incluyendo el pH, temperatura, fuerza iónica y concentración de la proteína. Una vez que se obtienen cristales, la estructura de la proteína puede ser aclarada por difracción de rayos de un modelo de densidad de electrones. Este video presenta la cristalización de proteínas y muestra un procedimiento general. Expresión de la proteína y purificación, cristalización y difracción de rayos x están cubiertos en el procedimiento. Aplicaciones de la cristalización de proteínas incluyen en silico drogas de diseño, determinación del sitio de enlace y análisis de estructura de proteínas de membrana. Cristalización de proteínas es el proceso de obtener una forma sólida celosía de una proteína. Estos cristales son especialmente valiosos para los biólogos estructurales, ayudar en el estudio de la función de la proteína. Otras técnicas, como la masa spec o SDS-PAGE, sólo pueden proporcionar información sobre la estructura unidimensional de las proteínas. Cristalización de proteínas se complementa con las técnicas de expresión de la proteína recombinante y difracción de rayos x. Este video le mostrará los principios de la cristalización de proteínas, un pro

  • Biochemistry

    07:50
    Métodos de purificación de biomoléculas basados en la cromatografía de

    En Bioquímica, se emplean métodos basados en cromatografía de purificación para aislar compuestos de una mezcla compleja. Dos tales métodos utilizados comúnmente por los bioquímicos son cromatografía por exclusión de tamaño y cromatografía de afinidad. En cromatografía por exclusión de tamaño, una columna de granos porosos separa los componentes de una mezcla basada en tamaño. Por otro lado, cromatografía de afinidad permite una separacióne biomoléculas utilizando una columna compuesta de fase estacionaria, que contiene ligandos específicos del destino. Este video sirve como una introducción a la exclusión de tamaño y cromatografía de afinidad, así como los conceptos que los rigen. Se describe un procedimiento paso a paso para la purificación de una proteína histidina etiquetados mediante cromatografía de afinidad metálica inmovilizados. Aplicaciones para ambos de estos métodos cromatográficos en Bioquímica e investigación biomédica también están perfilados. "Cromatografía" se refiere a una amplia gama de métodos utilizados para aislar un componente de una mezcla compleja, un paso esencial antes de que pueden determinarse una biomolécula características y actividades. Cada técnica cromatográfica tiene un mecanismo diferente para la separación, dependiendo de la matriz de la muestra y el objetivo compuesto. Este video se centrará en los principios y funcionamiento de los dos métodos comunes para bioquímica

  • Biochemistry

    07:30
    Electroforesis en Gel bidimensional

    Electroforesis en gel bidimensional (2DGE) es una técnica que puede resolver miles de biomoléculas de la mezcla. Esta técnica consiste en dos métodos de separación diferentes que han sido acoplados entre sí: la concentración isoeléctrica (IEF) y sodio dodecil sulfato poliacrilamida gel electroforesis (SDS-PAGE). Esto físicamente separa compuestos a través de dos ejes de un gel por sus puntos isoeléctricos (una propiedad electroquímica) y susulares. El procedimiento en este video cubre los principales conceptos de 2DGE y un procedimiento general para la caracterización de la composición de una solución de proteína compleja. En la sección de aplicaciones, incluyendo la detección de biomarcadores para la iniciación de la enfermedad y tratamiento de pacientes y el estudio de las proteínas después de modificación postraduccional (PTM) de seguimiento del progreso, se muestran tres ejemplos de esta técnica. Bidimensional, o 2D, electroforesis en gel es una técnica que utiliza dos métodos de separación diferentes que pueden separar miles de proteínas de una mezcla única. Una de las técnicas, SDS-PAGE o sodio dodecil sulfato poliacrilamida gel electroforesis, puede separar completamente solo de mezclas complejas. Electroforesis 2D parejas SDS-PAGE a un segundo método, isoeléctrico centrado o IEF, que partiendo de puntos isoeléctricos se separa, lo que permite la resolución de potencialmente todas las proteínas en un

  • Biochemistry

    08:27
    Etiquetado metabólico

    Etiquetado metabólico se utiliza para probar las transformaciones bioquímicas y modificaciones que ocurren en una célula. Esto se logra mediante el uso de análogos químicos que imitan la estructura de biomoléculas naturales. Las células utilizan análogos en sus procesos bioquímicos endógenos, produciendo compuestos que están etiquetados. La etiqueta permite la incorporación de la detección y etiquetas de afinidad que pueden utilizarse paravías metabólicas mediante otras técnicas de análisis bioquímicos, como SDS-PAGE y RMN. Este video presenta los conceptos de etiquetado y mostrar dos generales procedimientos metabólicos.  La primera utiliza etiquetado isotópico, para caracterizar la fosforilación de una proteína. La segunda cubre un etiquetado fotoreactivas para caracterizar la interacción proteína-proteína dentro de un también tres aplicaciones de etiquetado metabólico presentan: etiquetado de material vegetal, etiquetado RNA para medir la cinética y glicanos en el desarrollo de embriones. Etiquetado metabólico se utiliza para investigar la maquinaria de una célula. Esto se logra utilizando químicos análogos para las transformaciones bioquímicas y modificaciones que se producen. Este video le mostrará los principios de etiquetado metabólico, típico isotópica y fotoreactivas etiquetado procedimientos y aplicaciones. Etiquetado metabólico puede realizarse mediante una serie de estrategias. Aq

  • Biochemistry

    06:56
    Ensayo de cambio de movilidad electroforética (EMSA)

    El análisis de cambio de movilidad electroforética (EMSA) es un procedimiento bioquímico utilizado para aclarar la unión entre proteínas y ácidos nucleicos. En este ensayo se mezclan un ácido nucleico radiomarcado y prueba de la proteína. Enlace se determina mediante electroforesis en gel que separa componentes basados en la masa, carga y conformación.

    Este video muestra los conceptos de EMSA y un procedimiento general, incluyendon, encuadernación, electroforesis y preparación del gel y de la proteína. En este video las aplicaciones incluyen el análisis de enzimas de remodelación de la cromatina, una EMSA modificado que incorpora biontinylation y el estudio de los sitios de los reguladores de la respuesta bacteriana de Unión. EMSA, el análisis de cambio de movilidad electroforética, también conocido como el análisis de cambio de gel, es un procedimiento bioquímico versátil y sensible. EMSA aclara unión entre proteínas y ácidos nucleicos mediante la detección de un cambio de bandas en electroforesis en gel. Este video describe los principios de la EMSA, proporciona un procedimiento general y habla de algunas aplicaciones. Replicación del ADN, transcripción y reparación, así como procesamiento de RNA es procesos bioquímicos todos críticos. Todos implican la unión entre proteínas y ácidos nucleicos. Muchos trastornos y enfermedades graves se asocian a modificaciones en este enlace. EMSA es

  • Biochemistry

    08:48
    Determinación fotométrica de la proteína

    Medición de la concentración es un paso fundamental de muchos ensayos bioquímicos. Determinación fotométrica de la proteína aprovecha el hecho de cuanto más una muestra contiene sustancias absorben la luz, menos la luz se transmite a través de él. Puesto que la relación entre concentración y absorción es linear, este fenómeno puede utilizarse para medir la concentración en las muestras donde no se sabe.

    Este video describe lose la determinación fotométrica de proteínas y presenta el ensayo de Bradford y el método de Lowry. En el vídeo se incluyen un típico ensayo de Bradford. Usos cubiertos incluyen la medición directa de volúmenes muy pequeños de ácidos nucleicos para caracterizar la concentración y pureza, determinación de la eficiencia de un material biomimético y otra variación de determinación fotométrica de la proteína usando colorante Remazol de acoplamiento. Determinar la concentración de una proteína en las muestras es un paso fundamental en muchos ensayos bioquímicos. Determinación fotométrica puede hacerse con muestras pequeñas. Más una muestra contiene sustancias absorben la luz, menos la luz se transmite a través de él. Esto proporciona una medida cuantitativa de las sustancias absorbentes. Estos conceptos son tan fundamentales a la ciencia que son los artículos que introducen dos de las técnicas en los tres trabajos más citados de todos los tiempos. Este video le mostrará los concepto

  • Biochemistry

    08:41
    Ultracentrifugación de gradiente de densidad

    Ultracentrifugación de gradiente de densidad es una técnica común utilizada para aislar y purificar las estructuras de biomoléculas y células. Esta técnica aprovecha el hecho de que, en suspensión, partículas que son más densas que el disolvente serán sedimento, mientras que aquellos que son menos densas flotarán. Una ultracentrífuga de alta velocidad se utiliza para acelerar este proceso con el fin de separar biomoléculas dentro de un densidad, que puede ser establecido por líquidos y disminución de la densidad en un tubo de centrífuga. El video cubre los principios de la ultracentrifugación de gradiente de densidad, incluyendo un procedimiento que demuestra la preparación de la muestra, creación de un gradiente de sacarosa, ultracentrifugación y colección de analitos fraccionados. La sección de aplicaciones analiza el aislamiento de complejos, aislamiento de complejos de ácidos nucleicos y la separación mediante gradientes de densidad de cloruro de cesio. Ultracentrifugación de gradiente de densidad es un método común para aislar y purificar las estructuras de la célula para los experimentos bioquímicos. La técnica utiliza una centrifugadora de alta velocidad, o ultra, para separar de manera no destructiva componentes celulares en un gradiente de densidad. Este video describe los principios de la ultracentrifugación de gradiente de densidad, proporciona un procedimiento general mediante un gradiente

  • Biochemistry

    08:07
    Co-inmunoprecipitación y el análisis Pull-Down

    Co-inmunoprecipitación (CoIP) y ensayos de pull-down son métodos de cerca relacionados para identificar las interacciones proteína-proteína estable. Estos métodos están relacionados con inmunoprecipitación, un método para la separación de una proteína diana ligada a un anticuerpo de proteínas independientes. En CoIP, una proteína anticuerpo está obligado a otra proteína que no se une con el anticuerpo, esto es seguido por un proceso dee conserva las proteínas complejas. La diferencia en los ensayos de pull-down es que cebo etiqueta de afinidad proteínas sustituir los anticuerpos, y cromatografía de afinidad se utiliza para aislar los complejos de proteínas. Este video explica CoIP, ensayos de pull-down y su aplicación en el laboratorio. Un protocolo paso a paso de cada técnica está cubierto, incluyendo reactivos, aparatos e instrumentos utilizados para purificar y analizar proteínas encuadernadas. Además, la sección de aplicaciones de este video describe un procedimiento para estudiar cómo las proteínas myxovirus inhiben la nucleoproteína de la gripe, una investigación sobre el papel de los iones del calcio en calmodulina por medio de un análisis descendente y un ensayo modificado de desplegable para caracterizar las interacciones transitorias de proteínas. Las interacciones proteína-proteína juegan un papel importante en una amplia variedad de funciones biológicas. La mayoría de las interacciones pro

  • Biochemistry

    07:04
    Reconstitución de proteínas de membrana

    Reconstitución es el proceso de volver una biomolécula aislado a su forma o su función original. Esto es particularmente útil para el estudio de proteínas de la membrana, que permiten funciones celulares importantes y afectan el comportamiento de los lípidos cercano. Para estudiar la función purificada de proteínas de membrana in situ, debe ser reconstituidos por integrarlos en una membrana lipídica artificial.

    Este video presenta la proteína reconstitución conceptos y procedimientos relacionados, tales como aislamiento de proteínas con detergente, formación de vesículas artificiales con lípidos, incorporación de la proteína aislada en la vesícula artificial y separación del detergente de la solución. Por último, se cubren dos aplicaciones: reconstitución de proteínas de transporte de membrana y la reconstitución de proteínas recolección de luz. Reconstitución es el proceso de restauración de una biomolécula aislado a su forma original o su funcionalidad. A menudo se utiliza este enfoque al estudio de proteínas de la membrana, que permiten muchos procesos celulares importantes y afectan el comportamiento de los vecinos de lípidos. Sin embargo, la complejidad del entorno celular dificulta la membrana funciones de la proteína a estudiar en situ. Las proteínas pueden extraerse y purificarse, pero sus funciones reales no pueden ser evaluados sin una membrana. Por lo tanto, las proteínas de membrana ai

  • Biochemistry

    06:38
    Transferencia de energía de Förster Resonancia (FRET)

    Transferencia de la energía de Förster Resonancia (FRET) es un fenómeno para investigar interacciones bioquímicas de la cerrar-gama. En el traste, una molécula fotoluminiscente de donantes no radiativamente puede transferir energía a una molécula aceptora si se superponen sus respectivos espectros de emisión y absorción. La cantidad de energía transferida — y, en consecuencia, la emisión total de la muestra — depende de la de un par de donantes aceptador de moléculas fotoluminiscentes. Análisis de traste se combinación con otras técnicas de bioquímica para obtener información detallada de las estructuras biomoleculares y las interacciones de esta “ regla espectroscópica. ” este video cubre los principios y conceptos de análisis de traste. El procedimiento se centra en la preparación de muestras para el traste y formas presentar e interpretar datos. Por último, las aplicaciones incluyen el seguimiento a los procesos celulares y conformacionales por etiquetar las partes de una célula o proteína, control de reacciones enzimáticas que alteran estructuras de la proteína, y utilizando FRET para controlar la agregación de los monómeros expresados por las células de. Förster transferencia de energía de resonancia o traste, es una transferencia no radiativo de energía entre las moléculas que emiten luz y a menudo se utiliza para investigar las interacciones bioquímicas de la cerrar-gam

  • Biochemistry

    06:57
    Resonancia de plasmón superficial (SPR)

    Resonancia de plasmón superficial (SPR) es el fenómeno óptico subyacente detrás de etiqueta-libre biosensores para evaluar la afinidad molecular, cinética, especificidad y concentración de biomoléculas. En SPR, las interacciones biomoleculares se producen en un biosensor de una fina capa de metal sobre un prisma. Interacciones en tiempo real de biomoléculas pueden controlarse mediante la medición de los cambios de la luz reflejada de la parte de la metal Este video describe los conceptos básicos de SPR y cómo se utiliza para analizar y visualizar las interacciones biomoleculares. Esto es seguido por una preparación de muestras y el protocolo experimental para la investigación de tipos de enlace utilizando SPR. En la sección de aplicaciones, imágenes de SPR, SPR localizada y punto cuántico se exploran mejor SPR. superficie resonancia de plasmones o SPR, es el fenómeno subyacente detrás de ciertos biosensores etiqueta-libre para evaluar las interacciones vinculantes y adsorción de las biomoléculas. Ensayos de Unión que requieren etiquetado, como ELISA, pueden ser un proceso desperdiciador de tiempo y pueden alterar la funcionalidad del analito. En SPR, las interacciones biomoleculares ocurren en un sensor especial hecho de una fina capa de metal en una cara de un prisma. Monitoreo de los cambios en la luz reflejada apagado de la parte inferior del metal, instrumentos SPR visualizar estas interacciones en tiempo

JoVE IN THE CLASSROOM

PROVIDE STUDENTS WITH THE TOOLS TO HELP THEM LEARN.

JoVE IN THE CLASSROOM