啮齿动物鉴定 (2)

Lab Animal Research

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Overview

来源: 凯斯图尔特, RVT, RLATG, CMAR;瓦莱丽. 施罗德, RVT, RLATG。圣母大学, 在

动物记录必须得到准确的维护, 以确保数据收集是正确的。记录的范围从保持笼卡的信息, 以拥有一个详细的数据库与所有有关的信息, 每个动物。记录记录的主要组成部分是研究动物的个体识别。有多种方法可用于鉴别小鼠和大鼠。本视频描述了纹身、微芯片放置和临时识别方法的程序技术, 并探讨了每个步骤的优点.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. 实验动物研究精要. 啮齿动物鉴定 (2). JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

使用尾部纹身在许多研究协议中都是有益的。尾巴纹身是理想的动物, 是在核磁共振成像机, 或一个是基因倾向于溃疡性皮炎。为了快速识别笼子里的动物, 不需要加以抑制, 尾巴纹身很容易被形象化。然而, 这项技术需要技能, 实践, 和稳定的手;还需要专门的设备。 1

实验性协议可能需要早在第一天就对新生儿进行基因分型。因此, 必须永久性地识别这些幼崽。在这个年轻的年龄, 耳朵片没有足够的发展, 以插入一个耳朵标签, 和耳朵冲床还不能用于他们。在过去, 研究人员使用脚趾去除代码来识别新生儿是很常见的。然而, 这对幼小的动物和水坝都是压力重重, 因此被认为是不人道的。 2 使用脚趾纹身可以使动物永久地被识别, 直到它们足够大以进行耳朵标记或耳朵冲孔。 3

虽然植入微芯片的过程相对容易, 但有几个因素限制了它对小鼠的识别作用。不育的微晶片是大粒大米的大小, 需要10到12口径的针头来运送。因此, 它们是非常大的鼠标。由于小鼠的寿命短, 并且动物的数量通常是广泛的, 所以芯片和阅读装置的成本也会很高。那些注定要在核磁共振成像机中成像的动物不能植入他们的体内。然而, 如果有一组有价值的动物必须被永久识别, 那么可以使用微芯片。 4

需要将动物识别为数小时或几天的急性研究, 不必使用永久性识别。无毒标记是专门为着色动物皮毛, 并有几种颜色。这些标记染料可以在几个星期内保持可见。这些标记还可以与其他方法一起使用, 以方便地发现群中的特定动物。

Procedure

1. 尾部纹身

尾部纹身很容易阅读, 不需要处理动物.

Figure 1
图1。成年老鼠的尾巴纹身

  1. 根据制造商和 #39 的说明准备纹身设备。少量墨水是必需的。黑染料应用于白化小鼠或大鼠, 绿色染料的色素小鼠或大鼠.
  2. 为识别准备动物.
    注意: 为了尽量减少忧虑或苦恼, 应在手术室而不是在动物居住区进行尾部纹身。
    1. 适当地限制动物进行纹身, 以使运动最小.
    2. 断奶大鼠使用塑料缺口杯进行克制, 在纹身平台上的螺栓下固定杯子的唇, 并通过缺口延伸到尾部.
    3. 成年小鼠可以通过一杯抑制剂来克制, 尾巴从开口处拉紧, 杯子的法兰通过平台或其他装置举行.
    4. 用棉签擦拭后用少量的稀释组织清洁剂清洁尾部。成年大鼠通常有规模和尾部的碎片堆积, 必须在应用纹身之前清洗。肥皂和水擦洗的尾巴将清除大部分的污垢和碎片。在继续之前先把尾巴干好.
    5. 在纹身前用棉签将组织油涂抹在皮肤上。组织油是必要的, 以减少组织损害, 软化皮肤和润滑纹身针。此外, 油溶解任何污垢没有清除的清洗过程和防止油墨染色的 nontattooed 皮肤.
  3. 应用纹身。
    1. 将针的尖端浸入颜料中, 并关闭机器.
    2. 用脚踏板激活的枪将针头的尖端带到纹身站点.
    3. 在一个方向上使短, 甚至笔画。数字和字母应该用这样的方式纹身, 以便它们以最小的角度和曲线 (可能时) 的片段构造.
    4. 深穿透到真皮中, 用针进行永久性色素沉积。激活针的声音的变化可以帮助辨别深度.
    5. 用针接近皮肤 90 o 角度来充分沉积颜料.
  4. 后纹身清除和护理
    1. 印迹 (不擦) 已完成的纹身过量颜料与纸巾.
    2. 纹身或纸巾上的血迹表明纹身的深度太深, 因此不太可能是永久性的.
    3. 用附加色素增强纹身字符的薄区域。字符是加强与色素沉积平行, 但不是在上面, 已经沉积颜料.
    4. 添加额外的色素, 将针尖浸入染料库中, 每两个字符为小鼠和每一个字符的老鼠.
    5. 褪色纹身的原因包括色素含量不足, 纹身太浅, 纹身太深, 针头不合适的角度, 使用钝或钩针, 或纹身太快.
    6. 根据制造商和 #39 的说明在每次使用后彻底清洗纹身设备

2。新生儿脚趾纹身

实验性协议可以要求新生儿的基因分型早于第一天, 这就使得这些幼崽必须被永久性地识别。使用脚趾纹身允许动物识别, 直到它们足够大的耳朵标签或耳朵冲压.

Figure 2
图2。对新生鼠进行文身的适当抑制技术。柳叶刀的尖端有绿色的染料.

  1. 约束 preweaned 的 pup。
    1. 将手上的新生儿放在纱布垫上。将脚放在食指的拇指和钩之间, 露出所选择的脚趾或脚趾, 以进行纹身.
    2. 保持脚靠近脚趾, 使脚趾在它后面有一个坚实的表面, 防止它弯曲掉.
    3. 定位脚时不要 overtwist 腿。受约束的幼崽可能会摆动, 但没有必要听到发声.
  2. 准备设备。
    1. 选择 4.5 mm 黄花动物柳叶刀.
    2. 在孔表面放置一小点绿色纹身膏; 铝箔效果良好.
    3. 在纹身膏中只蘸柳叶刀的尖端.
    4. 只使用少量的粘贴.
  3. 应用纹身。
    1. 根据标识代码, 用黄花柳叶刀戳所需的脚趾.
    2. 穿刺皮肤, 将糊状物引入皮肤, 留下印记.
    3. 戳相同的斑点三次, 以确保适当的渗透.
    4. 避免戳得太深, 脚趾流血; 这会导致一个微弱的纹身.
  4. 后纹身清理和护理
    1. 用吸水擦拭/毛巾轻轻涂抹斑点以去除多余的糊状物.
    2. 不要尝试清除脚或身体上的多余粘贴.
    3. 将动物返回笼子.
    4. 当护理幼崽被纹身时, 最好也刺青大坝。这可能会阻止她对幼崽的反应过度, 这可能导致过度梳理纹身.
    5. 对每个垃圾使用新的柳叶刀.
    6. 纹身应在手术后的次日进行验证。如果斑点是微弱或不可见的, 重做纹身。如果在纹身后的那一天, 这些点是可见的, 那么它们在动物的生命周期中仍然是可见的.

3。成年大鼠和小鼠的脚趾纹身

当一窝新生儿被纹身时, 建议母亲也要纹身, 这样她的幼崽身上的糊状物就不是她的外型了.

  1. 对该动物的限制。
    1. 通过使用塑料锥或有机玻璃抑制剂来约束动物, 使其能够进入后脚.
    2. 将脚从约束装置中伸出.
    3. 在食指的拇指和钩之间放置脚, 以露出所选的脚趾或脚趾, 以进行纹身
    4. 保持脚靠近脚趾, 使脚趾在它后面有一个坚实的表面, 防止脚趾弯曲掉.
    5. 定位脚时不要 overtwist 腿。受限制的成年人可能会试图撤回脚.
  2. 准备设备。
    1. 选择 5 mm 黄花动物柳叶刀.
    2. 在孔表面放置一小点绿色纹身膏; 铝箔效果良好.
    3. 在纹身膏中只蘸柳叶刀的尖端.
    4. 只使用少量的粘贴.
  3. 应用纹身。
    1. 根据标识代码, 用黄花柳叶刀戳所需的脚趾.
    2. 穿刺皮肤, 将糊状物引入皮肤, 留下印记.
    3. 戳相同的斑点三次, 以确保适当的渗透.
    4. 避免戳得太深, 脚趾流血; 这会导致一个微弱的纹身.
  4. 后纹身清理和护理
    1. 轻轻地在吸水性擦拭/毛巾上涂抹斑点, 以去除多余的浆糊.
    2. 不要尝试清除脚或身体上的多余粘贴.
    3. 将动物返回笼子.
    4. 对每种动物使用新的柳叶刀.
    5. 纹身应在手术后的次日进行验证。如果斑点是微弱或不可见的, 重做纹身。如果在纹身后的那一天, 这些点是可见的, 那么它们在动物的生命周期中仍然是可见的.

4. 晶片

RFID 芯片的植入是一种用于识别动物的常用方法.

  1. 将微芯片装入变更, 或选择预加载的注射器.
  2. 用有机玻璃约束管抑制动物, 使其能够在肩部上抓取皮肤.
  3. 帐篷的皮肤, 创造一个口袋.
  4. 将针放在皮肤上, 向上倾斜并平行于脊柱, 并将其指向尾部.
  5. 弹出微芯片.
  6. 取出针头并在注射点处捏紧皮肤。这样可以防止微芯片从皮肤中取出针。继续施加压力, 为任何皮肤出血提供止血.
  7. 从约束装置中取出动物并扫描芯片以确认识别码.

Figure 3
图3。成年大鼠的微芯片植入.

5. 小鼠的临时鉴定

无毒染料和动物标记物可用于小鼠的临时鉴定.

  1. 限制鼠标, 使肩胛骨之间的区域可用于毛皮上的标记.
  2. 在该区域的毛皮上放置一个标记、斑点或条纹的染料。该区域用于防止动物在梳理时去除标记.
  3. 如果将标记作为唯一标识符使用了几天, 请定期检查它.
  4. 尾部也可以用于短工期。然而, 动物可能会去除它的标记, 而梳理.

6。老鼠的临时识别

  1. 抑制鼠, 使染料或标记应用的区域易于访问。在某些情况下, 当只需要一个条纹或点, 动物将不需要被限制, 但允许自由移动在笼子里.
  2. 手动约束通过抓住尾巴和保持它绷紧, 而应用识别通常是这样做的.
  3. 临时固定使用吸入麻醉剂可以为脾气暴躁的动物做.
  4. 如果使用此方法作为唯一标识符超过几天, 则定期检查标记.

识别单个研究动物的能力是科学记录保存和数据收集的一个重要方面。区分动物之间确保正确的主题用于预期的实验过程.

科学家们使用了几种永久性的和临时性的方法来鉴定单个的实验动物。在这个视频中, 我们和 #39; 我将讨论涉及纹身成人啮齿动物的尾巴, 新生儿脚趾和成人脚趾的方法。下一步, 我们和 #39; 我将触及在成年大鼠中常见的微芯片放置技术, 然后是使用无毒染料的通用临时识别方法.

在钻研这些方法的协议之前, 请 #39; 请检查这些技术的注意事项、优点和缺点。尾部纹身在许多研究方案中都是有益的, 例如涉及 MRI 成像的实验, 或者是动物在基因上倾向于包括溃疡性皮炎在内的皮肤疾病。尾巴纹身的另一个优点是, 它们很容易被形象化, 而不必手动限制动物.

某些实验性的协议要求新生儿的基因分型早于第一天, 这就使得这些幼崽必须被永久识别。使用脚趾纹身允许这些动物被识别, 直到它们足够大的耳朵标签或耳朵冲压。这是一个好主意, 应用类似的脚趾纹身的成年母亲, 以防止她的反应和过度梳理她的幼崽和 #39; 新的纹身。虽然使用这种方法有几个优点, 但缺点是程序需要技能、实践、稳定的手和专用设备.

正在考虑的下一个永久性标识方法是晶片。虽然植入微芯片是一个相对容易的过程, 但有几个因素限制了它的实用性。首先, 这些芯片的大小大约是一大粒大米, 需要10-12 针的植入, 这是太大的鼠标, 从而限制了成年大鼠的方法。其次, 微芯片是昂贵的, 因此不太适合识别大量的动物。最后, 在涉及 MRI 的实验中不能使用微晶片。然而, 如果有一组有价值的动物, 如具有独特遗传学的增殖动物, 必须永久识别, 可以使用微芯片.

我们 #39 的最后一个方法是使用无毒标记进行临时识别。这种无毒的标记物是为研究动物的皮毛着色而制作的。这种方法是理想的短期研究, 要求动物只识别几个小时或几天, 虽然染料可以保持可见几个星期。一些研究人员将这些标记与其他识别方法结合使用, 以方便地发现群中的特定动物.

现在我们已经讨论了背景, 让和 #39; 我们学习的程序, 从尾部纹身开始。在这里, 我们将演示成年小鼠的程序, 但同样可以适用于断奶和成年大鼠.

为了减少对动物的任何忧虑或苦恼, 应在程序室而不是在动物居住区进行尾部纹身。在应用纹身之前, 用一杯抑制剂来抑制鼠标, 尾巴从开口拉紧。杯子的法兰通过一个专门的玻璃平台举行。接下来, 在棉签上用少量的稀释组织清洁剂清洁尾部。这一步是重要的, 以消除任何规模和碎片堆积可能会干扰纹身。接下来, 用另一种棉签将组织油涂抹到尾部皮肤上。通过软化皮肤和为纹身针提供润滑, 减少组织损伤。此外, 油溶解污垢不清除的清洁过程和防止油墨染色的 non-tattooed 皮肤。现在你和 #39, 准备好应用纹身了.

当机器关闭时, 将纹身针的尖端浸入颜料中, 即是柳叶刀或皮下注射针。接下来, 用脚踏板激活枪, 将纹身工具放在尾部, 并将针尖带到纹身部位。接近皮肤与针在90和 #176; 角度和深入到真皮, 使色素是永久沉积。激活针的声音的变化可以帮助辨别深度。在一个方向上做短甚至笔画, 形成数字和字母。尝试你应用纹身时的最小曲线和角度.

添加额外的色素, 将针的尖端浸入染料库中, 每1/2 个字符为小鼠和每一个字符。用纸巾涂抹已完成的纹身, 去除多余的色素。纹身或纸巾上的血迹表明纹身的深度太深, 因此不太可能是永久性的。通过将针平行于已沉积颜料的顶部, 而不是放在上面, 以增加色素。在每次使用后彻底清洗纹身设备, 并用新的或无菌的针头和新鲜的墨水供应, 以防止疾病传播.

下一步, 我们将学习如何对新生儿和成人应用脚趾纹身。在这里, 我们将演示在小鼠的程序, 但同样的步骤适用于大鼠.

新生儿在脚趾上纹身, 因为 tailbones 不是僵化的, 尾巴的长度太小。此外, 随着尾巴的增长, 皮肤将被拉长, 数字可能会变得扭曲, 微弱, 和不可读。首先放置一个绿色的纹身贴在一个无孔表面, 如铝箔的斑点。接下来, 用纱布垫在你的手里 pre-weaned 的小狗。把脚放在拇指和食指的钩上, 露出被选中的脚趾纹身。保持脚靠近脚趾, 使所选择的脚趾有一个坚实的表面背后, 以防止它弯曲离开.

现在, 蘸4.5 毫米柳叶刀的尖端进入纹身膏。然后, 按预先设定的代码戳出所需的脚趾。为了确保适当的渗透, 戳相同的斑点三次。穿透皮肤足以使糊状物留下印记, 但避免戳得如此深, 脚趾流血。用纱布轻轻地涂抹新的纹身, 去掉多余的纹身膏, 并将动物带回笼子。用新的柳叶刀做下一窝。一天后的过程, 验证纹身是可见的.

当护理幼崽被纹身时, 最好也刺青大坝。这可能会阻止她过度反应, 过度梳理她的幼崽和 #39 的纹身。对成人应用脚趾纹身, 再次, 首先放置一个小斑点绿色纹身贴在铝箔上。然后, 用塑料锥或有机玻璃抑制剂来限制动物的使用, 使其能够进入后脚。将脚从约束装置中伸出来, 将脚放在拇指和食指的钩上, 露出所选择的脚趾以进行纹身.

现在, 在纹身膏中蘸一5mm 柳叶刀的尖端。而且, 像以前一样, 通过戳和刺穿所需的脚趾的皮肤至少三次, 以确保适当的穿透刺青。接下来, 轻轻地涂抹纹身, 去除多余的糊状, 并将动物放回笼子。与新生儿一样, 在手术后一天验证纹身。如果在纹身后的某一天是可见的, 那么它在动物和 #39 的生命周期中仍然是可见的。如果它是微弱或不可见, 然后重做之前描述的纹身.

我们 #39 的下一个标识方法; 我将讨论如何将微芯片植入啮齿目动物。通常用于标记实验室动物的芯片是射频识别或 RFID 芯片。通常, 芯片预装在针, 然后可以放在变更。对于芯片插入, 使用有机玻璃管来抑制动物, 确保你仍然可以抓住皮肤的肩膀。首先, 帐篷的皮肤创建一个口袋。然后把针穿过皮肤, 向上倾斜, 平行于脊柱, 并朝向尾巴。取出微晶片, 然后撤回针头。在注射部位拧紧皮肤, 防止芯片从皮肤中取出针。继续施加压力, 为任何皮肤出血提供止血。将动物从约束装置中取出, 并使用制造者提供的读卡器扫描芯片以确认识别码.

最后, 让 & #39; s 学习如何将临时染料应用于啮齿类动物进行鉴定。让 #39 从老鼠开始。首先, 抑制动物, 使肩胛骨之间的区域是容易接近的。身体的这部分是安全的从打扮。将染料的斑点或条纹放在这一区域的皮毛上, 然后将动物放回笼子里.

对老鼠来说, 抓住尾巴并拉紧它, 就能手动约束动物。这确保了染料应用领域是容易接近, 这可能是头, 肩膀, 或臀部。将染料的斑点或条纹放在毛皮上。有时可以在不限制动物的情况下应用无毒染料。定期检查这些动物的标记, 特别是如果你使用它们作为唯一的标识超过几天.

现在, 我们已经审查了这些不同的识别方法的过程, 让 & #39; 看看科学家们如何在今天的不同研究中使用它们.

在行为实验中使用啮齿类动物是相当普遍的。在这里, 研究人员使用尾巴纹身永久标记的动物, 然后观察他们在一个人工建造的 home-cage 环境中的几天。收集的数据显示, 在10天后的手术期内, 在控制和实验动物之间的行为, 如距离移动, 不同.

在另一项行为实验中, 调查人员在新生儿中进行了脚趾纹身, 并将其放在带有特殊麦克风的录音盒中, 以记录超声发声。这项实验的目的是看看在通话率的差异, 即每分钟发声的数量, 在野生类型和 Shank2 不足小鼠-autism-over 12 天的新生儿期和成人罩模型.

最后, 如前所述, 使用无毒染料是标记动物进行短期实验的有效方法。在这里, 科学家们对血浆蛋白的瞬态表达感兴趣。所以他们用临时标记标记了动物, 静脉注射了质粒 DNA, 并在两天后采集血样, 用西方印迹技术来测定蛋白质的表达.

您和 #39; 我刚刚看了朱庇特和 #39; 介绍了纹身、微芯片植入和实验室小鼠和老鼠的临时识别方法。动物识别是研究中记录记录的主要组成部分。因此, 在选择合适的识别方法时, 必须慎重考虑许多因素。这包括对动物的不适程度, 技术的易用性, 实验需要, 最后与方法相关的成本。一如既往, 感谢收看!

Summary

在选择适当的识别方法时, 必须慎重考虑许多因素。每种技术都有其优缺点, 必须在实验需要方面加以考虑。虽然成本必须与其他因素一起权衡, 但技术的简单性和对动物的不适程度应该是首要考虑。 45

References

  1. Robinson, V., Morton, D.B., Anderson, D., Carver, J.F.A., Francis, R.J., Hubrecht, R., Jenkins, E., Mathers, K.E., Raymond, R., Rosewell, I., Wallace, J., and Wells, D.J. 2003. Refinement and reduction in production of genetically modified mice. Laboratory Animals. 37:S1-S50.
  2. Schaefer, D.C., Asner, I.N., Seifert, B., Bürki, K., and Cinelli, P. 2010. Analysis of physiological and behavioural parameters in mice after toe clipping as newborns. Laboratory Animals. 44:7-13
  3. Castelhano-Carlos, M.J., Sousa, N., Ohl, F., and Baumans, V. 2010. Identification methods in newborn C57BL/6 mice: a developmental and behavioural evaluation. Laboratory Animals. 44: 88-103.
  4. Danneman, P.J., Suckow, M.A., and Brayton, C.F. 2013. The laboratory mouse. Second edition. New York, NY: CRC Press.
  5. Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.

1. 尾部纹身

尾部纹身很容易阅读, 不需要处理动物.

Figure 1
图1。成年老鼠的尾巴纹身

  1. 根据制造商和 #39 的说明准备纹身设备。少量墨水是必需的。黑染料应用于白化小鼠或大鼠, 绿色染料的色素小鼠或大鼠.
  2. 为识别准备动物.
    注意: 为了尽量减少忧虑或苦恼, 应在手术室而不是在动物居住区进行尾部纹身。
    1. 适当地限制动物进行纹身, 以使运动最小.
    2. 断奶大鼠使用塑料缺口杯进行克制, 在纹身平台上的螺栓下固定杯子的唇, 并通过缺口延伸到尾部.
    3. 成年小鼠可以通过一杯抑制剂来克制, 尾巴从开口处拉紧, 杯子的法兰通过平台或其他装置举行.
    4. 用棉签擦拭后用少量的稀释组织清洁剂清洁尾部。成年大鼠通常有规模和尾部的碎片堆积, 必须在应用纹身之前清洗。肥皂和水擦洗的尾巴将清除大部分的污垢和碎片。在继续之前先把尾巴干好.
    5. 在纹身前用棉签将组织油涂抹在皮肤上。组织油是必要的, 以减少组织损害, 软化皮肤和润滑纹身针。此外, 油溶解任何污垢没有清除的清洗过程和防止油墨染色的 nontattooed 皮肤.
  3. 应用纹身。
    1. 将针的尖端浸入颜料中, 并关闭机器.
    2. 用脚踏板激活的枪将针头的尖端带到纹身站点.
    3. 在一个方向上使短, 甚至笔画。数字和字母应该用这样的方式纹身, 以便它们以最小的角度和曲线 (可能时) 的片段构造.
    4. 深穿透到真皮中, 用针进行永久性色素沉积。激活针的声音的变化可以帮助辨别深度.
    5. 用针接近皮肤 90 o 角度来充分沉积颜料.
  4. 后纹身清除和护理
    1. 印迹 (不擦) 已完成的纹身过量颜料与纸巾.
    2. 纹身或纸巾上的血迹表明纹身的深度太深, 因此不太可能是永久性的.
    3. 用附加色素增强纹身字符的薄区域。字符是加强与色素沉积平行, 但不是在上面, 已经沉积颜料.
    4. 添加额外的色素, 将针尖浸入染料库中, 每两个字符为小鼠和每一个字符的老鼠.
    5. 褪色纹身的原因包括色素含量不足, 纹身太浅, 纹身太深, 针头不合适的角度, 使用钝或钩针, 或纹身太快.
    6. 根据制造商和 #39 的说明在每次使用后彻底清洗纹身设备

2。新生儿脚趾纹身

实验性协议可以要求新生儿的基因分型早于第一天, 这就使得这些幼崽必须被永久性地识别。使用脚趾纹身允许动物识别, 直到它们足够大的耳朵标签或耳朵冲压.

Figure 2
图2。对新生鼠进行文身的适当抑制技术。柳叶刀的尖端有绿色的染料.

  1. 约束 preweaned 的 pup。
    1. 将手上的新生儿放在纱布垫上。将脚放在食指的拇指和钩之间, 露出所选择的脚趾或脚趾, 以进行纹身.
    2. 保持脚靠近脚趾, 使脚趾在它后面有一个坚实的表面, 防止它弯曲掉.
    3. 定位脚时不要 overtwist 腿。受约束的幼崽可能会摆动, 但没有必要听到发声.
  2. 准备设备。
    1. 选择 4.5 mm 黄花动物柳叶刀.
    2. 在孔表面放置一小点绿色纹身膏; 铝箔效果良好.
    3. 在纹身膏中只蘸柳叶刀的尖端.
    4. 只使用少量的粘贴.
  3. 应用纹身。
    1. 根据标识代码, 用黄花柳叶刀戳所需的脚趾.
    2. 穿刺皮肤, 将糊状物引入皮肤, 留下印记.
    3. 戳相同的斑点三次, 以确保适当的渗透.
    4. 避免戳得太深, 脚趾流血; 这会导致一个微弱的纹身.
  4. 后纹身清理和护理
    1. 用吸水擦拭/毛巾轻轻涂抹斑点以去除多余的糊状物.
    2. 不要尝试清除脚或身体上的多余粘贴.
    3. 将动物返回笼子.
    4. 当护理幼崽被纹身时, 最好也刺青大坝。这可能会阻止她对幼崽的反应过度, 这可能导致过度梳理纹身.
    5. 对每个垃圾使用新的柳叶刀.
    6. 纹身应在手术后的次日进行验证。如果斑点是微弱或不可见的, 重做纹身。如果在纹身后的那一天, 这些点是可见的, 那么它们在动物的生命周期中仍然是可见的.

3。成年大鼠和小鼠的脚趾纹身

当一窝新生儿被纹身时, 建议母亲也要纹身, 这样她的幼崽身上的糊状物就不是她的外型了.

  1. 对该动物的限制。
    1. 通过使用塑料锥或有机玻璃抑制剂来约束动物, 使其能够进入后脚.
    2. 将脚从约束装置中伸出.
    3. 在食指的拇指和钩之间放置脚, 以露出所选的脚趾或脚趾, 以进行纹身
    4. 保持脚靠近脚趾, 使脚趾在它后面有一个坚实的表面, 防止脚趾弯曲掉.
    5. 定位脚时不要 overtwist 腿。受限制的成年人可能会试图撤回脚.
  2. 准备设备。
    1. 选择 5 mm 黄花动物柳叶刀.
    2. 在孔表面放置一小点绿色纹身膏; 铝箔效果良好.
    3. 在纹身膏中只蘸柳叶刀的尖端.
    4. 只使用少量的粘贴.
  3. 应用纹身。
    1. 根据标识代码, 用黄花柳叶刀戳所需的脚趾.
    2. 穿刺皮肤, 将糊状物引入皮肤, 留下印记.
    3. 戳相同的斑点三次, 以确保适当的渗透.
    4. 避免戳得太深, 脚趾流血; 这会导致一个微弱的纹身.
  4. 后纹身清理和护理
    1. 轻轻地在吸水性擦拭/毛巾上涂抹斑点, 以去除多余的浆糊.
    2. 不要尝试清除脚或身体上的多余粘贴.
    3. 将动物返回笼子.
    4. 对每种动物使用新的柳叶刀.
    5. 纹身应在手术后的次日进行验证。如果斑点是微弱或不可见的, 重做纹身。如果在纹身后的那一天, 这些点是可见的, 那么它们在动物的生命周期中仍然是可见的.

4. 晶片

RFID 芯片的植入是一种用于识别动物的常用方法.

  1. 将微芯片装入变更, 或选择预加载的注射器.
  2. 用有机玻璃约束管抑制动物, 使其能够在肩部上抓取皮肤.
  3. 帐篷的皮肤, 创造一个口袋.
  4. 将针放在皮肤上, 向上倾斜并平行于脊柱, 并将其指向尾部.
  5. 弹出微芯片.
  6. 取出针头并在注射点处捏紧皮肤。这样可以防止微芯片从皮肤中取出针。继续施加压力, 为任何皮肤出血提供止血.
  7. 从约束装置中取出动物并扫描芯片以确认识别码.

Figure 3
图3。成年大鼠的微芯片植入.

5. 小鼠的临时鉴定

无毒染料和动物标记物可用于小鼠的临时鉴定.

  1. 限制鼠标, 使肩胛骨之间的区域可用于毛皮上的标记.
  2. 在该区域的毛皮上放置一个标记、斑点或条纹的染料。该区域用于防止动物在梳理时去除标记.
  3. 如果将标记作为唯一标识符使用了几天, 请定期检查它.
  4. 尾部也可以用于短工期。然而, 动物可能会去除它的标记, 而梳理.

6。老鼠的临时识别

  1. 抑制鼠, 使染料或标记应用的区域易于访问。在某些情况下, 当只需要一个条纹或点, 动物将不需要被限制, 但允许自由移动在笼子里.
  2. 手动约束通过抓住尾巴和保持它绷紧, 而应用识别通常是这样做的.
  3. 临时固定使用吸入麻醉剂可以为脾气暴躁的动物做.
  4. 如果使用此方法作为唯一标识符超过几天, 则定期检查标记.

识别单个研究动物的能力是科学记录保存和数据收集的一个重要方面。区分动物之间确保正确的主题用于预期的实验过程.

科学家们使用了几种永久性的和临时性的方法来鉴定单个的实验动物。在这个视频中, 我们和 #39; 我将讨论涉及纹身成人啮齿动物的尾巴, 新生儿脚趾和成人脚趾的方法。下一步, 我们和 #39; 我将触及在成年大鼠中常见的微芯片放置技术, 然后是使用无毒染料的通用临时识别方法.

在钻研这些方法的协议之前, 请 #39; 请检查这些技术的注意事项、优点和缺点。尾部纹身在许多研究方案中都是有益的, 例如涉及 MRI 成像的实验, 或者是动物在基因上倾向于包括溃疡性皮炎在内的皮肤疾病。尾巴纹身的另一个优点是, 它们很容易被形象化, 而不必手动限制动物.

某些实验性的协议要求新生儿的基因分型早于第一天, 这就使得这些幼崽必须被永久识别。使用脚趾纹身允许这些动物被识别, 直到它们足够大的耳朵标签或耳朵冲压。这是一个好主意, 应用类似的脚趾纹身的成年母亲, 以防止她的反应和过度梳理她的幼崽和 #39; 新的纹身。虽然使用这种方法有几个优点, 但缺点是程序需要技能、实践、稳定的手和专用设备.

正在考虑的下一个永久性标识方法是晶片。虽然植入微芯片是一个相对容易的过程, 但有几个因素限制了它的实用性。首先, 这些芯片的大小大约是一大粒大米, 需要10-12 针的植入, 这是太大的鼠标, 从而限制了成年大鼠的方法。其次, 微芯片是昂贵的, 因此不太适合识别大量的动物。最后, 在涉及 MRI 的实验中不能使用微晶片。然而, 如果有一组有价值的动物, 如具有独特遗传学的增殖动物, 必须永久识别, 可以使用微芯片.

我们 #39 的最后一个方法是使用无毒标记进行临时识别。这种无毒的标记物是为研究动物的皮毛着色而制作的。这种方法是理想的短期研究, 要求动物只识别几个小时或几天, 虽然染料可以保持可见几个星期。一些研究人员将这些标记与其他识别方法结合使用, 以方便地发现群中的特定动物.

现在我们已经讨论了背景, 让和 #39; 我们学习的程序, 从尾部纹身开始。在这里, 我们将演示成年小鼠的程序, 但同样可以适用于断奶和成年大鼠.

为了减少对动物的任何忧虑或苦恼, 应在程序室而不是在动物居住区进行尾部纹身。在应用纹身之前, 用一杯抑制剂来抑制鼠标, 尾巴从开口拉紧。杯子的法兰通过一个专门的玻璃平台举行。接下来, 在棉签上用少量的稀释组织清洁剂清洁尾部。这一步是重要的, 以消除任何规模和碎片堆积可能会干扰纹身。接下来, 用另一种棉签将组织油涂抹到尾部皮肤上。通过软化皮肤和为纹身针提供润滑, 减少组织损伤。此外, 油溶解污垢不清除的清洁过程和防止油墨染色的 non-tattooed 皮肤。现在你和 #39, 准备好应用纹身了.

当机器关闭时, 将纹身针的尖端浸入颜料中, 即是柳叶刀或皮下注射针。接下来, 用脚踏板激活枪, 将纹身工具放在尾部, 并将针尖带到纹身部位。接近皮肤与针在90和 #176; 角度和深入到真皮, 使色素是永久沉积。激活针的声音的变化可以帮助辨别深度。在一个方向上做短甚至笔画, 形成数字和字母。尝试你应用纹身时的最小曲线和角度.

添加额外的色素, 将针的尖端浸入染料库中, 每1/2 个字符为小鼠和每一个字符。用纸巾涂抹已完成的纹身, 去除多余的色素。纹身或纸巾上的血迹表明纹身的深度太深, 因此不太可能是永久性的。通过将针平行于已沉积颜料的顶部, 而不是放在上面, 以增加色素。在每次使用后彻底清洗纹身设备, 并用新的或无菌的针头和新鲜的墨水供应, 以防止疾病传播.

下一步, 我们将学习如何对新生儿和成人应用脚趾纹身。在这里, 我们将演示在小鼠的程序, 但同样的步骤适用于大鼠.

新生儿在脚趾上纹身, 因为 tailbones 不是僵化的, 尾巴的长度太小。此外, 随着尾巴的增长, 皮肤将被拉长, 数字可能会变得扭曲, 微弱, 和不可读。首先放置一个绿色的纹身贴在一个无孔表面, 如铝箔的斑点。接下来, 用纱布垫在你的手里 pre-weaned 的小狗。把脚放在拇指和食指的钩上, 露出被选中的脚趾纹身。保持脚靠近脚趾, 使所选择的脚趾有一个坚实的表面背后, 以防止它弯曲离开.

现在, 蘸4.5 毫米柳叶刀的尖端进入纹身膏。然后, 按预先设定的代码戳出所需的脚趾。为了确保适当的渗透, 戳相同的斑点三次。穿透皮肤足以使糊状物留下印记, 但避免戳得如此深, 脚趾流血。用纱布轻轻地涂抹新的纹身, 去掉多余的纹身膏, 并将动物带回笼子。用新的柳叶刀做下一窝。一天后的过程, 验证纹身是可见的.

当护理幼崽被纹身时, 最好也刺青大坝。这可能会阻止她过度反应, 过度梳理她的幼崽和 #39 的纹身。对成人应用脚趾纹身, 再次, 首先放置一个小斑点绿色纹身贴在铝箔上。然后, 用塑料锥或有机玻璃抑制剂来限制动物的使用, 使其能够进入后脚。将脚从约束装置中伸出来, 将脚放在拇指和食指的钩上, 露出所选择的脚趾以进行纹身.

现在, 在纹身膏中蘸一5mm 柳叶刀的尖端。而且, 像以前一样, 通过戳和刺穿所需的脚趾的皮肤至少三次, 以确保适当的穿透刺青。接下来, 轻轻地涂抹纹身, 去除多余的糊状, 并将动物放回笼子。与新生儿一样, 在手术后一天验证纹身。如果在纹身后的某一天是可见的, 那么它在动物和 #39 的生命周期中仍然是可见的。如果它是微弱或不可见, 然后重做之前描述的纹身.

我们 #39 的下一个标识方法; 我将讨论如何将微芯片植入啮齿目动物。通常用于标记实验室动物的芯片是射频识别或 RFID 芯片。通常, 芯片预装在针, 然后可以放在变更。对于芯片插入, 使用有机玻璃管来抑制动物, 确保你仍然可以抓住皮肤的肩膀。首先, 帐篷的皮肤创建一个口袋。然后把针穿过皮肤, 向上倾斜, 平行于脊柱, 并朝向尾巴。取出微晶片, 然后撤回针头。在注射部位拧紧皮肤, 防止芯片从皮肤中取出针。继续施加压力, 为任何皮肤出血提供止血。将动物从约束装置中取出, 并使用制造者提供的读卡器扫描芯片以确认识别码.

最后, 让 & #39; s 学习如何将临时染料应用于啮齿类动物进行鉴定。让 #39 从老鼠开始。首先, 抑制动物, 使肩胛骨之间的区域是容易接近的。身体的这部分是安全的从打扮。将染料的斑点或条纹放在这一区域的皮毛上, 然后将动物放回笼子里.

对老鼠来说, 抓住尾巴并拉紧它, 就能手动约束动物。这确保了染料应用领域是容易接近, 这可能是头, 肩膀, 或臀部。将染料的斑点或条纹放在毛皮上。有时可以在不限制动物的情况下应用无毒染料。定期检查这些动物的标记, 特别是如果你使用它们作为唯一的标识超过几天.

现在, 我们已经审查了这些不同的识别方法的过程, 让 & #39; 看看科学家们如何在今天的不同研究中使用它们.

在行为实验中使用啮齿类动物是相当普遍的。在这里, 研究人员使用尾巴纹身永久标记的动物, 然后观察他们在一个人工建造的 home-cage 环境中的几天。收集的数据显示, 在10天后的手术期内, 在控制和实验动物之间的行为, 如距离移动, 不同.

在另一项行为实验中, 调查人员在新生儿中进行了脚趾纹身, 并将其放在带有特殊麦克风的录音盒中, 以记录超声发声。这项实验的目的是看看在通话率的差异, 即每分钟发声的数量, 在野生类型和 Shank2 不足小鼠-autism-over 12 天的新生儿期和成人罩模型.

最后, 如前所述, 使用无毒染料是标记动物进行短期实验的有效方法。在这里, 科学家们对血浆蛋白的瞬态表达感兴趣。所以他们用临时标记标记了动物, 静脉注射了质粒 DNA, 并在两天后采集血样, 用西方印迹技术来测定蛋白质的表达.

您和 #39; 我刚刚看了朱庇特和 #39; 介绍了纹身、微芯片植入和实验室小鼠和老鼠的临时识别方法。动物识别是研究中记录记录的主要组成部分。因此, 在选择合适的识别方法时, 必须慎重考虑许多因素。这包括对动物的不适程度, 技术的易用性, 实验需要, 最后与方法相关的成本。一如既往, 感谢收看!

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