齧歯動物識別 II

Lab Animal Research

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Overview

< p クラス = 'jove_content' > ソース: ケイ ・ スチュワート、RVT、RLATG、CMAR;ヴァレリー A. シュレーダー、RVT、RLATG。ノートルダムのノートルダム大学

動物のレコードは、データ収集が正しいことを確認する正確に維持されなければなりません。すべてそれぞれの動物に関連する情報の詳細なデータベースを持っていることにケージのカードの情報を保持するレコードの範囲。記録管理の主要なコンポーネントは、研究動物の個々 の id です。マウスおよびラットの識別に適したさまざまな方法があります。このビデオは、入れ墨、マイクロ チップの配置、および一時的な識別方法の手続きのテクニックについて説明しも、それぞれのメリットを探る

Cite this Video

JoVE Science Education Database. ラボ動物研究の必需品. 齧歯動物識別 II. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

< p クラス = 'jove_content' > テール入れ墨の使用は多くの研究プロトコールに有益であります。テール入れ墨は MRI マシンのイメージを作成するある動物または潰瘍性皮膚炎は遺伝的傾向があるに最適です。それを抑えることがなく、ケージに動物を簡単に尻尾タトゥーは簡単に可視化します。ただし、この方法で必要スキル、実践、そして着実に手;特殊な器具も必要です。1

実験的プロトコルは新生児のジェノタイピングを一日も早く必要があります。その結果、これらの子犬を永続的に識別することは不可欠です。若い身空で耳の耳介、耳にタグを挿入するのには十分開発されないと耳の穿孔器はそれらをまだ使用できません。過去には、新生児を識別するためにつま先の削除コードを使用する研究者のために共通だった。しかし、これは若い動物とダムの両方にストレスだった、こうして非人道的と考えられています。2 のつま先の入れ墨を使用できます、動物耳付けや耳パンチに対して十分な大きさになるまで永続的に識別することです。3

マイクロ チップの注入のプロセスは比較的簡単で、マウスで同定の有用性を制限するいくつかの要因があります。滅菌マイクロ チップ、ご飯の粒が大きいのサイズ 10 に 12 ゲージ配信用の針を必要とされます。したがって、彼らが非常に大きいマウスです。マウスの寿命は短く、動物の数は通常広汎なよう、マイクロ チップの読取装置コストは法外なできます。MRI マシンのイメージを作成する運命にある動物は、それらのインプラントを持つことはできません。ただし、恒久的に識別する必要があります貴重な動物のグループは、マイクロ チップが使用できます。4

時間または数日の特定の動物を必要とする急性の研究は恒久的な身分証明書の使用を必要としません。毒性マーカーは、動物の毛皮を着色のために特別に作られています、いくつかの色で利用可能です。これらのマーカーの染料は数週間目に見える残ることが。マーカー他の方法で [グループに特定の動物を簡単にスポットを組み合わせても使用できます。

Procedure

1 尾タトゥー

テール入れ墨は動物を処理することなく簡単に読み取られます。

Figure 1
図 1。成体マウスに尾入れ墨

  1. メーカーによればタトゥー用品の準備 ' の指示。少量のインクが必要です。アルビノ マウスやラット、有色マウスまたはラットの緑色の染料黒の染料を使用必要があります
  2. 識別のために動物を準備します
    。 注: 不安や苦痛を最小限に抑えるテール入れ墨行わなければならない動物の団地ではなく処置室で。
    1. 、動きは最小限の入れ墨のための動物を適切に抑制します
    2. 幼ラットが唇のタトゥー プラットフォームと切り込みを通って延びる尾のボルトの下に保護されたカップのプラスチック切欠きのカップを使用して抑制される
    3. カップ落による成体を抑制できる、プラットフォームやその他のデバイスを介して場所で開催されたオープニングとカップのフランジからピンと張ったプルの尾を持つ
    4. 希薄組織クリーナーの少量を綿棒で尻尾をきれい。ラットの一般にスケールおよび入れ墨を適用する前に洗浄する必要があります尾の残骸の蓄積があります。尾の石鹸と水スクラブは汚れやゴミの大部分を削除します。先に進む前によく尻尾を乾燥します
    5. 入れ墨の直前に綿棒で皮膚に適用組織オイル。ティッシュ オイル皮膚を軟化し、入れ墨針を潤滑して組織の損傷を最小限に抑える必要があります。さらに、油洗浄のプロセスが削除していない任意の汚れを分解してインクが nontattooed 肌の汚れることを
  3. 入れ墨を適用します。
    1. マシンのオフと顔料に針の先端を浸し
    2. 足のペダルによって活性化される銃でタトゥー サイトに針の先端をもたらすします
    3. は短い、一方向にストロークも。彼らは最小の角度と曲線 (可能な場合) のセグメントで構成されているので、このような方法では数字とアルファベットを入れ墨する必要があります
    4. 。 永久的な色素の針で真皮に十分に深く浸透
    5. 蒸着。活性化の針の音の変化は、深さを識別を助けることができる
    6. 色素の十分な堆積のため 90 o の角度で針を用いて皮膚にアプローチします
  4. 後タトゥー クリーンアップとケア
    1. しみ (拭かないでください) ペーパー タオルで余分な顔料の完成したタトゥー
    2. タトゥーや紙タオルで血液の存在を示しますタトゥーがあまりにも深く、作られた、したがって永住するそうです
    3. は、追加の顔料とタトゥーの文字の薄い領域を強化します。文字がない上に、すでに堆積顔料色素堆積並列で補強します
    4. マウスの 2 文字とラットのすべての 1 つの文字の色素の貯留層に針の先端を浸し、その他顔料を追加する
    5. 理由フェージング入れ墨にはタトゥーを余りにすぐに作られてあまりにも深く作られた皮膚に針の不適切な角度鈍いまたはフック針が使用されているタトゥーや入れ墨したあまりにも浅い色素が十分な量が含まれています
    6. タトゥー機器製造元によると使用後を徹底的に掃除 ' s 指示します

2。つま先が新生児の入れ墨

実験プロトコルはこれらの子犬が恒久的に識別することが重要となる日のいずれか早期新生児のジェノタイピングを要求できます。つま先の入れ墨の使用により耳のタグ付けまたは耳パンチに対して十分な大きさになるまでに識別される動物

Figure 2
図 2。新生児マウスを入れ墨の適切な拘束テクニック。『 ランセット 』 は、先端の緑色色素

  1. 抑制哺乳仔。
    1. カップ、ガーゼに手で新生児パッド。親指と選ばれたつま先または入れ墨のためのつま先を公開する人差し指のクルックの間足を配置します
    2. つま先がある離れて曲げからそれを防止する、それの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します
    3. 。 足を配置する場合、
    4. は足を overtwist ないか。拘束された子犬が小刻みに動く可能性がありますが、発声が必ずしも聞こえない
  2. 機器を準備します。
    1. 4.5 mm アキノキリンソウ動物ランセットを選択します
    2. 無孔の表面に緑のタトゥー ペーストの小さなスポットを配置; アルミ箔がうまく機能します
    3. タトゥー ペーストのランセットの先端のみをディップします
    4. ペーストのわずかな量を使用します
  3. 入れ墨を適用します。
    1. 識別コードによるとアキノキリンソウ ランセットで目的のつま先を突きます
    2. のマークを残して、皮膚に貼り付けを導入する皮膚を穿刺します
    3. 適切な浸透を保証するために同じ場所に 3 回を突きます
    4. 避けるため深くを突っつい、つま先出血; これにより、薄くタトゥー
  4. 後タトゥー クリーンアップとケア
    1. 優しく余分なペーストを削除する吸収ワイプ/タオルでスポットをしみ
    2. 足や体から余分なのりをきれいにしないでください
    3. そのケージに動物を返します
    4. 看護の仔が入れ墨をするとき、それはまたダムを入れ墨することをお勧めです。これは、タトゥーの過剰グルーミングにつながる可能性のある子犬に貼り付けに過剰反応してから彼女をできない場合があります
    5. 各くずの新しいランセットを使用します
    6. 入れ墨は、手順の後の日に検証すべき。ドットがかすかなまたは表示されていない場合は、タトゥーをやり直します。動物の寿命のため表示されます必要があります入れ墨の翌日はドットが表示されている場合

3。つま先は、ラットやマウスの入れ墨

新生児のくずを入れ墨, ときは、その母親も入れ墨される、彼女の子犬に貼り付けがない彼女に外国をお勧めします。

  1. 動物の拘束。
    1. プラスチック円錐形または後部のフィートにアクセスできるプレキシ ガラス落を使用して動物を抑制します
    2. 拘束デバイスから足を延ばして
    3. 親指と選ばれたつま先または入れ墨のためのつま先を公開する人差し指の間の足の位置
    4. つま先がある離れて曲げからつま先を防ぐことそれの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します
    5. 。 足を配置する場合、
    6. は足を overtwist ないか。拘束された、大人が足を撤回しようとして可能性があります
  2. 機器を準備します。
    1. 5 mm アキノキリンソウ動物ランセットを選択します
    2. 無孔の表面に緑のタトゥー ペーストの小さなスポットを配置; アルミ箔がうまく機能します
    3. タトゥー ペーストのランセットの先端のみをディップします
    4. ペーストのわずかな量を使用します
  3. 入れ墨を適用します。
    1. 識別コードによるとアキノキリンソウ ランセットで目的のつま先を突きます
    2. のマークを残して、皮膚に貼り付けを導入する皮膚を穿刺します
    3. 適切な浸透を保証するために同じ場所に 3 回を突きます
    4. 避けるため深くを突っつい、つま先出血; これにより、薄くタトゥー
  4. 後タトゥー クリーンアップとケア
    1. 優しく余分なペーストを削除する吸収ワイプ/タオルの上のスポットをしみ
    2. 足や体から余分なのりをきれいにしないでください
    3. そのケージに動物を返します
    4. 各動物の新しいランセットを使用します
    5. 入れ墨は、手順の後の日に検証すべき。ドットがかすかなまたは表示されていない場合は、タトゥーをやり直します。動物の寿命のため表示されます必要があります入れ墨の翌日はドットが表示されている場合

4. microchipping

RFID チップの注入は動物を識別するために一般的に使用されるメソッドです。

  1. 、Applier にマイクロ チップを読み込むまたはプリロードされた注射器を選択します
  2. 肩に皮膚の把握ができるプレキシ ガラス拘束チューブを用いた動物を抑制します
  3. ポケット、皮膚をテントします
  4. ベベルと背骨に平行、皮膚を通して針を置き、尾に向かってそれを指示します
  5. マイクロ チップを皮下にイジェクトします
  6. 針を撤回し、注射の時点で閉じた皮をつまみます。これは皮膚から針を次の中からマイクロ チップを防ぎます。任意の皮膚の出血の止血を提供するために圧力を適用する続行します
  7. 拘束デバイスから動物を削除し、識別コードを確認するチップをスキャンします

Figure 3
図 3。ラットにおけるマイクロ チップ配置

5 マウスの一時的な id

無毒染料や動物マーカーはマウスの一時的な識別するため使用できます。

  • 肩甲骨の間の領域、マーキング、便利に利用できるようなマウスを抑制する
    1. は、この地域で毛皮にマーカー、スポット、または染料の連勝を配置します。動物が毛づくろいしながらマーキングを削除するを防ぐためにこの領域が使用されます
    2. マーキングよりも数日間の唯一の識別子として使用する場合に定期的にチェックします
    3. テールは、短期間の使用もできます。動物が毛づくろいしながらそこからマークを削除可能性がありますただし、.

    6。ラットの一時的な id

      染料またはマーカーのアプリケーションのための区域、簡単に利用できるように、
    1. はラットを抑制します。いくつかのケースでストライプやドットのみが必要な場合動物抑制される必要はありませんが、自由にケージ内の移動を許可します
    2. 尾をつかんで押し識別を適用ながらピンと張ったマニュアル抑制は一般に行われます
    3. 気難しい動物用吸入麻酔薬を使用して一時的な固定を行うことができます
    4. マーキングよりも数日間の唯一の識別子としてこの方法を使用する場合に定期的にチェックします

    個々 の研究動物を識別する機能は科学的な記録とデータ収集の重要な側面です。目的の実験プロシージャに正しい件名を使用することにより、動物の区別します

    そこは、科学者が個々 の実験動物を識別するために使用いくつかの恒久的かつ一時的な方法です。このビデオでは我々 ' 説明メソッド大人の齧歯動物の尻尾, 新生児つま先と大人のつま先の入れ墨を含む。次に、我々 ' ll マイクロ チップ配置法にふれることを一般的にラット、非毒性の染料を利用した普遍的な一時的な同定法に続いて行われる

    これらの方法のためのプロトコルを掘り下げる前に ' s 評価の考慮事項、利点、およびそれぞれの方法の欠点。尾の入れ墨は、mri や動物の皮膚の潰瘍性皮膚炎を含む状態に遺伝的素因ものを含む実験など、多くの研究プロトコールで有益です。テール入れ墨の別の利点は、彼らは簡単に手動で動物を抑制することがなく視覚化

    特定の実験的プロトコルにはアザラシが恒久的に識別することが重要となる日のいずれか早く新生児の遺伝子型が必要です。つま先の入れ墨の耳のタグ付けまたは耳パンチに対して十分な大きさになるまでに識別されるそのような動物を使用します。過剰反応していると彼女の子犬を過度にグルーミングから彼女を防ぐために大人の母親同様つま先入れ墨を適用することをお勧め ' s の新しいタトゥー。このメソッドを使用していくつかの利点がありますが、欠点はプロシージャ必要スキル、実践、着実な手と特殊な装置であること

    考慮次の永久的な同定法がマイクロ チップです。マイクロ チップを植え付けることは比較的簡単なプロセスが、その有用性を制限するいくつかの要因があります。まず、これらのチップはお米の粒が大きい程度の大きさ、10-12 ゲージ マウス、ラットにメソッドが少なくてに対して大きすぎる注入用針を必要です。第二に、マイクロ チップは高価であり、したがって不適切な動物の多数を識別するため。最後に、マイクロ チップは、MRI を含む実験では使用できません。ただし、恒久的に識別する必要がありますユニークな遺伝と育成動物のような貴重な動物のグループ場合、マイクロ チップ使用できます

    最後のメソッド、我々 ' 説明は非毒性マーカーを使用して一時的な識別。非毒性マーカーは、着色の研究動物の毛皮のために作られています。このメソッドは、染料が目に見える数週間残ることができるが、少数の時間または日の動物を識別することを必要とする短期の研究に最適です。一部の研究者これらのマーカーと組み合わせて使用その他識別方法簡単にグループの特定の動物を発見する

    今では、背景を説明してみましょう ' テール入れ墨から始まる手順を学びましょう。ここでは、成体マウスの手順を実演しますが、離乳とラットの同じ適用できます

    。 動物に苦痛を与えないか不安を最小限に抑える

    動物の住宅地ではなく処置室で、尾の入れ墨を実行される必要があります。入れ墨を適用する前にプルの開口部からピンと張った尾を持つカップ落を使用してマウスを抑制します。カップのフランジは、特殊なガラスのプラットフォームを介して行われています。次に、きれい希薄組織の少量の尾に、綿棒にクリーナー。この手順は、スケールや破片のタトゥーに干渉する可能性のすべての蓄積を削除することが重要です。次に、別の綿棒で尾皮膚に組織油を適用します。これは、皮膚を軟化、入れ墨針の潤滑を提供することによって組織の損傷を最小限に抑えます。さらに、油汚れ洗浄プロセスでは削除されませんを溶解し、インク非入れ墨皮膚に染色を防ぐことができます。今、あなたは '、入れ墨を適用する準備ができました

    マシンがオフで中は、色素にランセットまたは皮下注射針、入れ墨の針の先端を浸し。次に、足のペダルを使用して、銃をアクティブ化、尻尾にタトゥー ツールを配置およびタトゥー サイトに針の先端をもたらします。90 ° の角度で針を用いて皮膚に近づくし、色素が沈着する完全にように真皮に深く十分に浸透します。活性の針の音の変化は、深さを見分けることができます。ように数字と文字を形成、1 つの方向でもストロークが短い。しようとします。se 最小曲線と入れ墨を適用するときの角度

    追加顔料を追加するのには、すべてのワンツー文字マウス用とラットのすべての 1 つの文字の色素の貯留層に針の先端を浸し。余分な色素を削除するペーパー タオルで完成したタトゥーを消します。タトゥーや紙タオルで血液の存在は、タトゥー深すぎる作られた従って永久的であるようであることを示します。針をしない上に、既に沈殿させた顔料に、平行に置くことによって追加色素薄い文字を強化します。各使用後タトゥー機器を徹底的にきれいにし、病気の感染を防ぐためにケージの間新しいまたは滅菌針とインクの新鮮な供給を使用します

    次、新生児と成人につま先の入れ墨を適用する方法を学びます。ここでは、マウスの手順を実演しますが、同じ手順は、ラットの適用

    新生児は彼らのつま先に入れ墨されて、tailbones は骨化しないと尾の長さが小さすぎます。また、尻尾が大きくなると、皮膚に延伸することし、歪んだ、かすかな、そして読み取り不可能な数字になります。アルミ箔など非多孔質表面に緑色タトゥー ペーストのスポットを置くことによって開始します。次に、ガーゼのパッドを使用してあなたの手で離乳前の子犬をカップします。あなたの親指と入れ墨の選ばれた爪先を公開する人差し指のクルックの間足を配置します。選択したつま先がある離れて曲げを防ぐためにそれの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します

    今、タトゥー ペースト 4.5 mm ランセットの先端に軽く浸します。その後、事前に決められたコードに従って必要なつま先を突きます。適切な浸透するように、同じ場所を 3 回突きます。ペーストに、マークを残すように十分皮膚に浸透が深く突きをつま先出血を避けます。優しく任意の余分なタトゥーのペーストを削除するガーゼの新しいタトゥーのしみ、そのケージに動物を戻ります。次のゴミの新しいランセットを使用します。手順の後の 1 日は入れ墨が表示されていることを確認します

    看護の仔が入れ墨をするとき、それはまたダムを入れ墨することをお勧めです。これは過剰反応と彼女の子犬を過度にグルーミングから彼女を防ぐことができます ' s 入れ墨。つま先の入れ墨を大人に適用するには、もう一度、そもそも緑タトゥー ペーストの小さなスポット アルミ箔に。その後、プラスチック製のコーンまたは後部のフィートにアクセスできるプレキシ ガラス落を使用して動物を抑制します。拘束デバイスから足を拡張し、親指と人差し指入れ墨の選ばれた爪先を公開するための詐欺師の間の足の位置します

    は今、タトゥー ペースト 5 mm ランセットの先端を浸しなさい。前に、つつくと適切な溶込みを確保するため、少なくとも 3 回必要なつま先の皮膚に穴を開けるで入れ墨を適用します。次に、慎重に任意の余分なペーストを削除するタトゥーを消す、そのケージに動物を返します。新生児期とタトゥーのプロシージャの後の 1 日を確認します。それを動物のために表示したまま刺青の翌日は、マークが表示されている場合 ' s 寿命。前述したタトゥーをやり直すかすかなまたは見えない場合

    次の同定法、我々 ' 説明齧歯動物にマイクロ チップを植え付けることを含みます。実験動物の分類のために一般的に使用されるチップは、無線周波数識別、または RFID チップです。通常、チップは、針、applier に配置することでプリロードされます。チップ挿入、肩に皮膚をまだ把握できるかどうかを確かめる動物を抑制するのにプレキシ ガラス チューブを使用します。まず、テントのポケットを作成する肌。皮膚を通して針を入れ、背骨に平行、テールに向けて斜角。皮下にマイクロ チップを取り出し、針を撤回します。皮膚の針を次の中からチップを防ぐために注射部位の閉鎖皮をつまみます。引き続き任意の皮膚の出血の止血を提供するために圧力を適用します。拘束デバイスから動物を削除し、識別コードを確認する製造によって提供されるリーダーを使用してチップをスキャンします

    最後に、聞かせて ' 一時的な色素を同定のための齧歯動物に適用する方法を学びましょう。聞かせて ' マウスから始めましょう。まず、肩甲骨の間の領域がアクセスできるように、動物を抑制します。身体のこの部分は、セルフ グルーミングから安全です。この地域で毛皮にスポットまたは染料の連勝を配置し、そのケージに動物の背部を配置

    、ラットの尾をつかんでそれをピンと張った保持して手動で動物を抑制します。これにより、染料のアプリケーションのための領域は、頭部、肩、臀部にある可能性があります簡単にアクセス可能です。毛皮にスポットまたは染料の連勝を配置します。時々、動物を拘束せずに無毒染料を適用することが可能です。も数日間、唯一の識別子としてそれらを使用している場合は特に、定期的にこれらの動物のマークをチェックします

    今、これらの異なる識別方法の手順については、' s は、どのように科学者を使用しているそれら異なる研究で今日参照してください

    齧歯動物行動実験での使用はかなり一般的です。ここでは、研究者は、完全に動物をマークする、入れ墨と人工的につくられたホーム ケージ環境で数日間観察し、尾を使用しました。データは 10 日間ポスト手術期間動作、移動距離のようなコントロールと実験動物の間で明らかに違いを収集します

    別の行動実験で調査官はつま先が新生児の入れ墨を実行し、レコードの超音波発声する特殊なマイクで録音ボックスにそれらを配置します。この実験の目的は呼び出しの違いを見て、レート、つまり野生型および Shank2 欠損マウスで毎分発声数自閉症以上 12 日新生児期および成体のフードのモデル

    最後に、前述したように、非毒性染料を用いる短期間の実験のために動物をマークする効率的な方法です。ここでは、科学者たちは、血漿タンパク質の一過性発現に興味があった。彼らは一時的なマーカーで動物をマーク、プラスミド DNA を静脈内に注入、血液サンプル 2 日間西部のしみを用いたタンパク質の発現を決定する後収集します

    あなた ' ve を見たゼウス ' s 導入、入れ墨、マイクロ チップの配置、および実験室のマウスおよびラットの一時的な識別方法。動物の個体識別は、研究の記録管理の主要なコンポーネントです。したがって、適切な手法を選択すると、多くの要因を審議する必要があります。これには、動物に不快感のレベル、技術、実験的ニーズと最後にメソッドに関連付けられているコストの使いやすさが含まれます。いつも、見てくれてありがとうとして!

    Summary

    多くの要因を熟慮する必要があります適切な識別方法を選択するとき。各テクニックは、長所と短所が実験のニーズに関連して考慮する必要があります。コストは、他の要因と共に検討する必要があります、技術の使いやすさと、動物に不快感のレベルには、主要な考慮事項が必要があります。4, 5

    References

    1. Robinson, V., Morton, D.B., Anderson, D., Carver, J.F.A., Francis, R.J., Hubrecht, R., Jenkins, E., Mathers, K.E., Raymond, R., Rosewell, I., Wallace, J., and Wells, D.J. 2003. Refinement and reduction in production of genetically modified mice. Laboratory Animals. 37:S1-S50.
    2. Schaefer, D.C., Asner, I.N., Seifert, B., Bürki, K., and Cinelli, P. 2010. Analysis of physiological and behavioural parameters in mice after toe clipping as newborns. Laboratory Animals. 44:7-13
    3. Castelhano-Carlos, M.J., Sousa, N., Ohl, F., and Baumans, V. 2010. Identification methods in newborn C57BL/6 mice: a developmental and behavioural evaluation. Laboratory Animals. 44: 88-103.
    4. Danneman, P.J., Suckow, M.A., and Brayton, C.F. 2013. The laboratory mouse. Second edition. New York, NY: CRC Press.
    5. Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.

    1 尾タトゥー

    テール入れ墨は動物を処理することなく簡単に読み取られます。

    Figure 1
    図 1。成体マウスに尾入れ墨

    1. メーカーによればタトゥー用品の準備 ' の指示。少量のインクが必要です。アルビノ マウスやラット、有色マウスまたはラットの緑色の染料黒の染料を使用必要があります
    2. 識別のために動物を準備します
      。 注: 不安や苦痛を最小限に抑えるテール入れ墨行わなければならない動物の団地ではなく処置室で。
      1. 、動きは最小限の入れ墨のための動物を適切に抑制します
      2. 幼ラットが唇のタトゥー プラットフォームと切り込みを通って延びる尾のボルトの下に保護されたカップのプラスチック切欠きのカップを使用して抑制される
      3. カップ落による成体を抑制できる、プラットフォームやその他のデバイスを介して場所で開催されたオープニングとカップのフランジからピンと張ったプルの尾を持つ
      4. 希薄組織クリーナーの少量を綿棒で尻尾をきれい。ラットの一般にスケールおよび入れ墨を適用する前に洗浄する必要があります尾の残骸の蓄積があります。尾の石鹸と水スクラブは汚れやゴミの大部分を削除します。先に進む前によく尻尾を乾燥します
      5. 入れ墨の直前に綿棒で皮膚に適用組織オイル。ティッシュ オイル皮膚を軟化し、入れ墨針を潤滑して組織の損傷を最小限に抑える必要があります。さらに、油洗浄のプロセスが削除していない任意の汚れを分解してインクが nontattooed 肌の汚れることを
    3. 入れ墨を適用します。
      1. マシンのオフと顔料に針の先端を浸し
      2. 足のペダルによって活性化される銃でタトゥー サイトに針の先端をもたらすします
      3. は短い、一方向にストロークも。彼らは最小の角度と曲線 (可能な場合) のセグメントで構成されているので、このような方法では数字とアルファベットを入れ墨する必要があります
      4. 。 永久的な色素の針で真皮に十分に深く浸透
      5. 蒸着。活性化の針の音の変化は、深さを識別を助けることができる
      6. 色素の十分な堆積のため 90 o の角度で針を用いて皮膚にアプローチします
    4. 後タトゥー クリーンアップとケア
      1. しみ (拭かないでください) ペーパー タオルで余分な顔料の完成したタトゥー
      2. タトゥーや紙タオルで血液の存在を示しますタトゥーがあまりにも深く、作られた、したがって永住するそうです
      3. は、追加の顔料とタトゥーの文字の薄い領域を強化します。文字がない上に、すでに堆積顔料色素堆積並列で補強します
      4. マウスの 2 文字とラットのすべての 1 つの文字の色素の貯留層に針の先端を浸し、その他顔料を追加する
      5. 理由フェージング入れ墨にはタトゥーを余りにすぐに作られてあまりにも深く作られた皮膚に針の不適切な角度鈍いまたはフック針が使用されているタトゥーや入れ墨したあまりにも浅い色素が十分な量が含まれています
      6. タトゥー機器製造元によると使用後を徹底的に掃除 ' s 指示します

    2。つま先が新生児の入れ墨

    実験プロトコルはこれらの子犬が恒久的に識別することが重要となる日のいずれか早期新生児のジェノタイピングを要求できます。つま先の入れ墨の使用により耳のタグ付けまたは耳パンチに対して十分な大きさになるまでに識別される動物

    Figure 2
    図 2。新生児マウスを入れ墨の適切な拘束テクニック。『 ランセット 』 は、先端の緑色色素

    1. 抑制哺乳仔。
      1. カップ、ガーゼに手で新生児パッド。親指と選ばれたつま先または入れ墨のためのつま先を公開する人差し指のクルックの間足を配置します
      2. つま先がある離れて曲げからそれを防止する、それの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します
      3. 。 足を配置する場合、
      4. は足を overtwist ないか。拘束された子犬が小刻みに動く可能性がありますが、発声が必ずしも聞こえない
    2. 機器を準備します。
      1. 4.5 mm アキノキリンソウ動物ランセットを選択します
      2. 無孔の表面に緑のタトゥー ペーストの小さなスポットを配置; アルミ箔がうまく機能します
      3. タトゥー ペーストのランセットの先端のみをディップします
      4. ペーストのわずかな量を使用します
    3. 入れ墨を適用します。
      1. 識別コードによるとアキノキリンソウ ランセットで目的のつま先を突きます
      2. のマークを残して、皮膚に貼り付けを導入する皮膚を穿刺します
      3. 適切な浸透を保証するために同じ場所に 3 回を突きます
      4. 避けるため深くを突っつい、つま先出血; これにより、薄くタトゥー
    4. 後タトゥー クリーンアップとケア
      1. 優しく余分なペーストを削除する吸収ワイプ/タオルでスポットをしみ
      2. 足や体から余分なのりをきれいにしないでください
      3. そのケージに動物を返します
      4. 看護の仔が入れ墨をするとき、それはまたダムを入れ墨することをお勧めです。これは、タトゥーの過剰グルーミングにつながる可能性のある子犬に貼り付けに過剰反応してから彼女をできない場合があります
      5. 各くずの新しいランセットを使用します
      6. 入れ墨は、手順の後の日に検証すべき。ドットがかすかなまたは表示されていない場合は、タトゥーをやり直します。動物の寿命のため表示されます必要があります入れ墨の翌日はドットが表示されている場合

    3。つま先は、ラットやマウスの入れ墨

    新生児のくずを入れ墨, ときは、その母親も入れ墨される、彼女の子犬に貼り付けがない彼女に外国をお勧めします。

    1. 動物の拘束。
      1. プラスチック円錐形または後部のフィートにアクセスできるプレキシ ガラス落を使用して動物を抑制します
      2. 拘束デバイスから足を延ばして
      3. 親指と選ばれたつま先または入れ墨のためのつま先を公開する人差し指の間の足の位置
      4. つま先がある離れて曲げからつま先を防ぐことそれの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します
      5. 。 足を配置する場合、
      6. は足を overtwist ないか。拘束された、大人が足を撤回しようとして可能性があります
    2. 機器を準備します。
      1. 5 mm アキノキリンソウ動物ランセットを選択します
      2. 無孔の表面に緑のタトゥー ペーストの小さなスポットを配置; アルミ箔がうまく機能します
      3. タトゥー ペーストのランセットの先端のみをディップします
      4. ペーストのわずかな量を使用します
    3. 入れ墨を適用します。
      1. 識別コードによるとアキノキリンソウ ランセットで目的のつま先を突きます
      2. のマークを残して、皮膚に貼り付けを導入する皮膚を穿刺します
      3. 適切な浸透を保証するために同じ場所に 3 回を突きます
      4. 避けるため深くを突っつい、つま先出血; これにより、薄くタトゥー
    4. 後タトゥー クリーンアップとケア
      1. 優しく余分なペーストを削除する吸収ワイプ/タオルの上のスポットをしみ
      2. 足や体から余分なのりをきれいにしないでください
      3. そのケージに動物を返します
      4. 各動物の新しいランセットを使用します
      5. 入れ墨は、手順の後の日に検証すべき。ドットがかすかなまたは表示されていない場合は、タトゥーをやり直します。動物の寿命のため表示されます必要があります入れ墨の翌日はドットが表示されている場合

    4. microchipping

    RFID チップの注入は動物を識別するために一般的に使用されるメソッドです。

    1. 、Applier にマイクロ チップを読み込むまたはプリロードされた注射器を選択します
    2. 肩に皮膚の把握ができるプレキシ ガラス拘束チューブを用いた動物を抑制します
    3. ポケット、皮膚をテントします
    4. ベベルと背骨に平行、皮膚を通して針を置き、尾に向かってそれを指示します
    5. マイクロ チップを皮下にイジェクトします
    6. 針を撤回し、注射の時点で閉じた皮をつまみます。これは皮膚から針を次の中からマイクロ チップを防ぎます。任意の皮膚の出血の止血を提供するために圧力を適用する続行します
    7. 拘束デバイスから動物を削除し、識別コードを確認するチップをスキャンします

    Figure 3
    図 3。ラットにおけるマイクロ チップ配置

    5 マウスの一時的な id

    無毒染料や動物マーカーはマウスの一時的な識別するため使用できます。

  • 肩甲骨の間の領域、マーキング、便利に利用できるようなマウスを抑制する
    1. は、この地域で毛皮にマーカー、スポット、または染料の連勝を配置します。動物が毛づくろいしながらマーキングを削除するを防ぐためにこの領域が使用されます
    2. マーキングよりも数日間の唯一の識別子として使用する場合に定期的にチェックします
    3. テールは、短期間の使用もできます。動物が毛づくろいしながらそこからマークを削除可能性がありますただし、.

    6。ラットの一時的な id

      染料またはマーカーのアプリケーションのための区域、簡単に利用できるように、
    1. はラットを抑制します。いくつかのケースでストライプやドットのみが必要な場合動物抑制される必要はありませんが、自由にケージ内の移動を許可します
    2. 尾をつかんで押し識別を適用ながらピンと張ったマニュアル抑制は一般に行われます
    3. 気難しい動物用吸入麻酔薬を使用して一時的な固定を行うことができます
    4. マーキングよりも数日間の唯一の識別子としてこの方法を使用する場合に定期的にチェックします

    個々 の研究動物を識別する機能は科学的な記録とデータ収集の重要な側面です。目的の実験プロシージャに正しい件名を使用することにより、動物の区別します

    そこは、科学者が個々 の実験動物を識別するために使用いくつかの恒久的かつ一時的な方法です。このビデオでは我々 ' 説明メソッド大人の齧歯動物の尻尾, 新生児つま先と大人のつま先の入れ墨を含む。次に、我々 ' ll マイクロ チップ配置法にふれることを一般的にラット、非毒性の染料を利用した普遍的な一時的な同定法に続いて行われる

    これらの方法のためのプロトコルを掘り下げる前に ' s 評価の考慮事項、利点、およびそれぞれの方法の欠点。尾の入れ墨は、mri や動物の皮膚の潰瘍性皮膚炎を含む状態に遺伝的素因ものを含む実験など、多くの研究プロトコールで有益です。テール入れ墨の別の利点は、彼らは簡単に手動で動物を抑制することがなく視覚化

    特定の実験的プロトコルにはアザラシが恒久的に識別することが重要となる日のいずれか早く新生児の遺伝子型が必要です。つま先の入れ墨の耳のタグ付けまたは耳パンチに対して十分な大きさになるまでに識別されるそのような動物を使用します。過剰反応していると彼女の子犬を過度にグルーミングから彼女を防ぐために大人の母親同様つま先入れ墨を適用することをお勧め ' s の新しいタトゥー。このメソッドを使用していくつかの利点がありますが、欠点はプロシージャ必要スキル、実践、着実な手と特殊な装置であること

    考慮次の永久的な同定法がマイクロ チップです。マイクロ チップを植え付けることは比較的簡単なプロセスが、その有用性を制限するいくつかの要因があります。まず、これらのチップはお米の粒が大きい程度の大きさ、10-12 ゲージ マウス、ラットにメソッドが少なくてに対して大きすぎる注入用針を必要です。第二に、マイクロ チップは高価であり、したがって不適切な動物の多数を識別するため。最後に、マイクロ チップは、MRI を含む実験では使用できません。ただし、恒久的に識別する必要がありますユニークな遺伝と育成動物のような貴重な動物のグループ場合、マイクロ チップ使用できます

    最後のメソッド、我々 ' 説明は非毒性マーカーを使用して一時的な識別。非毒性マーカーは、着色の研究動物の毛皮のために作られています。このメソッドは、染料が目に見える数週間残ることができるが、少数の時間または日の動物を識別することを必要とする短期の研究に最適です。一部の研究者これらのマーカーと組み合わせて使用その他識別方法簡単にグループの特定の動物を発見する

    今では、背景を説明してみましょう ' テール入れ墨から始まる手順を学びましょう。ここでは、成体マウスの手順を実演しますが、離乳とラットの同じ適用できます

    。 動物に苦痛を与えないか不安を最小限に抑える

    動物の住宅地ではなく処置室で、尾の入れ墨を実行される必要があります。入れ墨を適用する前にプルの開口部からピンと張った尾を持つカップ落を使用してマウスを抑制します。カップのフランジは、特殊なガラスのプラットフォームを介して行われています。次に、きれい希薄組織の少量の尾に、綿棒にクリーナー。この手順は、スケールや破片のタトゥーに干渉する可能性のすべての蓄積を削除することが重要です。次に、別の綿棒で尾皮膚に組織油を適用します。これは、皮膚を軟化、入れ墨針の潤滑を提供することによって組織の損傷を最小限に抑えます。さらに、油汚れ洗浄プロセスでは削除されませんを溶解し、インク非入れ墨皮膚に染色を防ぐことができます。今、あなたは '、入れ墨を適用する準備ができました

    マシンがオフで中は、色素にランセットまたは皮下注射針、入れ墨の針の先端を浸し。次に、足のペダルを使用して、銃をアクティブ化、尻尾にタトゥー ツールを配置およびタトゥー サイトに針の先端をもたらします。90 ° の角度で針を用いて皮膚に近づくし、色素が沈着する完全にように真皮に深く十分に浸透します。活性の針の音の変化は、深さを見分けることができます。ように数字と文字を形成、1 つの方向でもストロークが短い。しようとします。se 最小曲線と入れ墨を適用するときの角度

    追加顔料を追加するのには、すべてのワンツー文字マウス用とラットのすべての 1 つの文字の色素の貯留層に針の先端を浸し。余分な色素を削除するペーパー タオルで完成したタトゥーを消します。タトゥーや紙タオルで血液の存在は、タトゥー深すぎる作られた従って永久的であるようであることを示します。針をしない上に、既に沈殿させた顔料に、平行に置くことによって追加色素薄い文字を強化します。各使用後タトゥー機器を徹底的にきれいにし、病気の感染を防ぐためにケージの間新しいまたは滅菌針とインクの新鮮な供給を使用します

    次、新生児と成人につま先の入れ墨を適用する方法を学びます。ここでは、マウスの手順を実演しますが、同じ手順は、ラットの適用

    新生児は彼らのつま先に入れ墨されて、tailbones は骨化しないと尾の長さが小さすぎます。また、尻尾が大きくなると、皮膚に延伸することし、歪んだ、かすかな、そして読み取り不可能な数字になります。アルミ箔など非多孔質表面に緑色タトゥー ペーストのスポットを置くことによって開始します。次に、ガーゼのパッドを使用してあなたの手で離乳前の子犬をカップします。あなたの親指と入れ墨の選ばれた爪先を公開する人差し指のクルックの間足を配置します。選択したつま先がある離れて曲げを防ぐためにそれの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します

    今、タトゥー ペースト 4.5 mm ランセットの先端に軽く浸します。その後、事前に決められたコードに従って必要なつま先を突きます。適切な浸透するように、同じ場所を 3 回突きます。ペーストに、マークを残すように十分皮膚に浸透が深く突きをつま先出血を避けます。優しく任意の余分なタトゥーのペーストを削除するガーゼの新しいタトゥーのしみ、そのケージに動物を戻ります。次のゴミの新しいランセットを使用します。手順の後の 1 日は入れ墨が表示されていることを確認します

    看護の仔が入れ墨をするとき、それはまたダムを入れ墨することをお勧めです。これは過剰反応と彼女の子犬を過度にグルーミングから彼女を防ぐことができます ' s 入れ墨。つま先の入れ墨を大人に適用するには、もう一度、そもそも緑タトゥー ペーストの小さなスポット アルミ箔に。その後、プラスチック製のコーンまたは後部のフィートにアクセスできるプレキシ ガラス落を使用して動物を抑制します。拘束デバイスから足を拡張し、親指と人差し指入れ墨の選ばれた爪先を公開するための詐欺師の間の足の位置します

    は今、タトゥー ペースト 5 mm ランセットの先端を浸しなさい。前に、つつくと適切な溶込みを確保するため、少なくとも 3 回必要なつま先の皮膚に穴を開けるで入れ墨を適用します。次に、慎重に任意の余分なペーストを削除するタトゥーを消す、そのケージに動物を返します。新生児期とタトゥーのプロシージャの後の 1 日を確認します。それを動物のために表示したまま刺青の翌日は、マークが表示されている場合 ' s 寿命。前述したタトゥーをやり直すかすかなまたは見えない場合

    次の同定法、我々 ' 説明齧歯動物にマイクロ チップを植え付けることを含みます。実験動物の分類のために一般的に使用されるチップは、無線周波数識別、または RFID チップです。通常、チップは、針、applier に配置することでプリロードされます。チップ挿入、肩に皮膚をまだ把握できるかどうかを確かめる動物を抑制するのにプレキシ ガラス チューブを使用します。まず、テントのポケットを作成する肌。皮膚を通して針を入れ、背骨に平行、テールに向けて斜角。皮下にマイクロ チップを取り出し、針を撤回します。皮膚の針を次の中からチップを防ぐために注射部位の閉鎖皮をつまみます。引き続き任意の皮膚の出血の止血を提供するために圧力を適用します。拘束デバイスから動物を削除し、識別コードを確認する製造によって提供されるリーダーを使用してチップをスキャンします

    最後に、聞かせて ' 一時的な色素を同定のための齧歯動物に適用する方法を学びましょう。聞かせて ' マウスから始めましょう。まず、肩甲骨の間の領域がアクセスできるように、動物を抑制します。身体のこの部分は、セルフ グルーミングから安全です。この地域で毛皮にスポットまたは染料の連勝を配置し、そのケージに動物の背部を配置

    、ラットの尾をつかんでそれをピンと張った保持して手動で動物を抑制します。これにより、染料のアプリケーションのための領域は、頭部、肩、臀部にある可能性があります簡単にアクセス可能です。毛皮にスポットまたは染料の連勝を配置します。時々、動物を拘束せずに無毒染料を適用することが可能です。も数日間、唯一の識別子としてそれらを使用している場合は特に、定期的にこれらの動物のマークをチェックします

    今、これらの異なる識別方法の手順については、' s は、どのように科学者を使用しているそれら異なる研究で今日参照してください

    齧歯動物行動実験での使用はかなり一般的です。ここでは、研究者は、完全に動物をマークする、入れ墨と人工的につくられたホーム ケージ環境で数日間観察し、尾を使用しました。データは 10 日間ポスト手術期間動作、移動距離のようなコントロールと実験動物の間で明らかに違いを収集します

    別の行動実験で調査官はつま先が新生児の入れ墨を実行し、レコードの超音波発声する特殊なマイクで録音ボックスにそれらを配置します。この実験の目的は呼び出しの違いを見て、レート、つまり野生型および Shank2 欠損マウスで毎分発声数自閉症以上 12 日新生児期および成体のフードのモデル

    最後に、前述したように、非毒性染料を用いる短期間の実験のために動物をマークする効率的な方法です。ここでは、科学者たちは、血漿タンパク質の一過性発現に興味があった。彼らは一時的なマーカーで動物をマーク、プラスミド DNA を静脈内に注入、血液サンプル 2 日間西部のしみを用いたタンパク質の発現を決定する後収集します

    あなた ' ve を見たゼウス ' s 導入、入れ墨、マイクロ チップの配置、および実験室のマウスおよびラットの一時的な識別方法。動物の個体識別は、研究の記録管理の主要なコンポーネントです。したがって、適切な手法を選択すると、多くの要因を審議する必要があります。これには、動物に不快感のレベル、技術、実験的ニーズと最後にメソッドに関連付けられているコストの使いやすさが含まれます。いつも、見てくれてありがとうとして!

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