齧歯動物識別 II

Lab Animal Research

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Overview

ソース: ケイ ・ スチュワート、RLATG、RVT CMAR;ヴァレリー A. シュレーダー、RVT、RLATG。ノートルダムのノートルダム大学

動物のレコードは、データ収集が正しいことを確認する正確に維持されなければなりません。すべてそれぞれの動物に関連する情報の詳細なデータベースを持っていることにケージのカードの情報を保持するレコードの範囲。記録管理の主要なコンポーネントは、研究動物の個々 の id です。マウスおよびラットの識別に適したさまざまな方法があります。このビデオは入れ墨、マイクロ チップの配置、および一時的な識別方法の手続きのテクニックについて説明します、また、それぞれの利点を探ります。

Cite this Video

JoVE Science Education Database. ラボ動物研究の必需品. 齧歯動物識別 II. JoVE, Cambridge, MA, (2018).

Principles

尾の入れ墨の使用は、多くの研究プロトコールで有益です。テール入れ墨は MRI マシンのイメージを作成するある動物または潰瘍性皮膚炎は遺伝的傾向があるに最適です。それを抑えることがなく、ケージに動物を簡単に尻尾タトゥーは簡単に可視化します。ただし、この方法で必要スキル、実践、そして着実に手;特殊な器具も必要です。1

実験プロトコルは、新生児のジェノタイピングを一日も早く必要があります。その結果、これらの子犬を永続的に識別することは不可欠です。若い身空で耳の耳介、耳にタグを挿入するのには十分開発されないと耳の穿孔器はそれらをまだ使用できません。過去には、新生児を識別するためにつま先の削除コードを使用する研究者のために共通だった。しかし、これは若い動物とダムの両方にストレスだった、こうして非人道的と考えられています。2のつま先の入れ墨を使用できます、動物耳付けや耳パンチに対して十分な大きさになるまで永続的に識別することです。3

マイクロ チップの注入のプロセスは比較的簡単ですが、マウスで同定の有用性を制限するいくつかの要因があります。滅菌マイクロ チップ、ご飯の粒が大きいのサイズ 10 に 12 ゲージ配信用の針を必要とされます。したがって、彼らが非常に大きいマウスです。マウスの寿命は短く、動物の数は通常広汎なよう、マイクロ チップの読取装置コストは法外なできます。MRI マシンのイメージを作成する運命にある動物は、それらのインプラントを持つことはできません。ただし、恒久的に識別する必要があります貴重な動物のグループは、マイクロ チップが使用できます。4

数時間、または数日の特定の動物を必要とする急性の研究は恒久的な身分証明書の使用を必要としません。毒性マーカーは、動物の毛皮を着色のために特別に作られています、いくつかの色で利用可能です。これらのマーカーの染料は数週間目に見える残ることが。マーカー他の方法で [グループに特定の動物を簡単にスポットを組み合わせても使用できます。

Procedure

1 尾のタトゥー

尾の入れ墨は、動物の処理を必要とせず簡単に読み取られます。

Figure 1
図 1。成体マウスの入れ墨を尾します。

  1. 製造元の指示に従ってタトゥー用品を準備します。少量のインクが必要です。黒の染料はアルビノ マウスやラット、有色マウスまたはラットの緑色の染料のために使わなければなりません。
  2. 識別のために動物を準備します。
    注: 不安や苦痛を最小限に抑えるテール入れ墨行わなければならない動物の団地ではなく処置室で。
    1. 動きは最小限、入れ墨のための動物を適切に抑制します。
    2. 幼ラットが唇のタトゥー プラットフォームと切り込みを通って延びる尾のボルトの下に保護されたカップのプラスチック切欠きのカップを使用して拘束されます。
    3. 成体は、引っ張った開閉プラットフォームやその他のデバイスを介して行われてカップのフランジからピンと張った尾を持つカップ落による拘束できます。
    4. きれいに、綿棒で適用される希薄組織クリーナーの少量の尾。ラットの一般にスケールおよび入れ墨を適用する前に洗浄する必要があります尾の残骸の蓄積があります。尾の石鹸と水スクラブは汚れやゴミの大部分を削除します。先に進む前によく尻尾を乾燥させます。
    5. 入れ墨の直前に綿棒で皮膚に、組織に注油します。ティッシュ オイル皮膚を軟化し、入れ墨針を潤滑して組織の損傷を最小限に抑える必要があります。さらに、油は洗浄のプロセスが削除していない任意の汚れを溶解し、インク nontattooed 皮膚の汚れることを防ぐ。
  3. 入れ墨を適用します。
    1. マシンの電源と顔料に針の先端を浸し。
    2. フットペダルによって活性化される銃でタトゥー サイトに針の先端をもたらします。
    3. 短くも一方向にストロークします。数字とアルファベットはそのような方法で入れ墨必要があります彼らは最小の角度と曲線 (可能な場合) のセグメントで構成されています。
    4. 永久的な色素沈着を針で真皮に深く十分に浸透します。活性化の針の音の変化は、深さを見分けることができます。
    5. 色素の十分な堆積のため 90oの角度で針を用いて皮膚に近づきます。
  4. 後タトゥー クリーンアップとケア
    1. しみ (拭かないでください) ペーパー タオルで余分な顔料の完成したタトゥー。
    2. タトゥーや紙タオルで血液の存在は、タトゥー深すぎる作られた従って永久的であるようであることを示します。
    3. その他の顔料とタトゥーの文字の薄い領域を強化します。文字は顔料が堆積した平行がない上に、すでに作製した色素で補強します。
    4. その他顔料を追加、マウスの 2 文字とラットのすべての 1 つの文字の色素の貯留層に針の先端を浸し。
    5. フェージングの入れ墨の顔料、作られたあまりにも浅い入れ墨、入れ墨したあまりにも深く、肌に針の不適切な角度鈍いまたはフック針が使用されているまたは余りにすぐに作られてタトゥーの不十分な量があります。
    6. 製造元の指示に従って各使用後タトゥー機器を徹底的に掃除します。

2. 新生児の入れ墨をつま先

実験プロトコルはこれらの子犬が恒久的に識別することが重要となる日のいずれか早期新生児のジェノタイピングを要求できます。つま先の入れ墨の耳のタグ付けまたは耳パンチに対して十分な大きさになるまでに識別される動物を使用します。

Figure 2
図 2。新生児マウスを入れ墨の適切な拘束テクニック。『 ランセット 』 は、先端の緑色の染料です。

  1. 哺乳仔を抑制します。
    1. ガーゼのパッドに手で新生児をカップします。親指と選ばれたつま先または入れ墨のためのつま先を公開する人差し指の間の足を位置します。
    2. つま先がある離れて曲げからそれを防止する、それの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します。
    3. 足を配置する場合、脚を overtwist ないか。拘束された子犬が小刻みに動く可能性がありますが、発声が必ずしも聞こえない。
  2. 機器を準備します。
    1. 4.5 mm アキノキリンソウ動物ランセットを選択します。
    2. 場所緑のタトゥーの小さなスポット貼り付け無孔の表面;アルミ箔に適しています。
    3. タトゥー ペーストのランセットの先端のみを浸しなさい。
    4. ペーストのわずかな量を使用します。
  3. 入れ墨を適用します。
    1. 識別コードによるとアキノキリンソウ ランセットで目的のつま先を突きます。
    2. マークを残して、皮膚に貼り付けを導入する皮膚を穿刺します。
    3. 適切な浸透を保証するために、同じ場所に 3 回を突きます。
    4. 深く突きするつま先出血; を避けるため暗い入れ墨の可能性があります。
  4. 後タトゥー クリーンアップとケア
    1. 優しく余分なペーストを削除する吸収ワイプ/タオルでスポットをしみ。
    2. 足や体から余分なのりをきれいにしないでください。
    3. 動物を檻に戻ります。
    4. ときに看護の仔が入れ墨されて、またダムを入れ墨することをお勧めします。これはタトゥーの過剰グルーミングにつながる可能性のある子犬に貼り付けに過剰反応してから彼女をできない場合があります。
    5. 各くずの新しいランセットを使用します。
    6. 入れ墨は、手順の後の日に検証すべき。ドットがかすかなまたは表示されていない場合は、タトゥーをやり直します。刺青の翌日はドットが表示されている場合、動物の寿命のため表示する必要がありますされます。

3. つま先は、ラットやマウスの入れ墨

新生児のくずは入れ墨、母親も入れ墨される彼女の子犬に貼り付けは彼女に外国ではない、それが提示されます。

  1. 動物の拘束。
    1. プラスチック製のコーンまたは後部のフィートにアクセスできるプレキシ ガラス落を使用して動物を抑制します。
    2. 拘束デバイスから足を延ばしてください。
    3. 親指と選ばれたつま先または入れ墨のためのつま先を公開する人差し指の間の足を位置します。
    4. つま先がある離れて曲げからつま先を防ぐことそれの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します。
    5. 足を配置する場合、脚を overtwist ないか。
拘束された、大人が足を撤回しようとしています。
  • 機器を準備します。
    1. 5 mm アキノキリンソウ動物ランセットを選択します。
    2. 場所緑のタトゥーの小さなスポット貼り付け無孔の表面;アルミ箔に適しています。
    3. タトゥー ペーストのランセットの先端のみを浸しなさい。
    4. ペーストのわずかな量を使用します。
  • 入れ墨を適用します。
    1. 識別コードによるとアキノキリンソウ ランセットで目的のつま先を突きます。
    2. マークを残して、皮膚に貼り付けを導入する皮膚を穿刺します。
    3. 適切な浸透を保証するために、同じ場所に 3 回を突きます。
    4. 深く突きするつま先出血; を避けるため暗い入れ墨の可能性があります。
  • 後タトゥー クリーンアップとケア
    1. 優しく余分なペーストを削除する吸収ワイプ/タオルの上のスポットをしみ。
    2. 足や体から余分なのりをきれいにしないでください。
    3. 動物を檻に戻ります。
    4. それぞれの動物の新しいランセットを使用します。
    5. 入れ墨は、手順の後の日に検証すべき。ドットがかすかなまたは表示されていない場合は、タトゥーをやり直します。刺青の翌日はドットが表示されている場合、動物の寿命のため表示する必要がありますされます。
  • 4. マイクロ チップ

    RFID チップの注入は、動物を識別するために一般的に使用されるメソッドです。

    1. マイクロ チップを読み込む、適用元またはプリロードされた注射器を選択します。
    2. 肩の上の皮膚の把握ができるプレキシ ガラス拘束チューブを用いた動物を抑制します。
    3. テント皮膚、ポケットを作成します。
    4. ベベルと背骨に平行、皮膚を通して針を置き、尾に向かってそれを指示しました。
    5. 皮下にマイクロ チップを取り出します。
    6. 針を撤回し、注射の時点で閉じた皮をつまみます。これは皮膚から針を次の中からマイクロ チップを防ぎます。引き続き任意の皮膚の出血の止血を提供するために圧力を適用します。
    7. 拘束デバイスから動物を削除し、識別コードを確認するチップをスキャンします。

    Figure 3
    図 3。ラットにおけるマイクロ チップの配置。

    5 マウスの一時的な id

    無害染料と動物マーカーは、マウスの一時的な識別に使用できます。

    1. 肩甲骨の間の領域、標示の毛皮の上で利用できるようなマウスを抑制します。
    2. この地域で毛皮にマーカー、スポット、または染料の連勝を配置します。この地域は、動物が毛づくろいしながらマーキングを削除するを防ぐために使用されます。
    3. 数日以上の唯一の識別子としてそれを使用している場合定期的にマーキングを確認します。
    4. 尾は、短期間の使用もできます。ただし、動物は毛づくろい中それからマークを削除可能性があります。

    6 ラット用一時的な識別

    1. 染料またはマーカーのアプリケーションのための区域、簡単に利用できるようにラットを抑制します。いくつかのケースでストライプやドットのみが必要な動物に制止される必要はありませんが檻の中を自由に移動できるが。
    2. 尻尾をつかんで押し識別を適用ながらピンと張ったマニュアル抑制が通常行われます。
    3. 気難しい動物用吸入麻酔薬を使用して一時的な固定を行うことができます。
    4. 数日以上の唯一の識別子としてこのメソッドを使用する場合定期的にマーキングを確認します。

    個々 の研究動物を識別する能力は、科学的な記録とデータ収集の重要な側面です。動物との間を区別する目的の実験プロシージャの正しいサブジェクトが使用されることを保証します。

    科学者は、個々 の実験動物を識別するために使用いくつかの恒久的かつ一時的な方法があります。このビデオでは、大人の齧歯動物の尻尾, 新生児つま先と大人のつま先の入れ墨を含む方法について説明します。次に、私達は一般にラット、非毒性の染料を利用した普遍的な一時的な同定法に続いて行われるマイクロ チップ配置手法に触れます。

    これらの方法のためのプロトコルを掘り下げる前に注意点、利点、およびそれぞれの方法の欠点を確認してみましょう。尾の入れ墨は、mri や動物の皮膚の潰瘍性皮膚炎を含む状態に遺伝的素因ものを含む実験など、多くの研究プロトコールで有益です。テール入れ墨の別の利点は、手動で動物を抑制することがなく簡単と可視化したことです。

    特定の実験的プロトコルにはアザラシが恒久的に識別することが重要となる日のいずれか早く新生児の遺伝子型が必要です。つま先の入れ墨の耳のタグ付けまたは耳パンチに対して十分な大きさになるまでに識別されるそのような動物を使用します。過剰反応していると彼女の子犬の新しいタトゥーを過度にグルーミングから彼女を防ぐために大人の母親同様つま先入れ墨を適用することをお勧めします。このメソッドを使用していくつかの利点がありますが、欠点は、プロシージャがスキル、実践、着実な手と特殊な機器を必要とすることです。

    検討次の永久的な同定法は、マイクロ チップです。マイクロ チップを植え付けることは比較的簡単なプロセスが、その有用性を制限するいくつかの要因があります。まず、これらのチップはお米の粒が大きい程度の大きさ、10-12 ゲージ マウス、ラットにメソッドが少なくてに対して大きすぎる注入用針を必要です。第二に、マイクロ チップは高価であり、したがって不適切な動物の多数を識別するため。最後に、マイクロ チップは、MRI を含む実験では使用できません。ただし、恒久的に識別する必要がありますユニークな遺伝と育成動物のような貴重な動物のグループは、マイクロ チップが使用できます。

    説明します最後のメソッドは、非毒性マーカーを使用して一時的な id です。非毒性マーカーは、着色の研究動物の毛皮のために作られています。このメソッドは、染料が目に見える数週間残ることができるが、少数の時間または日の動物を識別することを必要とする短期の研究に最適です。一部の研究者これらのマーカーと組み合わせて使用その他識別方法簡単にグループの特定の動物を発見します。

    我々 は、背景を議論して、尾の入れ墨から始まる手順を学びましょう。

    ここでは、成体マウスの手順を実演しますが、同じ幼ラットに適用できます。

    動物に苦痛を与えないか不安を最小限に抑えるためテール入れ墨行わなければならない動物の住宅地ではなく処置室で。入れ墨を適用する前にプルの開口部からピンと張った尾を持つカップ落を使用してマウスを抑制します。カップのフランジは、特殊なガラスのプラットフォームを介して行われています。次に、きれい希薄組織の少量の尾に、綿棒にクリーナー。この手順は、スケールや破片のタトゥーに干渉する可能性のすべての蓄積を削除することが重要です。次に、別の綿棒で尾皮膚に組織油を適用します。これは、皮膚を軟化、入れ墨針の潤滑を提供することによって組織の損傷を最小限に抑えます。さらに、油汚れ洗浄プロセスでは削除されませんを溶解し、インク非入れ墨皮膚に染色を防ぐことができます。入れ墨を適用する準備が整いました。

    マシンがオフで中がランセットか皮下注射針、入れ墨の針の先端を顔料に軽く浸します。次に、足のペダルを使用して、銃をアクティブ化、尻尾にタトゥー ツールを配置およびタトゥー サイトに針の先端をもたらします。90 ° の角度で針を用いて皮膚に近づくし、色素が沈着する完全にように真皮に深く十分に浸透します。活性の針の音の変化は、深さを見分けることができます。ように数字と文字を形成、1 つの方向でもストロークが短い。入れ墨を適用するときに、最小曲線と角度を使用してください。

    その他顔料を追加するには、すべてのワンツー文字マウス用とラットのすべての 1 つの文字の色素の貯留層に針の先端を浸し。余分な色素を削除するペーパー タオルで完成したタトゥーを消します。タトゥーや紙タオルで血液の存在は、タトゥー深すぎる作られた従って永久的であるようであることを示します。針をしない上に、既に沈殿させた顔料に、平行に置くことによって追加色素薄い文字を強化します。各使用後タトゥー機器を徹底的に掃除、病気の感染を防ぐためにケージの間新しいまたは滅菌針とインクの新鮮な供給を使用します。

    次に、新生児と成人につま先の入れ墨を適用する方法を学習します。ここでは、マウスの手順を実演しますが、同じ手順は、ラットの適用。

    新生児は彼らのつま先に入れ墨を tailbones は骨化しないと尾の長さが小さすぎます。また、尻尾が大きくなると、皮膚に延伸することし、歪んだ、かすかな、そして読み取り不可能な数字になります。アルミ箔など非多孔質表面に緑色タトゥー ペーストのスポットを置くことによって開始します。次に、ガーゼのパッドを使用してあなたの手で離乳前の子犬をカップします。あなたの親指と入れ墨の選ばれた爪先を公開する人差し指のクルックの間足を配置します。選択したつま先がある離れて曲げを防ぐためにそれの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します。

    今、タトゥー ペースト状に 4.5 mm のランセットの先端を浸します。その後、事前に決められたコードに従って必要なつま先を突きます。適切な浸透するように、同じ場所を 3 回突きます。ペーストに、マークを残すように十分皮膚に浸透が深く突きをつま先出血を避けます。優しく任意の余分なタトゥーのペーストを削除するガーゼの新しいタトゥーのしみ、そのケージに動物を戻ります。次のゴミの新しいランセットを使用します。手順の後の 1 日は、入れ墨が表示されることを確認します。

    ときに看護の仔が入れ墨されて、またダムを入れ墨することをお勧めします。これは過剰反応と彼女の子犬の入れ墨を過度にグルーミングから彼女を防ぐことができます。つま先の入れ墨を大人に適用するには、もう一度、そもそも緑タトゥー ペーストの小さなスポット アルミ箔に。その後、プラスチック製のコーンまたは後部のフィートにアクセスできるプレキシ ガラス落を使用して動物を抑制します。拘束デバイスから足を延ばして、親指と入れ墨の選ばれた爪先を公開する人差し指のクルックの間足を配置します。

    今、タトゥー ペースト 5 mm ランセットの先端を浸しなさい。前に、つつくと適切な溶込みを確保するため、少なくとも 3 回必要なつま先の皮膚に穴を開けるで入れ墨を適用します。次に、慎重に任意の余分なペーストを削除するタトゥーを消す、そのケージに動物を返します。新生児期とタトゥーのプロシージャの後の 1 日を確認します。刺青の翌日は、マークが表示されている場合それを表示したまま動物の寿命のため。かすかなまたは表示されていない場合、前述したタトゥーをやり直します。

    説明します次の同定方法を含む齧歯動物にマイクロ チップを埋め込みます。実験動物の分類のために一般的に使用されるチップは、無線周波数識別、または RFID チップです。通常、チップは、針、applier に配置することでプリロードされます。チップ挿入、肩に皮膚をまだ把握できるかどうかを確かめる動物を抑制するのにプレキシ ガラス チューブを使用します。まず、テントのポケットを作成する肌。皮膚を通して針を入れ、背骨に平行、テールに向けて斜角。皮下にマイクロ チップを取り出し、針を撤回します。皮膚の針を次の中からチップを防ぐために注射部位の閉鎖皮をつまみます。引き続き任意の皮膚の出血の止血を提供するために圧力を適用します。拘束デバイスから動物を削除し、識別コードを確認する製造によって提供されるリーダーを使用してチップをスキャンします。

    最後に、一時的な色素を同定のための齧歯動物に適用する方法を学びましょう。マウスを始めましょう。まず、肩甲骨の間の領域がアクセスできるように、動物を抑制します。身体のこの部分は、セルフ グルーミングから安全です。スポットまたは染料の連勝をこの地域で毛皮に、そのケージに動物の背部を置きます。

    、ラットの尾をつかんでそれをピンと張った保持動物を手動で抑制します。これにより、染料のアプリケーションのための領域は、頭部、肩、臀部にある可能性があります簡単にアクセス可能です。毛皮にスポットまたは染料の連勝を配置します。時々、動物を拘束せずに無毒染料を適用することが可能です。以上、数日間唯一の識別子としてそれらを使用している場合は特に、定期的にこれらの動物のマーキングを確認します。

    これらの異なる識別方法の手順については、どのように科学者を使用しているそれら異なる研究で今日を見てみましょう。

    齧歯動物行動実験での使用はかなり一般的です。

    ここでは、研究者は、完全に動物をマークする、入れ墨と人工的につくられたホーム ケージ環境で数日間観察し、尾を使用しました。データ収集コントロールと実験動物の間、10 日間ポスト手術期間移動距離などの動作で明らかに違いです。

    別の動作実験で調査官はつま先が新生児の入れ墨を実行し、レコードの超音波発声する特殊なマイクで録音ボックスにそれらを配置しました。この実験の目的は呼び出しの違いを見て、レート、つまり野生型およびShank2欠損マウスで毎分発声数自閉症以上 12 日新生児期および成体のフードのモデル。

    最後に、前述したように、非毒性の染料の使用は短期間の実験のために動物をマークする効率的な方法です。ここでは、科学者たちは、血漿タンパク質の一過性発現に興味があった。だから一時的なマーカーで動物をマーク、プラスミド DNA を静脈内に注入され、収集血液サンプル 2 日後で西部のしみを用いたタンパク質の発現を決定します。

    ゼウスの導入を見てきただけに入れ墨、マイクロ チップの配置、および実験室のマウスおよびラットの一時的な識別方法。動物の個体識別は、研究の記録管理の主要なコンポーネントです。したがって、適切な手法を選択すると、多くの要因を審議する必要があります。これには、動物に不快感のレベル、技術、実験的ニーズと最後にメソッドに関連付けられているコストの使いやすさが含まれます。いつも見てくれてありがとう!

    Summary

    適切な識別方法を選択するときは、多くの要因を審議する必要があります。各テクニックは、長所と短所が実験のニーズに関連して考慮する必要があります。コストは、他の要因と共に検討する必要があります、技術の使いやすさと、動物に不快感のレベルには、主要な考慮事項が必要があります。4, 5

    References

    1. Robinson, V., Morton, D.B., Anderson, D., Carver, J.F.A., Francis, R.J., Hubrecht, R., Jenkins, E., Mathers, K.E., Raymond, R., Rosewell, I., Wallace, J., and Wells, D.J. 2003. Refinement and reduction in production of genetically modified mice. Laboratory Animals. 37:S1-S50.
    2. Schaefer, D.C., Asner, I.N., Seifert, B., Bürki, K., and Cinelli, P. 2010. Analysis of physiological and behavioural parameters in mice after toe clipping as newborns. Laboratory Animals. 44:7-13
    3. Castelhano-Carlos, M.J., Sousa, N., Ohl, F., and Baumans, V. 2010. Identification methods in newborn C57BL/6 mice: a developmental and behavioural evaluation. Laboratory Animals. 44: 88-103.
    4. Danneman, P.J., Suckow, M.A., and Brayton, C.F. 2013. The laboratory mouse. Second edition. New York, NY: CRC Press.
    5. Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.

    1 尾のタトゥー

    尾の入れ墨は、動物の処理を必要とせず簡単に読み取られます。

    Figure 1
    図 1。成体マウスの入れ墨を尾します。

    1. 製造元の指示に従ってタトゥー用品を準備します。少量のインクが必要です。黒の染料はアルビノ マウスやラット、有色マウスまたはラットの緑色の染料のために使わなければなりません。
    2. 識別のために動物を準備します。
      注: 不安や苦痛を最小限に抑えるテール入れ墨行わなければならない動物の団地ではなく処置室で。
      1. 動きは最小限、入れ墨のための動物を適切に抑制します。
      2. 幼ラットが唇のタトゥー プラットフォームと切り込みを通って延びる尾のボルトの下に保護されたカップのプラスチック切欠きのカップを使用して拘束されます。
      3. 成体は、引っ張った開閉プラットフォームやその他のデバイスを介して行われてカップのフランジからピンと張った尾を持つカップ落による拘束できます。
      4. きれいに、綿棒で適用される希薄組織クリーナーの少量の尾。ラットの一般にスケールおよび入れ墨を適用する前に洗浄する必要があります尾の残骸の蓄積があります。尾の石鹸と水スクラブは汚れやゴミの大部分を削除します。先に進む前によく尻尾を乾燥させます。
      5. 入れ墨の直前に綿棒で皮膚に、組織に注油します。ティッシュ オイル皮膚を軟化し、入れ墨針を潤滑して組織の損傷を最小限に抑える必要があります。さらに、油は洗浄のプロセスが削除していない任意の汚れを溶解し、インク nontattooed 皮膚の汚れることを防ぐ。
    3. 入れ墨を適用します。
      1. マシンの電源と顔料に針の先端を浸し。
      2. フットペダルによって活性化される銃でタトゥー サイトに針の先端をもたらします。
      3. 短くも一方向にストロークします。数字とアルファベットはそのような方法で入れ墨必要があります彼らは最小の角度と曲線 (可能な場合) のセグメントで構成されています。
      4. 永久的な色素沈着を針で真皮に深く十分に浸透します。活性化の針の音の変化は、深さを見分けることができます。
      5. 色素の十分な堆積のため 90oの角度で針を用いて皮膚に近づきます。
    4. 後タトゥー クリーンアップとケア
      1. しみ (拭かないでください) ペーパー タオルで余分な顔料の完成したタトゥー。
      2. タトゥーや紙タオルで血液の存在は、タトゥー深すぎる作られた従って永久的であるようであることを示します。
      3. その他の顔料とタトゥーの文字の薄い領域を強化します。文字は顔料が堆積した平行がない上に、すでに作製した色素で補強します。
      4. その他顔料を追加、マウスの 2 文字とラットのすべての 1 つの文字の色素の貯留層に針の先端を浸し。
      5. フェージングの入れ墨の顔料、作られたあまりにも浅い入れ墨、入れ墨したあまりにも深く、肌に針の不適切な角度鈍いまたはフック針が使用されているまたは余りにすぐに作られてタトゥーの不十分な量があります。
      6. 製造元の指示に従って各使用後タトゥー機器を徹底的に掃除します。

    2. 新生児の入れ墨をつま先

    実験プロトコルはこれらの子犬が恒久的に識別することが重要となる日のいずれか早期新生児のジェノタイピングを要求できます。つま先の入れ墨の耳のタグ付けまたは耳パンチに対して十分な大きさになるまでに識別される動物を使用します。

    Figure 2
    図 2。新生児マウスを入れ墨の適切な拘束テクニック。『 ランセット 』 は、先端の緑色の染料です。

    1. 哺乳仔を抑制します。
      1. ガーゼのパッドに手で新生児をカップします。親指と選ばれたつま先または入れ墨のためのつま先を公開する人差し指の間の足を位置します。
      2. つま先がある離れて曲げからそれを防止する、それの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します。
      3. 足を配置する場合、脚を overtwist ないか。拘束された子犬が小刻みに動く可能性がありますが、発声が必ずしも聞こえない。
    2. 機器を準備します。
      1. 4.5 mm アキノキリンソウ動物ランセットを選択します。
      2. 場所緑のタトゥーの小さなスポット貼り付け無孔の表面;アルミ箔に適しています。
      3. タトゥー ペーストのランセットの先端のみを浸しなさい。
      4. ペーストのわずかな量を使用します。
    3. 入れ墨を適用します。
      1. 識別コードによるとアキノキリンソウ ランセットで目的のつま先を突きます。
      2. マークを残して、皮膚に貼り付けを導入する皮膚を穿刺します。
      3. 適切な浸透を保証するために、同じ場所に 3 回を突きます。
      4. 深く突きするつま先出血; を避けるため暗い入れ墨の可能性があります。
    4. 後タトゥー クリーンアップとケア
      1. 優しく余分なペーストを削除する吸収ワイプ/タオルでスポットをしみ。
      2. 足や体から余分なのりをきれいにしないでください。
      3. 動物を檻に戻ります。
      4. ときに看護の仔が入れ墨されて、またダムを入れ墨することをお勧めします。これはタトゥーの過剰グルーミングにつながる可能性のある子犬に貼り付けに過剰反応してから彼女をできない場合があります。
      5. 各くずの新しいランセットを使用します。
      6. 入れ墨は、手順の後の日に検証すべき。ドットがかすかなまたは表示されていない場合は、タトゥーをやり直します。刺青の翌日はドットが表示されている場合、動物の寿命のため表示する必要がありますされます。

    3. つま先は、ラットやマウスの入れ墨

    新生児のくずは入れ墨、母親も入れ墨される彼女の子犬に貼り付けは彼女に外国ではない、それが提示されます。

    1. 動物の拘束。
      1. プラスチック製のコーンまたは後部のフィートにアクセスできるプレキシ ガラス落を使用して動物を抑制します。
      2. 拘束デバイスから足を延ばしてください。
      3. 親指と選ばれたつま先または入れ墨のためのつま先を公開する人差し指の間の足を位置します。
      4. つま先がある離れて曲げからつま先を防ぐことそれの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します。
      5. 足を配置する場合、脚を overtwist ないか。
    拘束された、大人が足を撤回しようとしています。
  • 機器を準備します。
    1. 5 mm アキノキリンソウ動物ランセットを選択します。
    2. 場所緑のタトゥーの小さなスポット貼り付け無孔の表面;アルミ箔に適しています。
    3. タトゥー ペーストのランセットの先端のみを浸しなさい。
    4. ペーストのわずかな量を使用します。
  • 入れ墨を適用します。
    1. 識別コードによるとアキノキリンソウ ランセットで目的のつま先を突きます。
    2. マークを残して、皮膚に貼り付けを導入する皮膚を穿刺します。
    3. 適切な浸透を保証するために、同じ場所に 3 回を突きます。
    4. 深く突きするつま先出血; を避けるため暗い入れ墨の可能性があります。
  • 後タトゥー クリーンアップとケア
    1. 優しく余分なペーストを削除する吸収ワイプ/タオルの上のスポットをしみ。
    2. 足や体から余分なのりをきれいにしないでください。
    3. 動物を檻に戻ります。
    4. それぞれの動物の新しいランセットを使用します。
    5. 入れ墨は、手順の後の日に検証すべき。ドットがかすかなまたは表示されていない場合は、タトゥーをやり直します。刺青の翌日はドットが表示されている場合、動物の寿命のため表示する必要がありますされます。
  • 4. マイクロ チップ

    RFID チップの注入は、動物を識別するために一般的に使用されるメソッドです。

    1. マイクロ チップを読み込む、適用元またはプリロードされた注射器を選択します。
    2. 肩の上の皮膚の把握ができるプレキシ ガラス拘束チューブを用いた動物を抑制します。
    3. テント皮膚、ポケットを作成します。
    4. ベベルと背骨に平行、皮膚を通して針を置き、尾に向かってそれを指示しました。
    5. 皮下にマイクロ チップを取り出します。
    6. 針を撤回し、注射の時点で閉じた皮をつまみます。これは皮膚から針を次の中からマイクロ チップを防ぎます。引き続き任意の皮膚の出血の止血を提供するために圧力を適用します。
    7. 拘束デバイスから動物を削除し、識別コードを確認するチップをスキャンします。

    Figure 3
    図 3。ラットにおけるマイクロ チップの配置。

    5 マウスの一時的な id

    無害染料と動物マーカーは、マウスの一時的な識別に使用できます。

    1. 肩甲骨の間の領域、標示の毛皮の上で利用できるようなマウスを抑制します。
    2. この地域で毛皮にマーカー、スポット、または染料の連勝を配置します。この地域は、動物が毛づくろいしながらマーキングを削除するを防ぐために使用されます。
    3. 数日以上の唯一の識別子としてそれを使用している場合定期的にマーキングを確認します。
    4. 尾は、短期間の使用もできます。ただし、動物は毛づくろい中それからマークを削除可能性があります。

    6 ラット用一時的な識別

    1. 染料またはマーカーのアプリケーションのための区域、簡単に利用できるようにラットを抑制します。いくつかのケースでストライプやドットのみが必要な動物に制止される必要はありませんが檻の中を自由に移動できるが。
    2. 尻尾をつかんで押し識別を適用ながらピンと張ったマニュアル抑制が通常行われます。
    3. 気難しい動物用吸入麻酔薬を使用して一時的な固定を行うことができます。
    4. 数日以上の唯一の識別子としてこのメソッドを使用する場合定期的にマーキングを確認します。

    個々 の研究動物を識別する能力は、科学的な記録とデータ収集の重要な側面です。動物との間を区別する目的の実験プロシージャの正しいサブジェクトが使用されることを保証します。

    科学者は、個々 の実験動物を識別するために使用いくつかの恒久的かつ一時的な方法があります。このビデオでは、大人の齧歯動物の尻尾, 新生児つま先と大人のつま先の入れ墨を含む方法について説明します。次に、私達は一般にラット、非毒性の染料を利用した普遍的な一時的な同定法に続いて行われるマイクロ チップ配置手法に触れます。

    これらの方法のためのプロトコルを掘り下げる前に注意点、利点、およびそれぞれの方法の欠点を確認してみましょう。尾の入れ墨は、mri や動物の皮膚の潰瘍性皮膚炎を含む状態に遺伝的素因ものを含む実験など、多くの研究プロトコールで有益です。テール入れ墨の別の利点は、手動で動物を抑制することがなく簡単と可視化したことです。

    特定の実験的プロトコルにはアザラシが恒久的に識別することが重要となる日のいずれか早く新生児の遺伝子型が必要です。つま先の入れ墨の耳のタグ付けまたは耳パンチに対して十分な大きさになるまでに識別されるそのような動物を使用します。過剰反応していると彼女の子犬の新しいタトゥーを過度にグルーミングから彼女を防ぐために大人の母親同様つま先入れ墨を適用することをお勧めします。このメソッドを使用していくつかの利点がありますが、欠点は、プロシージャがスキル、実践、着実な手と特殊な機器を必要とすることです。

    検討次の永久的な同定法は、マイクロ チップです。マイクロ チップを植え付けることは比較的簡単なプロセスが、その有用性を制限するいくつかの要因があります。まず、これらのチップはお米の粒が大きい程度の大きさ、10-12 ゲージ マウス、ラットにメソッドが少なくてに対して大きすぎる注入用針を必要です。第二に、マイクロ チップは高価であり、したがって不適切な動物の多数を識別するため。最後に、マイクロ チップは、MRI を含む実験では使用できません。ただし、恒久的に識別する必要がありますユニークな遺伝と育成動物のような貴重な動物のグループは、マイクロ チップが使用できます。

    説明します最後のメソッドは、非毒性マーカーを使用して一時的な id です。非毒性マーカーは、着色の研究動物の毛皮のために作られています。このメソッドは、染料が目に見える数週間残ることができるが、少数の時間または日の動物を識別することを必要とする短期の研究に最適です。一部の研究者これらのマーカーと組み合わせて使用その他識別方法簡単にグループの特定の動物を発見します。

    我々 は、背景を議論して、尾の入れ墨から始まる手順を学びましょう。

    ここでは、成体マウスの手順を実演しますが、同じ幼ラットに適用できます。

    動物に苦痛を与えないか不安を最小限に抑えるためテール入れ墨行わなければならない動物の住宅地ではなく処置室で。入れ墨を適用する前にプルの開口部からピンと張った尾を持つカップ落を使用してマウスを抑制します。カップのフランジは、特殊なガラスのプラットフォームを介して行われています。次に、きれい希薄組織の少量の尾に、綿棒にクリーナー。この手順は、スケールや破片のタトゥーに干渉する可能性のすべての蓄積を削除することが重要です。次に、別の綿棒で尾皮膚に組織油を適用します。これは、皮膚を軟化、入れ墨針の潤滑を提供することによって組織の損傷を最小限に抑えます。さらに、油汚れ洗浄プロセスでは削除されませんを溶解し、インク非入れ墨皮膚に染色を防ぐことができます。入れ墨を適用する準備が整いました。

    マシンがオフで中がランセットか皮下注射針、入れ墨の針の先端を顔料に軽く浸します。次に、足のペダルを使用して、銃をアクティブ化、尻尾にタトゥー ツールを配置およびタトゥー サイトに針の先端をもたらします。90 ° の角度で針を用いて皮膚に近づくし、色素が沈着する完全にように真皮に深く十分に浸透します。活性の針の音の変化は、深さを見分けることができます。ように数字と文字を形成、1 つの方向でもストロークが短い。入れ墨を適用するときに、最小曲線と角度を使用してください。

    その他顔料を追加するには、すべてのワンツー文字マウス用とラットのすべての 1 つの文字の色素の貯留層に針の先端を浸し。余分な色素を削除するペーパー タオルで完成したタトゥーを消します。タトゥーや紙タオルで血液の存在は、タトゥー深すぎる作られた従って永久的であるようであることを示します。針をしない上に、既に沈殿させた顔料に、平行に置くことによって追加色素薄い文字を強化します。各使用後タトゥー機器を徹底的に掃除、病気の感染を防ぐためにケージの間新しいまたは滅菌針とインクの新鮮な供給を使用します。

    次に、新生児と成人につま先の入れ墨を適用する方法を学習します。ここでは、マウスの手順を実演しますが、同じ手順は、ラットの適用。

    新生児は彼らのつま先に入れ墨を tailbones は骨化しないと尾の長さが小さすぎます。また、尻尾が大きくなると、皮膚に延伸することし、歪んだ、かすかな、そして読み取り不可能な数字になります。アルミ箔など非多孔質表面に緑色タトゥー ペーストのスポットを置くことによって開始します。次に、ガーゼのパッドを使用してあなたの手で離乳前の子犬をカップします。あなたの親指と入れ墨の選ばれた爪先を公開する人差し指のクルックの間足を配置します。選択したつま先がある離れて曲げを防ぐためにそれの後ろの固体表面を持つよう、爪先に近い足を保持します。

    今、タトゥー ペースト状に 4.5 mm のランセットの先端を浸します。その後、事前に決められたコードに従って必要なつま先を突きます。適切な浸透するように、同じ場所を 3 回突きます。ペーストに、マークを残すように十分皮膚に浸透が深く突きをつま先出血を避けます。優しく任意の余分なタトゥーのペーストを削除するガーゼの新しいタトゥーのしみ、そのケージに動物を戻ります。次のゴミの新しいランセットを使用します。手順の後の 1 日は、入れ墨が表示されることを確認します。

    ときに看護の仔が入れ墨されて、またダムを入れ墨することをお勧めします。これは過剰反応と彼女の子犬の入れ墨を過度にグルーミングから彼女を防ぐことができます。つま先の入れ墨を大人に適用するには、もう一度、そもそも緑タトゥー ペーストの小さなスポット アルミ箔に。その後、プラスチック製のコーンまたは後部のフィートにアクセスできるプレキシ ガラス落を使用して動物を抑制します。拘束デバイスから足を延ばして、親指と入れ墨の選ばれた爪先を公開する人差し指のクルックの間足を配置します。

    今、タトゥー ペースト 5 mm ランセットの先端を浸しなさい。前に、つつくと適切な溶込みを確保するため、少なくとも 3 回必要なつま先の皮膚に穴を開けるで入れ墨を適用します。次に、慎重に任意の余分なペーストを削除するタトゥーを消す、そのケージに動物を返します。新生児期とタトゥーのプロシージャの後の 1 日を確認します。刺青の翌日は、マークが表示されている場合それを表示したまま動物の寿命のため。かすかなまたは表示されていない場合、前述したタトゥーをやり直します。

    説明します次の同定方法を含む齧歯動物にマイクロ チップを埋め込みます。実験動物の分類のために一般的に使用されるチップは、無線周波数識別、または RFID チップです。通常、チップは、針、applier に配置することでプリロードされます。チップ挿入、肩に皮膚をまだ把握できるかどうかを確かめる動物を抑制するのにプレキシ ガラス チューブを使用します。まず、テントのポケットを作成する肌。皮膚を通して針を入れ、背骨に平行、テールに向けて斜角。皮下にマイクロ チップを取り出し、針を撤回します。皮膚の針を次の中からチップを防ぐために注射部位の閉鎖皮をつまみます。引き続き任意の皮膚の出血の止血を提供するために圧力を適用します。拘束デバイスから動物を削除し、識別コードを確認する製造によって提供されるリーダーを使用してチップをスキャンします。

    最後に、一時的な色素を同定のための齧歯動物に適用する方法を学びましょう。マウスを始めましょう。まず、肩甲骨の間の領域がアクセスできるように、動物を抑制します。身体のこの部分は、セルフ グルーミングから安全です。スポットまたは染料の連勝をこの地域で毛皮に、そのケージに動物の背部を置きます。

    、ラットの尾をつかんでそれをピンと張った保持動物を手動で抑制します。これにより、染料のアプリケーションのための領域は、頭部、肩、臀部にある可能性があります簡単にアクセス可能です。毛皮にスポットまたは染料の連勝を配置します。時々、動物を拘束せずに無毒染料を適用することが可能です。以上、数日間唯一の識別子としてそれらを使用している場合は特に、定期的にこれらの動物のマーキングを確認します。

    これらの異なる識別方法の手順については、どのように科学者を使用しているそれら異なる研究で今日を見てみましょう。

    齧歯動物行動実験での使用はかなり一般的です。

    ここでは、研究者は、完全に動物をマークする、入れ墨と人工的につくられたホーム ケージ環境で数日間観察し、尾を使用しました。データ収集コントロールと実験動物の間、10 日間ポスト手術期間移動距離などの動作で明らかに違いです。

    別の動作実験で調査官はつま先が新生児の入れ墨を実行し、レコードの超音波発声する特殊なマイクで録音ボックスにそれらを配置しました。この実験の目的は呼び出しの違いを見て、レート、つまり野生型およびShank2欠損マウスで毎分発声数自閉症以上 12 日新生児期および成体のフードのモデル。

    最後に、前述したように、非毒性の染料の使用は短期間の実験のために動物をマークする効率的な方法です。ここでは、科学者たちは、血漿タンパク質の一過性発現に興味があった。だから一時的なマーカーで動物をマーク、プラスミド DNA を静脈内に注入され、収集血液サンプル 2 日後で西部のしみを用いたタンパク質の発現を決定します。

    ゼウスの導入を見てきただけに入れ墨、マイクロ チップの配置、および実験室のマウスおよびラットの一時的な識別方法。動物の個体識別は、研究の記録管理の主要なコンポーネントです。したがって、適切な手法を選択すると、多くの要因を審議する必要があります。これには、動物に不快感のレベル、技術、実験的ニーズと最後にメソッドに関連付けられているコストの使いやすさが含まれます。いつも見てくれてありがとう!

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