Isolierung von fäkalen Bakterien aus Wasserproben durch Filtration

Membranfiltration und die anschließende Kultivierung von Bakterien gesammelt ist eine nützliche Technik zur Beurteilung der Qualität und Sauberkeit der Wasserquelle.

Die Qualität des Wassers für den Einsatz in Landwirtschaft, Freizeit oder inländischen Einstellungen bestimmt ist von großer Bedeutung, aufgrund des Potenzials für den Ausbruch von Wasser übertragenen Krankheit. Wenn Wasser mit Fäkalien von Tieren oder Menschen verschmutzt ist, können pathogene Parasiten, Bakterien oder Viren zu neuen Hosts auf ihre Einnahme verteilt werden. Wasser-Quellen für solche krankheitsverursachende Organismen die Überwachung ist daher entscheidend für die öffentliche Gesundheit zu gewährleisten.

Die schiere Anzahl und Vielfalt der fäkal-orale Krankheitserreger, die möglicherweise in einer Wasser-Quelle vorhanden ist es unpraktisch, für jede selbstständig und in regelmäßigen Abständen zu überprüfen. Stattdessen nutzen gemeinsame mikrobiologische Tests für Wasserqualität coliforme Indikatorbakterien. Weitere Informationen zu diesem Prozess finden Sie unter dieser Sammlung Video auf Indikatororganismen.

Dieses Video wird veranschaulichen den Prozess der Membranfiltration auf eine ökologische Wasserprobe, zeigen, wie verschiedene Arten von fäkalen Indikatorbakterien einschließlich insgesamt Coliformen, fäkalen Coliformen und fäkale Entercocci Kultur, und beschreiben, wie das Vorhandensein der fäkale Verunreinigungen überprüfen.

Membran-Filtration-Technik nutzt Unterdruck an Wasserproben über einen Filter und Trap Bakterien zu zeichnen. Der Filter ist eine spezielle Membran mit einer minimalen mittlere Porengröße von 0,45 µm, die die Erfassung von Bakterien, kann die in der Regel ca. 1 µm groß sind. Nach der Filtration ist die Membran auf Agarose Wachstumsmedien angewendet und Konditionen entsprechende Ziel Mikroorganismen Kultur inkubiert.

Diese Technik eignet sich am besten für geringe Trübung Quellen wie Trinkwasser, Schwimmbäder, oder Seen und Stauseen. Wasser reich an Feinstaub Inhalt kann dazu führen, Verschmutzung oder Verstopfung des Filters, Begrenzung des Volumens, die verarbeitet werden können. Darüber hinaus ist Membranfiltration nicht praktisch für Wasser-Quellen, die große Anzahl von Hintergrund oder nicht-Coliform Bakterien, wie rohes Abwasser enthalten, wie dies die Schwierigkeit der Aufzählung Ziel Coliformen auf Kultur und Inkubation erhöhen kann.

Sobald bakterielle Proben im Filter eingeschlossen wurden, können sie an Wachstumsfugen, die Arten von Kennzeichen Bakterien in Wasserproben bestimmen übertragen. Beschichtung auf verschiedenen Medien-Typen für verschiedene bakterielle wählt und für schnelle Identifizierung erlauben.

Nach einem Wachstum auf Kultur spezifische Platten kann weitere Bestätigung der Indikator Bakterien Identitäten durchgeführt werden mit Techniken wie Kommissionierung Kolonien in flüssigen Medien und Durham-Röhrchen für Gase, die nur in Anwesenheit von fäkalen Coliformen oder insgesamt Coliformen erzeugt werden soll, zu erfassen. Darüber hinaus können verdächtige fäkale Enterokokken durch eine Kombination von einem positiven Gramfärbung, zusammen mit einem negativen Wasserstoff-Peroxid-Katalase-Test bestätigt werden.

Jetzt sind wir vertraut mit den Prinzipien, die hinter der Membranfiltration von Wasserproben, werfen Sie einen Blick auf wie dieses Verfahren durchgeführt wird.

Um den Vorgang zu starten, zuerst sammeln Sie Wasserproben aus Test Wasserquellen von Interesse. Sicherstellen Sie, dass die Proben in sterilen 1-L-Flaschen gesammelt werden. Sobald die Sammlung abgeschlossen ist, die Proben auf Eis gelegt, und transportieren sie an das Labor zur mikrobiellen Analyse.

Um die Analyse zu starten, zunächst sterilisieren Sie einen Membran-Filtration-Verteiler. Schließen Sie als nächstes, Krümmer, eine Vakuumpumpe und Filtration Abfall Flasche mit Bleichmittel.

Ethanol Flamme-sterilisieren Zange und eine sterile gerasterten Membran aus der Verpackung nehmen. Setzen Sie den Filter auf die Mitte des Bereichs Membran Filtration des Verteilers, und wenden Sie einen Sterilfilter Trichter auf das Gerät an, dann befestigen.

Messen Sie eine gewünschte Lautstärke Test Wasser in den Trichter. Wenden Sie ein teilweises Vakuum ziehen die zu untersuchende Probe durch den Filter an. Abgehängte Vollmaterial, darunter Bakterien und andere organische Stoffe, die größer als 0,45 μm auf oder innerhalb des Filters, während kleinere Partikel, Viren, eingeklemmt wird und gelöste Feststoffe passieren obwohl in die Abfälle Flasche mit Bleichmittel.

Nachdem die Probe durch den Filter durchlaufen hat, spülen Sie das Innere des Trichters mit 25 mL sterilem Wasser 3mal, ermöglicht dies durch den Filter passieren. Wenn die Schlussspülung abgeschlossen ist, trennen Sie das Vakuum und entfernen Sie den Trichter aus dem Verteiler.

Als nächstes Ethanol Flamme-sterilisieren Zange und Membranfilter sofort aus dem Gerät entfernen. Legen Sie es auf der entsprechenden Wachstumsfuge für das Ziel Mikroorganismus mit einer Rollbewegung zu vollständigen Kontakt mit der Oberfläche zu gewährleisten und einfangen von Luftblasen zu vermeiden.

Desinfizieren Sie für die Verarbeitung von jeder weiteren Probe die Edelstahl-Krümmer und verwenden Sie einen sterilen Trichter, um Kreuzkontaminationen zu vermeiden. Schließlich legen Sie die Platten in einem Inkubator für die geeignete Inkubationszeit.

Entfernen Sie nach der Inkubationszeit die Platten aus dem Inkubator für die Aufzählung. Führen Sie nach Möglichkeit die Kolonie zählt unter low-Power-Vergrößerung mit einer kühlen weißen Lichtquelle. Insgesamt Coliformen bestimmen, identifizieren und Kolonien, die erscheinen rosa bis dunkelrot in der Farbe und haben einen metallischen Oberflächenglanz ganz oder teilweise für die Kolonie zu zählen. Atypische insgesamt coliforme Kolonien erscheinen dunkel rot, Mucoid oder kernhaltige ohne Glanz.

Kolonien, die blau, weiß, farblos oder rosa ohne Glanz erscheinen gelten als nicht-Coliformen und sollte nicht in der Anzahl der insgesamt Coliformen aufgenommen werden.

Fäkale coliforme Kolonien erscheinen als verschiedene Schattierungen von blau, und diese als eigene Kategorie gezählt werden soll. Non-fäkale coliforme Kolonien sind in der Regel grau bis Creme in der Farbe und sollte auch in eine einzelne Kategorie aufgenommen werden. Zu guter Letzt fäkale Enterokokken Kolonien werden reicht von rosa bis dunkelrot in der Farbe und separat gezählt werden soll.

Überprüfen Sie insgesamt coliforme Kolonien, gelten Sie eine sterilisierte und gekühlten Impfkeimen Schleife für eine einzige Kolonie von Interesse. Übertragen Sie die ausgewählten Kolonie in ein Glasgefäß mit Natriumlaurylsulfat Tryptose Brühe und einem Durham Rohr. Als Nächstes platzieren Sie die Kulturen in einem Inkubator. Das Vorhandensein von Trübung zusammen mit Gas-Produktion von Durham Röhre gefangen überprüft die Kolonie als eine totale Coliform.

Für fäkale coliforme Überprüfung, aseptisch Kolonien in der Farbe Blau in Glasgefäße mit sterilen EG Medium und einem Durham Rohr übertragen. Legen Sie die beimpften Röhrchen in einen Inkubator. Nach der Inkubation, trübe inoculates in Verbindung mit Gas Produktion bestätigen die Kolonie eine fäkale Coliform sein.

Fäkale Enterokokken bestätigen, aseptisch übertragen Sie verdächtige Kolonien mit den korrekte Morphologie auf Gehirn-Herz Infusion Agarplatten und inkubieren. Als nächstes übertragen Sie Wachstum aus einer isolierten Kolonie auf BHIA auf zwei sterilen Objektträger.

Hinzufügen eines Glas-Objektträger 2-3 Tropfen von 3 % Wasserstoffperoxid. Rapid Gas-Produktion zeigt ein Katalase-positiv Bakterium wie Citrobacter. Fäkale Enterokokken Bakterien sind Katalase negativ; Daher wird keine Blasenbildung beobachtet. Katalase-Negative Kolonien, die Anzeigen nicht sprudeln, führen Sie eine Gram-Färbung. Als fäkale Enterokokken sollte diese Gram positiv, eiförmig in der Form erscheinen und werden gruppiert, meist in Paaren oder kurzen Ketten.

Alle diese Indikatorbakterien in eine Wasserquelle zu finden, zeigt das Vorhandensein des Befalls. Wenn mehr als 5 % der Proben gefunden werden über einen 1-Monats-Zeitraum belastet, kann die Quelle für den menschlichen Verzehr ungeeignet angesehen werden.

Membranfiltration wird häufig in einer Reihe von Anwendungen in der Biologie verwendet, und fäkale Indikator-Organismen können auch durch andere experimentelle Verfahren nachgewiesen werden. Einige dieser Anwendungen werden hier untersucht.

Membranfiltration kann auch in Virus-Capture von Wasserproben verwendet werden. Wie Viren in der Regel auf sehr niedrigem Niveau vorhanden werden, müssen Wasserproben konzentriert werden, um sie für die Analyse zu erfassen. Aufgenommene Viren können dann vom Filter freigegeben werden und identifiziert mit Hilfe von Techniken wie Zelle Kultur Infektiosität Assays oder PCR.

Membranfiltration wird auch in der Produktion von hochreinem Wasser für Industrie und Labor genutzt. Viele Branchen erfordern hoch gereinigtes Wasser für ihre betrieblichen Abläufe und Membranfiltration kann dazu dienen, Schadstoffe, einschließlich unerwünschter gelösten Metalle und Salze aus dem Wasser zu entfernen. Es kann auch in die Entsalzung von Meerwasser verwendet werden, um Trinkwasser zu produzieren.

Sie habe nur Jupiters Einführung zur Identifizierung von Indikator-Organismen im Wasser durch Membranfiltration beobachtet. Sie sollten jetzt wissen, wie man Membran Filter Wasserproben, wie man verschiedene Arten von fäkalen Indikatorbakterien aus der Membran Kultur und wie Sie diese als Indikator-Organismen bestätigen. Danke fürs Zuschauen!