Zusammengesetzte Verwaltung IV

Lab Animal Research

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Overview

< p Class = "Jove_content" > Quelle: Kay Stewart, RVT, RLATG, Anus; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Universität von Notre Dame, IN

es gibt viele häufig verwendete Routen für zusammengesetzte Verwaltung bei Mäusen und Ratten. Protokolle können, jedoch erfordern den Einsatz von weniger häufig verwendeten Routen: intrakardiale, Straßenräuber und Retro-Orbital-Injektionen. Fachausbildung ist essentiell für diese Verfahren erfolgreich durchgeführt werden. Begründung für diese Strecken müssen bereitgestellt werden, um institutionelle Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) Zustimmung zu gewinnen.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Zusammengesetzte Verwaltung IV. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

intrakardiale Verwaltung wird in einer Vielzahl von Anwendungen, einschließlich der Entwicklung von einem Tiermodell der Knochenmetastasen Krebs, sowie eine Untersuchung der Auswirkungen der direkten intrakardialen Lieferung auf das Ergebnis des Myokardinfarkt. Dieses Verfahren erfolgt häufig durch den Einsatz von Ultraschall, die Nadel in die richtige Lage im Herzen zu führen. 2 aber wenn richtig unter Verwendung der richtigen Wahrzeichen durchgeführt, dieses Verfahren kann durchgeführt werden ohne den Einsatz von Ultraschall Visualisierung.

durch die invasive Art des Verfahrens, muss die Verwendung von intrakardialen Injektion wissenschaftlich in einem IACUC Protokoll begründet werden. Nur ein Überleben Injektion sollte erlaubt sein. Dieses Verfahren erfordert die Verwendung von einer Vollnarkose, Inhalat oder injizierbare, gemäß der Richtlinien innerhalb einer Organisation. Nadelauswahl sollte die kleinste Größe möglich, die für die Viskosität des Materials injiziert zulässt; im Allgemeinen ist ein 27-30-Gauge-Nadel verwendet. Injektionsvolumina reichen von 100 µL bis maximal 300 µL.

intravenöse Injektionen in das Heck von Mäusen sind anspruchsvoll und oft erfolglos. Eine Alternative Route für die intravenöse Gabe ist durch den Retro-Orbital-Plexus. Während diese Technik erfordert Training und Geschick, um durchzuführen, haben Studien gezeigt, dass gibt es eine höhere Erfolgsquote mit der Retro-Orbital-Injektion als mit seitlicher Schweif Vene Injektion. 3, 4, 5 Anästhesie ist erforderlich, um verhindern, dass die Maus bewegt während des Verfahrens. Inhalat Vollnarkose geliefert entweder über eine Glasglocke oder eine Induktion Kammer angebracht, ein Präzisions-Vaporizer ist wirksam. Jedoch wenn Inhalationsmittel verwendet wird, beachten Sie, dass das Tier beginnt sich schnell zu erholen, sobald es aus der Kammer entfernt wird, so dass man die Injektion einsatzbereit sein muss. Eine ophthalmologische Lokalanästhetikum (Tetracaine oder Proparacaine) wird empfohlen, wenn mehrere Injektionen durchgeführt werden sollen.

unterscheiden sich die orbitale venöse Struktur von Maus und Ratte. Die Maus hat einen Sinus oder Konvergenz mehrere Schiffe, einschließlich supraorbital Vene, dorsalen nasalen Vene, die minderwertigen palpebrale Vene und der oberflächlichen zeitliche Venen, die den Raum in der Umlaufbahn um das Auge zu füllen. Im Bereich Ratte orbital ist ein Netzwerk oder eine Plexus von Schiffen. Wie bei allen Injektionen, sollte die Nadel ausgewählt die kleinste Größe möglich sein; in der Regel gauge eine 27-30 Nadel. Zwar gab es Berichte über größere Mengen, ist das maximale Volumen 150 µL pro Auge. 3, 4, 5 Eine Injektion pro Auge, pro Tag, wird empfohlen, mit einer Gesamtmenge von zwei Injektionen pro Auge fürs Überleben Verfahren. Es sollte auch mindestens eine ein-Tages-Intervall zwischen den Injektionen. Ein Nonsurvival Verfahren, Volumen bis zu 500 µL verabreicht werden können.

trotz der Kontroverse, die Verwendung von die Fußauflage als eine Injektionsstelle ist noch für einige Studien erforderlich. Es wurde nachgewiesen, dass wenn Sie über die Fußauflage injiziert, die Antikörper-Reaktion in einigen Mausstämme deutlich stärker, als wenn das Sprunggelenk injiziert wurde. 6 Alle Tiere müssen genau beobachtet werden, Anzeichen von Schmerzen, der Verzehr von Lebensmitteln, und für normale Gehfähigkeit. Selbstverstümmelung des Fußes kann auftreten, in dem Umfang des Fußes zerstört wird. Dies ist ein Zeichen von chronischen Schmerzen. Alle Tiere zeigen Selbstverstümmelung sollte die Aufmerksamkeit von den Tierärzten sofort aufgerufen werden.

Straßenräuber Messungen sollte täglich durchgeführt werden, als offensichtliche Schwellung aufgetreten ist. Endpunkte muss nach IACUC Richtlinien. Im Allgemeinen muss das Tier eingeschläfert werden wenn die Läsion oder Tumor mit dem Tier stört ' s Fähigkeit, ambulate oder Nahrung und Wasser zu erreichen. Die maximale Lautstärke, die in einem Straßenräuber injiziert werden kann ist 50 µL. Eine 29-30-Gauge-Nadel ist für die Injektion empfohlen.

Procedure

1. intrakardiale Injektion

  1. Sehenswürdigkeiten und Positionierung: Positionieren Sie die Maus oder Ratte rechts seitlich liegen (mit der linken Seite nach oben) oder in dorsal liegen, und die Wahrzeichen zu identifizieren.
    1. Positionieren das Herz ungefähr in Höhe des Ellenbogens und nur auf der linken Seite des Brustbeins.
    2. Stechen Sie die Nadel zwischen die Rippen an den Ellenbogen.
    3. In ein Tier im dorsalen liegen, stechen Sie die Nadel in die Brust parallel zum Tisch.
    4. In ein Tier im seitlichen liegen, stechen Sie die Nadel in die Brust senkrecht auf den Tisch.
  2. Injektion des Artikels
    1. sicherzustellen, gibt es nur minimale Bewegungen der Nadel, sobald es in das Herz den Muskel gerissen und verursachen Blutungen in den Herzbeutel Sac zu verhindern, wie dies Herzfunktion beeinträchtigt eingefügt wird.
    2. Aspirieren Sie die Spritze um die richtige Platzierung zu bestimmen. Es gibt oft einen Blitz des Blutes in die Nabe der Spritze.
    3. Halten Sie die Spritze, so dass die Hand nicht auf die Spritze für die Injektion verschoben, sobald die Nadel im Herzen positioniert wurde.
    4. Injizieren den Artikel in eine langsame und stetige Art.
    5. Ziehen Sie die Nadel heraus langsam um die Blutung zu minimieren.
    6. Mäuse, die Atemnot, Beschlagnahme, Zyanose, verlängerte Ataxie oder andere Folgeschäden im Zusammenhang mit Einspritzung Trauma auftreten müssen vom Tierarzt Personal ausgewertet und nach ihrer Empfehlung eingeschläfert.

Figure 1
Abbildung 1. Intrakardiale Injektion bei Mäusen.

2. intravenöse Injektion, die unter Verwendung der Retro-Orbital-Plexus

  1. Injektion Wahrzeichen und Positionierung
    1. legen Sie das Tier auf einer ebenen Fläche im seitlichen liegen.
    2. Stechen Sie die Nadel in der medialen Augenwinkel des Auges in einem 45°-Winkel zur Nase.
    3. Muss die Nadel Tiefe ausreichen, um die Bindehaut Gewebe eindringen und hinter das Okular Umlaufbahn und in der okulären Plexus. Beim Platzieren der Nadelöhrs sollte es nicht die Knochen an der Rückseite der Umlaufbahn begegnen.
    4. Legen Sie den Zeigefinger auf die Oberseite des Kopfes mit dem Daumen auf den Kiefer.
    5. Ziehen Sie vorsichtig nach unten und zurück zu straffen die Haut und den Augapfel ragen.
    6. Kümmern sich nicht um Druck auf die Luftröhre und Luftstrom zu beschränken.
  2. Injektion
    1. legen Sie die Nadel hinter dem Auge und nicht Intra vorgeben.
    2. Stellen Sie sicher, dass die Nadel nur minimale Bewegungen, die nach dem Einlegen in die Retro-Orbital-Plexus hat, oder die Gefäße platzen werden, was zu Blutungen und Verlust des Agenten in das Gewebe hinter dem Auge. Halten Sie die Spritze, so dass die Hand nicht auf die Spritze für die Injektion verschoben ist, sobald die Nadel in die Retro-Orbital-Plexus positioniert wurde.
    3. Nicht mit der Spritze Aspirieren, da Sie die Gefäße zusammenbrechen werden.
    4. Injizieren den Artikel in eine langsame und stetige Art.
    5. Ziehen Sie die Nadel heraus und üben Sie leichten Druck auf das Auge zu Blutungen zu kontrollieren und zur Blutstillung.
    6. Mäuse, die erleben, Schwellungen, Konjunktivitis, oder andere Folgeschäden im Zusammenhang mit Einspritzung Trauma müssen von den Tierärzten bewertet und behandelt oder nach ihrer Empfehlung eingeschläfert

Figure 2
Abbildung 2. Retro-orbital Injektion bei Mäusen.

3. Straßenräuber Injektion

  1. für Zurückhaltung, legen Sie das Tier in einem Zurückhaltung-Rohr mit einem Hinterfuß isoliert und erweitern, indem Sie greifen die Haut über dem Kniegelenk.
  2. Wischen Sie den Fuß mit Wasser oder Alkohol um Schmutz vor der Injektion entfernen.
  3. Spritzen subkutan in der Mitte der hinteren Fuß bilden eine kleine Blase an der Injektionsstelle. Um das Blutgefäß zu vermeiden, die die Länge des Fußes verläuft, direkt an der Mittellinie parallel zum Behälter Spritzen.

Figure 3
Abbildung 3. Straßenräuber Injektion bei Mäusen und Ratten.

Intracardiac, Retro-Orbital und Straßenräuber sind nur einige der spezialisierten Einspritzung Methoden, mit denen Biomediziner für Experimente, die Bereitstellung von Verbindungen über diese atypischen Wege erfordern.

Eine intrakardiale Injektion liefert die Verbindung in die linke Herzkammer, so dass die Substanz, die arterielle Durchblutung direkt einzugeben. Die Retro-orbitale-Route ist eine Alternative zum Heck Vene Injektion und wird verwendet, um die Verbindung in den venösen Blutkreislauf zu liefern. Und eine Straßenräuber Injektion beinhaltet subkutane Verabreichung des Artikels in das Tier ' s Hinterfuß. Dieses Video wird veranschaulichen die Überlegungen, Verfahren und Anwendungen für diese spezielle Injektionstechniken.

lassen ' s beginnen mit einigen Hintergrundinformationen und Dinge sollten vor Beginn dieser Verwaltungsverfahren.

Intrakardiale Administration erfolgt oft durch den Einsatz von Ultraschall, die Nadel in die richtige Lage im Herzen zu führen. Allerdings kann wenn durchgeführt korrekt unter Verwendung der richtigen Wahrzeichen, die Verwaltung ohne den Einsatz von Ultraschall Visualisierung durchgeführt werden. Beachten Sie, dass das Verfahren den Einsatz einer Vollnarkose erfordert und nur eine Injektion pro Tier für Überleben Verfahren gestattet ist. In der Regel eine 27-30-Gauge-Nadel dient für diese Injektion und maximaler Lautstärke der Verwaltung ist 100 und 300 Mikroliter für Mäuse und Ratten, bzw..

Für intravenöse Injektion über die Retro-orbital Route, sollte man einen fairen Verständnis der orbital venösen Struktur. Eine Maus hat einen Sinus wo mehrere Venen-nämlich die supraorbital, dorsal Nasal, minderwertige palpebrale und oberflächlichen zeitliche-konvergieren. Während bei Ratten, gibt es ein Netzwerk oder eine Plexus mehrere Venen. Die Injektion erfolgt direkt in den Sinus oder der Plexus. Wie mit einer Gesamtfläche von zwei Injektionen pro Auge fürs Überleben Verfahren intrakardialen, dieses Verfahren erfordert auch die Verwendung von Vollnarkose und nur eine Injektion pro Auge pro Tag empfohlen. Wie bei allen Injektionen, die kleinste Größe Nadel ausgewählt-in der Regel 27-30 Gauge sein sollte- und die empfohlene maximale Lautstärke ist 150 μL pro Auge.

Trotz die Kontroverse, die Verwendung von Straßenräuber Injektion ist weiterhin für einige Studien, die in der Regel im Zusammenhang mit Entzündung und Tumor Wachstum erforderlich. Beachten Sie, dass die Injektionen nur nie Bi-seitlich auf einem Bein ausgeführt werden können. Und die Straßenräuber Messungen sollte täglich durchgeführt werden, als offensichtliche Schwellung aufgetreten ist. Eine 29-30-Gauge-Nadel wird empfohlen, für die Injektion und die maximale Lautstärke empfohlen ist 50 μL. Nach jeder Injektion müssen alle Tiere eng für Anzeichen von Schmerzen, der Verzehr von Lebensmitteln, als auch für normale Gehfähigkeit überwacht werden. In der Regel muss das Tier eingeschläfert werden wenn die Läsion oder Tumor mit dem Tier stört ' s Fähigkeit, ambulate oder Nahrung und Wasser zu erreichen.

lass ' s lernen die Injektionsverfahren, beginnend mit der intrakardialen Injektion. Wir zeigen das Verfahren in eine Maus, aber die Sehenswürdigkeiten und das Protokoll für eine Ratte ähneln.

Ist der erste Schritt zur Vorbereitung der Spritze. Erinnern an eine 29 gauge Nadel und 1 cc Spritze eignet sich für Mäuse. Und die maximale Lautstärke für die intrakardiale Injektion ist 100 Mikroliter. Wenn Sie die Lösung zeichnen, lassen Sie eine kleine Menge an Luft zwischen den Kolben und das Injektionsmaterial. Dies soll für Blut in die Spritze zu geben, als es ins Herz gelegt wird.

Zu beginnen, das Tier mit Schnüffelstoffen oder injizierbare Anästhetika zu betäuben. Überprüfen Sie die Überlegungen für die Aufrechterhaltung der Narkose in einem anderen Video dieser Kollektion. Als nächstes stellen Sie das Tier in dorsal liegen Position auf einer isolierten Plattform. Dann die Vorderbeine auf die Plattform mit Klebeband und legen Sie ein Stück Klebeband horizontal über den Bauch oberhalb der Hüfte. Dies soll weiter stabilisieren das Tier und jede Bewegung vermeiden, sobald die Nadel eingeführt worden. Als nächstes das Tier nass mit einem Tupfer ' s Brust mit 70 % Alkohol.

An die Injektionsstelle zu ermitteln suchen Sie zuerst die Xiphoid und das Manubrium Sternum. Dann finden Sie den Mittelpunkt zwischen den beiden Wahrzeichen. 1-2 mm links von diesem Punkt ist die Nadel einsetzen Wahrzeichen. Mit einem Applikator Baumwolle Spitze Povidon-Jod, markieren Sie die Einstichstelle der Nadel anwenden.

Zu injizieren, direkt die Nadel senkrecht auf den Tisch, und fügen Sie es in die Tiefe von ca. 2 mm. Wenden Sie dann einen sehr leichten Gegendruck auf den Kolben. Ein leuchtendes rote sauerstoffreiches Blut sollte die Spritze Hub eingeben die richtige Platzierung bestätigt. Halten Sie die Spritze an derselben Stelle und injizieren Sie das Material langsam und stetig im Laufe von 30 bis 60 Sekunden. Schnelle Injektion Verklumpung der Zellen und Verstopfung der Arterien, ein Schock für das System aufgrund der Temperatur des Stoffes deutlich niedriger als die Körpertemperatur oder eine Erweiterung der Ventrikel und Störungen des Herzrhythmus führen kann.

Sobald das Material langsam und vorsichtig die Spritze abgeklungen entfernen die Nadel ohne seitliche Bewegung, die den Herzmuskel schädigen können. Dann sofort lassen Sie das Band aus der Vorderbeine und Bauch und legen Sie das Tier in Bauchlage in einem sauberen Käfig mit tief genug Betten, um wie eine isolierende Schicht zu handeln. Beachten Sie, dass man die Hälfte der Wiederherstellung der Käfig ist auf eine Heizquelle und dem narkotisierten Tier befindet sich auf der beheizten Seite des Käfigs. Dies verhindert, dass Unterkühlung, und wie das Tier erholt sich von der Narkose werden in der Lage, Weg von der beheizten Seite wie gewünscht verschieben.

als nächstes lassen Sie ' s lernen die Methode für die intravenöse Injektion, die unter Verwendung der Retro-Orbital-Plexus bei Ratten. Wieder demonstrieren wir das Verfahren auf eine Maus, aber die Sehenswürdigkeiten und das Protokoll für Ratten ähneln.

Fügen Sie die entsprechende Nadel an der ausgewählten Spritze und füllen Sie das Injektionsmaterial. Denken Sie daran, dass in der Regel würde eine 27-30-Gauge-Nadel verwenden, mit dem kleinstmöglichen Spritze und einem maximalen Volumen von 150 Mikroliter.

, Den Vorgang starten zuerst das Tier zu betäuben. Legen Sie es auf einer ebenen Fläche im seitlichen liegen Stellung. Nun legen Sie den Zeigefinger auf der Oberseite des Kopfes und der Daumen auf den Kiefer und vorsichtig zurückziehen Sie und nach unten. Dies ist zu straffen die Haut und den Augapfel ragen. Achten Sie darauf, nicht üben Druck auf die Luftröhre und Luftstrom zu beschränken. Falls mehrere Injektionen, gelten ophthalmologischen Lokalanästhetikum, wie Tetracaine oder Proparacaine.

Stechen Sie die Nadel in der medialen Augenwinkel des Auges in einem 45°-Winkel zur Nase. Die Tiefe muss ausreichen, um die Bindehaut Gewebe eindringen und voraus in die okuläre Umlaufbahn und in den Sinus. Es sollte nicht die Knochen an der Rückseite der Umlaufbahn auftreten. Um zu vermeiden, zerreißen der Blutgefäße, sicherzustellen Sie, dass die Nadel nur minimale Bewegungen einmal eingefügt hat. Nicht aspirieren Sie, wie, dass die Gefäße zusammenbrechen wird. Injizieren Sie die Artikel in einer langsamen und stetigen Art und Weise. Dann ziehen Sie die Nadel heraus sanft und üben Sie leichten Druck auf das Auge zu Blutungen zu kontrollieren und zur Blutstillung.

zu guter Letzt lassen Sie ' s Beitrag Straßenräuber Injektionsverfahren bei Mäusen und Ratten. Zu starten, fügen die entsprechende Nadel und füllen die Spritze mit der richtigen Lautstärke. Dieses Verfahren kann in bewusste Tieren durchgeführt werden.

Legen Sie das Tier in eine Zurückhaltung Röhre mit einem Hinterfuß isoliert und erweitert durch das Greifen der Haut über dem Knie. Wischen Sie den Fuß mit Wasser oder Alkohol, Schutt vor der Injektion zu entfernen. Um das Blutgefäß zu vermeiden, die die Länge des Fußes verläuft, ist die Injektion Wahrzeichen im Zentrum, aber direkt an der Mittellinie, näher an den Zehen.

Platzieren die Nadel Abschrägung oben an der Injektionsstelle in Richtung der Ferse Regie. Den Artikel zu injizieren, langsam und stetig, rasche Ausdehnung der Fuß Gewebe zu vermeiden. Dadurch wird die Straßenräuber anschwellen wie das Injektionsmaterial diesem subkutanen Raum füllt. Auf einem kleinen Tier ' s Fuß die Schwellung von der Injektion kann bis zur Ferse erweitern, während es bei einem größeren Tier mehr lokalisiert werden.

Nach der Injektion, beobachten die Tiere täglich und wenn anhaltende Schwellung vorhanden ist oder gibt es Verletzungen oder Tumoren durch das experimentelle Protokoll, dann mit einem Bremssattel die Straßenräuber Messung durchführen. Dieses Gerät misst die Fuß Dicke in Millimeter und hilft bei der Quantifizierung der Schwellung.

nun ' s diskutieren ein paar Beispiel-Experimente unter Verwendung intrakardiale, retro Orbital und Straßenräuber Injektionen.

Eine der vielen Anwendungen von intrakardialen Verwaltung ist die Entwicklung von einem Tiermodell der Krebsmetastasen. Hier verwendeten die Forscher diese Route, um Tumorzellen zu injizieren, die Neigung zum Knochen Besiedlung besitzen. In den folgenden Tagen studierte sie Tumorwachstum in Knochen mit Röntgen- und Fluoreszenz bildgebende Verfahren. In einer anderen Studie wurde die Retro-orbitale Route zur spezifische Antikörper zu injizieren, die Neutrophilen zu beschriften. Dann, mit Hilfe der intravitalen Bildgebung, die Wissenschaftler konnten die Migration Muster der markierten Zellen verfolgen.

Schließlich Ermittler oft verwenden Straßenräuber Injektion, um entzündliche Reaktion zu analysieren. In diesem Experiment Forscher peripheren mononukleären Blutzellen aus menschlichem Blutproben isoliert, mit verschiedenen Testantigene gemischt und die Lösungen in das Tier injiziert ' s Straßenräuber. Zu guter Letzt traten sie Fußmaße um die Schwellung Reaktion aufgrund verschiedener Antigene zu quantifizieren.

Sie ' Ve beobachtete, wie Jupiter ' s letzte Rate über die üblichen und spezialisierte zusammengesetzte Verwaltung Techniken.

Nur zur Erinnerung, im ersten Teil haben wir die häufigsten parenterale Route überprüft. Im zweiten Kapitel haben wir die enteralen und aktuellen Verfahren diskutiert. Der dritte Teil behandelt die erste Gruppe von atypischen Vorgehensweisen wie intradermale, intranasale, und Intracranial beim Neugeborenen. Zu guter Letzt hier besprochenen drei zusätzliche Routen, die Biomediziner in Labors für bestimmte Zwecke zu verwenden.

Nach gerade diese Serie ein besseres Verständnis der verschiedenen Verwaltung Techniken man sollte und Sie auch, dass die allgemeinen und spezifischen Überlegungen wissen sollten im Zusammenhang mit diesen Protokollen der zusammengesetzten Verwaltung wie immer, danke für beobachten!

Summary

die Verwaltung von Verbindungen in Tiere kann eine erhebliche Wirkung auf sowohl das Wohlbefinden des Tieres und die Ergebnisse der experimentellen Daten und wissenschaftlichen Wert haben. Die richtige Methode der Lieferung ist entscheidend für den Erfolg des Experiments. Viele Faktoren müssen berücksichtigt werden, um die beste Route, einschließlich das wissenschaftliche Ziel der Studie, der pH-Wert des Stoffes, das gewünschte Dosiervolumen, die Viskosität des Stoffes und das Wohlergehen der Tiere zu bestimmen. Technisches Know-how ist auch eine Voraussetzung für alle Injektionsmethoden.

References

  1. Morton, D.A., Jennings, M., Buckwell, A., Ewbank, R., Godfrey, C., Holgate, B., Inglis, I., James, R., Page, C., Sharman, I., Verschoyle, R., Westall, L., and Wilson, A.B. 2001. Refining procedures for the administration of substances Report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Members of the Joint Working Group on Refinement. Laboratory Animals. 35. 1-41
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  3. Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H.D., Huizing, M., and Hoogstraten-Miller, S. 2001. Retro-orbital injection in mice. Lab Animal. 40:5. 155-171.
  4. Steel, C., Stephens, A., Hahto, S., Singletary, S., Ciavarra, R. 2008. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Anim. 37. 26-31.
  5. Timm, K.I. 1989. Orbital venous anatomy of the Mongolian gerbil, with comparison to the mouse, hamster, and rat. Laboratory Animal Science. 39:3. 262-265.
  6. Kamala, T. 2007. Hock immunization: a humane alternative to mouse footpad injections. Journal of Immunological Methods. 328. 204-214.

1. intrakardiale Injektion

  1. Sehenswürdigkeiten und Positionierung: Positionieren Sie die Maus oder Ratte rechts seitlich liegen (mit der linken Seite nach oben) oder in dorsal liegen, und die Wahrzeichen zu identifizieren.
    1. Positionieren das Herz ungefähr in Höhe des Ellenbogens und nur auf der linken Seite des Brustbeins.
    2. Stechen Sie die Nadel zwischen die Rippen an den Ellenbogen.
    3. In ein Tier im dorsalen liegen, stechen Sie die Nadel in die Brust parallel zum Tisch.
    4. In ein Tier im seitlichen liegen, stechen Sie die Nadel in die Brust senkrecht auf den Tisch.
  2. Injektion des Artikels
    1. sicherzustellen, gibt es nur minimale Bewegungen der Nadel, sobald es in das Herz den Muskel gerissen und verursachen Blutungen in den Herzbeutel Sac zu verhindern, wie dies Herzfunktion beeinträchtigt eingefügt wird.
    2. Aspirieren Sie die Spritze um die richtige Platzierung zu bestimmen. Es gibt oft einen Blitz des Blutes in die Nabe der Spritze.
    3. Halten Sie die Spritze, so dass die Hand nicht auf die Spritze für die Injektion verschoben, sobald die Nadel im Herzen positioniert wurde.
    4. Injizieren den Artikel in eine langsame und stetige Art.
    5. Ziehen Sie die Nadel heraus langsam um die Blutung zu minimieren.
    6. Mäuse, die Atemnot, Beschlagnahme, Zyanose, verlängerte Ataxie oder andere Folgeschäden im Zusammenhang mit Einspritzung Trauma auftreten müssen vom Tierarzt Personal ausgewertet und nach ihrer Empfehlung eingeschläfert.

Figure 1
Abbildung 1. Intrakardiale Injektion bei Mäusen.

2. intravenöse Injektion, die unter Verwendung der Retro-Orbital-Plexus

  1. Injektion Wahrzeichen und Positionierung
    1. legen Sie das Tier auf einer ebenen Fläche im seitlichen liegen.
    2. Stechen Sie die Nadel in der medialen Augenwinkel des Auges in einem 45°-Winkel zur Nase.
    3. Muss die Nadel Tiefe ausreichen, um die Bindehaut Gewebe eindringen und hinter das Okular Umlaufbahn und in der okulären Plexus. Beim Platzieren der Nadelöhrs sollte es nicht die Knochen an der Rückseite der Umlaufbahn begegnen.
    4. Legen Sie den Zeigefinger auf die Oberseite des Kopfes mit dem Daumen auf den Kiefer.
    5. Ziehen Sie vorsichtig nach unten und zurück zu straffen die Haut und den Augapfel ragen.
    6. Kümmern sich nicht um Druck auf die Luftröhre und Luftstrom zu beschränken.
  2. Injektion
    1. legen Sie die Nadel hinter dem Auge und nicht Intra vorgeben.
    2. Stellen Sie sicher, dass die Nadel nur minimale Bewegungen, die nach dem Einlegen in die Retro-Orbital-Plexus hat, oder die Gefäße platzen werden, was zu Blutungen und Verlust des Agenten in das Gewebe hinter dem Auge. Halten Sie die Spritze, so dass die Hand nicht auf die Spritze für die Injektion verschoben ist, sobald die Nadel in die Retro-Orbital-Plexus positioniert wurde.
    3. Nicht mit der Spritze Aspirieren, da Sie die Gefäße zusammenbrechen werden.
    4. Injizieren den Artikel in eine langsame und stetige Art.
    5. Ziehen Sie die Nadel heraus und üben Sie leichten Druck auf das Auge zu Blutungen zu kontrollieren und zur Blutstillung.
    6. Mäuse, die erleben, Schwellungen, Konjunktivitis, oder andere Folgeschäden im Zusammenhang mit Einspritzung Trauma müssen von den Tierärzten bewertet und behandelt oder nach ihrer Empfehlung eingeschläfert

Figure 2
Abbildung 2. Retro-orbital Injektion bei Mäusen.

3. Straßenräuber Injektion

  1. für Zurückhaltung, legen Sie das Tier in einem Zurückhaltung-Rohr mit einem Hinterfuß isoliert und erweitern, indem Sie greifen die Haut über dem Kniegelenk.
  2. Wischen Sie den Fuß mit Wasser oder Alkohol um Schmutz vor der Injektion entfernen.
  3. Spritzen subkutan in der Mitte der hinteren Fuß bilden eine kleine Blase an der Injektionsstelle. Um das Blutgefäß zu vermeiden, die die Länge des Fußes verläuft, direkt an der Mittellinie parallel zum Behälter Spritzen.

Figure 3
Abbildung 3. Straßenräuber Injektion bei Mäusen und Ratten.

Intracardiac, Retro-Orbital und Straßenräuber sind nur einige der spezialisierten Einspritzung Methoden, mit denen Biomediziner für Experimente, die Bereitstellung von Verbindungen über diese atypischen Wege erfordern.

Eine intrakardiale Injektion liefert die Verbindung in die linke Herzkammer, so dass die Substanz, die arterielle Durchblutung direkt einzugeben. Die Retro-orbitale-Route ist eine Alternative zum Heck Vene Injektion und wird verwendet, um die Verbindung in den venösen Blutkreislauf zu liefern. Und eine Straßenräuber Injektion beinhaltet subkutane Verabreichung des Artikels in das Tier ' s Hinterfuß. Dieses Video wird veranschaulichen die Überlegungen, Verfahren und Anwendungen für diese spezielle Injektionstechniken.

lassen ' s beginnen mit einigen Hintergrundinformationen und Dinge sollten vor Beginn dieser Verwaltungsverfahren.

Intrakardiale Administration erfolgt oft durch den Einsatz von Ultraschall, die Nadel in die richtige Lage im Herzen zu führen. Allerdings kann wenn durchgeführt korrekt unter Verwendung der richtigen Wahrzeichen, die Verwaltung ohne den Einsatz von Ultraschall Visualisierung durchgeführt werden. Beachten Sie, dass das Verfahren den Einsatz einer Vollnarkose erfordert und nur eine Injektion pro Tier für Überleben Verfahren gestattet ist. In der Regel eine 27-30-Gauge-Nadel dient für diese Injektion und maximaler Lautstärke der Verwaltung ist 100 und 300 Mikroliter für Mäuse und Ratten, bzw..

Für intravenöse Injektion über die Retro-orbital Route, sollte man einen fairen Verständnis der orbital venösen Struktur. Eine Maus hat einen Sinus wo mehrere Venen-nämlich die supraorbital, dorsal Nasal, minderwertige palpebrale und oberflächlichen zeitliche-konvergieren. Während bei Ratten, gibt es ein Netzwerk oder eine Plexus mehrere Venen. Die Injektion erfolgt direkt in den Sinus oder der Plexus. Wie mit einer Gesamtfläche von zwei Injektionen pro Auge fürs Überleben Verfahren intrakardialen, dieses Verfahren erfordert auch die Verwendung von Vollnarkose und nur eine Injektion pro Auge pro Tag empfohlen. Wie bei allen Injektionen, die kleinste Größe Nadel ausgewählt-in der Regel 27-30 Gauge sein sollte- und die empfohlene maximale Lautstärke ist 150 μL pro Auge.

Trotz die Kontroverse, die Verwendung von Straßenräuber Injektion ist weiterhin für einige Studien, die in der Regel im Zusammenhang mit Entzündung und Tumor Wachstum erforderlich. Beachten Sie, dass die Injektionen nur nie Bi-seitlich auf einem Bein ausgeführt werden können. Und die Straßenräuber Messungen sollte täglich durchgeführt werden, als offensichtliche Schwellung aufgetreten ist. Eine 29-30-Gauge-Nadel wird empfohlen, für die Injektion und die maximale Lautstärke empfohlen ist 50 μL. Nach jeder Injektion müssen alle Tiere eng für Anzeichen von Schmerzen, der Verzehr von Lebensmitteln, als auch für normale Gehfähigkeit überwacht werden. In der Regel muss das Tier eingeschläfert werden wenn die Läsion oder Tumor mit dem Tier stört ' s Fähigkeit, ambulate oder Nahrung und Wasser zu erreichen.

lass ' s lernen die Injektionsverfahren, beginnend mit der intrakardialen Injektion. Wir zeigen das Verfahren in eine Maus, aber die Sehenswürdigkeiten und das Protokoll für eine Ratte ähneln.

Ist der erste Schritt zur Vorbereitung der Spritze. Erinnern an eine 29 gauge Nadel und 1 cc Spritze eignet sich für Mäuse. Und die maximale Lautstärke für die intrakardiale Injektion ist 100 Mikroliter. Wenn Sie die Lösung zeichnen, lassen Sie eine kleine Menge an Luft zwischen den Kolben und das Injektionsmaterial. Dies soll für Blut in die Spritze zu geben, als es ins Herz gelegt wird.

Zu beginnen, das Tier mit Schnüffelstoffen oder injizierbare Anästhetika zu betäuben. Überprüfen Sie die Überlegungen für die Aufrechterhaltung der Narkose in einem anderen Video dieser Kollektion. Als nächstes stellen Sie das Tier in dorsal liegen Position auf einer isolierten Plattform. Dann die Vorderbeine auf die Plattform mit Klebeband und legen Sie ein Stück Klebeband horizontal über den Bauch oberhalb der Hüfte. Dies soll weiter stabilisieren das Tier und jede Bewegung vermeiden, sobald die Nadel eingeführt worden. Als nächstes das Tier nass mit einem Tupfer ' s Brust mit 70 % Alkohol.

An die Injektionsstelle zu ermitteln suchen Sie zuerst die Xiphoid und das Manubrium Sternum. Dann finden Sie den Mittelpunkt zwischen den beiden Wahrzeichen. 1-2 mm links von diesem Punkt ist die Nadel einsetzen Wahrzeichen. Mit einem Applikator Baumwolle Spitze Povidon-Jod, markieren Sie die Einstichstelle der Nadel anwenden.

Zu injizieren, direkt die Nadel senkrecht auf den Tisch, und fügen Sie es in die Tiefe von ca. 2 mm. Wenden Sie dann einen sehr leichten Gegendruck auf den Kolben. Ein leuchtendes rote sauerstoffreiches Blut sollte die Spritze Hub eingeben die richtige Platzierung bestätigt. Halten Sie die Spritze an derselben Stelle und injizieren Sie das Material langsam und stetig im Laufe von 30 bis 60 Sekunden. Schnelle Injektion Verklumpung der Zellen und Verstopfung der Arterien, ein Schock für das System aufgrund der Temperatur des Stoffes deutlich niedriger als die Körpertemperatur oder eine Erweiterung der Ventrikel und Störungen des Herzrhythmus führen kann.

Sobald das Material langsam und vorsichtig die Spritze abgeklungen entfernen die Nadel ohne seitliche Bewegung, die den Herzmuskel schädigen können. Dann sofort lassen Sie das Band aus der Vorderbeine und Bauch und legen Sie das Tier in Bauchlage in einem sauberen Käfig mit tief genug Betten, um wie eine isolierende Schicht zu handeln. Beachten Sie, dass man die Hälfte der Wiederherstellung der Käfig ist auf eine Heizquelle und dem narkotisierten Tier befindet sich auf der beheizten Seite des Käfigs. Dies verhindert, dass Unterkühlung, und wie das Tier erholt sich von der Narkose werden in der Lage, Weg von der beheizten Seite wie gewünscht verschieben.

als nächstes lassen Sie ' s lernen die Methode für die intravenöse Injektion, die unter Verwendung der Retro-Orbital-Plexus bei Ratten. Wieder demonstrieren wir das Verfahren auf eine Maus, aber die Sehenswürdigkeiten und das Protokoll für Ratten ähneln.

Fügen Sie die entsprechende Nadel an der ausgewählten Spritze und füllen Sie das Injektionsmaterial. Denken Sie daran, dass in der Regel würde eine 27-30-Gauge-Nadel verwenden, mit dem kleinstmöglichen Spritze und einem maximalen Volumen von 150 Mikroliter.

, Den Vorgang starten zuerst das Tier zu betäuben. Legen Sie es auf einer ebenen Fläche im seitlichen liegen Stellung. Nun legen Sie den Zeigefinger auf der Oberseite des Kopfes und der Daumen auf den Kiefer und vorsichtig zurückziehen Sie und nach unten. Dies ist zu straffen die Haut und den Augapfel ragen. Achten Sie darauf, nicht üben Druck auf die Luftröhre und Luftstrom zu beschränken. Falls mehrere Injektionen, gelten ophthalmologischen Lokalanästhetikum, wie Tetracaine oder Proparacaine.

Stechen Sie die Nadel in der medialen Augenwinkel des Auges in einem 45°-Winkel zur Nase. Die Tiefe muss ausreichen, um die Bindehaut Gewebe eindringen und voraus in die okuläre Umlaufbahn und in den Sinus. Es sollte nicht die Knochen an der Rückseite der Umlaufbahn auftreten. Um zu vermeiden, zerreißen der Blutgefäße, sicherzustellen Sie, dass die Nadel nur minimale Bewegungen einmal eingefügt hat. Nicht aspirieren Sie, wie, dass die Gefäße zusammenbrechen wird. Injizieren Sie die Artikel in einer langsamen und stetigen Art und Weise. Dann ziehen Sie die Nadel heraus sanft und üben Sie leichten Druck auf das Auge zu Blutungen zu kontrollieren und zur Blutstillung.

zu guter Letzt lassen Sie ' s Beitrag Straßenräuber Injektionsverfahren bei Mäusen und Ratten. Zu starten, fügen die entsprechende Nadel und füllen die Spritze mit der richtigen Lautstärke. Dieses Verfahren kann in bewusste Tieren durchgeführt werden.

Legen Sie das Tier in eine Zurückhaltung Röhre mit einem Hinterfuß isoliert und erweitert durch das Greifen der Haut über dem Knie. Wischen Sie den Fuß mit Wasser oder Alkohol, Schutt vor der Injektion zu entfernen. Um das Blutgefäß zu vermeiden, die die Länge des Fußes verläuft, ist die Injektion Wahrzeichen im Zentrum, aber direkt an der Mittellinie, näher an den Zehen.

Platzieren die Nadel Abschrägung oben an der Injektionsstelle in Richtung der Ferse Regie. Den Artikel zu injizieren, langsam und stetig, rasche Ausdehnung der Fuß Gewebe zu vermeiden. Dadurch wird die Straßenräuber anschwellen wie das Injektionsmaterial diesem subkutanen Raum füllt. Auf einem kleinen Tier ' s Fuß die Schwellung von der Injektion kann bis zur Ferse erweitern, während es bei einem größeren Tier mehr lokalisiert werden.

Nach der Injektion, beobachten die Tiere täglich und wenn anhaltende Schwellung vorhanden ist oder gibt es Verletzungen oder Tumoren durch das experimentelle Protokoll, dann mit einem Bremssattel die Straßenräuber Messung durchführen. Dieses Gerät misst die Fuß Dicke in Millimeter und hilft bei der Quantifizierung der Schwellung.

nun ' s diskutieren ein paar Beispiel-Experimente unter Verwendung intrakardiale, retro Orbital und Straßenräuber Injektionen.

Eine der vielen Anwendungen von intrakardialen Verwaltung ist die Entwicklung von einem Tiermodell der Krebsmetastasen. Hier verwendeten die Forscher diese Route, um Tumorzellen zu injizieren, die Neigung zum Knochen Besiedlung besitzen. In den folgenden Tagen studierte sie Tumorwachstum in Knochen mit Röntgen- und Fluoreszenz bildgebende Verfahren. In einer anderen Studie wurde die Retro-orbitale Route zur spezifische Antikörper zu injizieren, die Neutrophilen zu beschriften. Dann, mit Hilfe der intravitalen Bildgebung, die Wissenschaftler konnten die Migration Muster der markierten Zellen verfolgen.

Schließlich Ermittler oft verwenden Straßenräuber Injektion, um entzündliche Reaktion zu analysieren. In diesem Experiment Forscher peripheren mononukleären Blutzellen aus menschlichem Blutproben isoliert, mit verschiedenen Testantigene gemischt und die Lösungen in das Tier injiziert ' s Straßenräuber. Zu guter Letzt traten sie Fußmaße um die Schwellung Reaktion aufgrund verschiedener Antigene zu quantifizieren.

Sie ' Ve beobachtete, wie Jupiter ' s letzte Rate über die üblichen und spezialisierte zusammengesetzte Verwaltung Techniken.

Nur zur Erinnerung, im ersten Teil haben wir die häufigsten parenterale Route überprüft. Im zweiten Kapitel haben wir die enteralen und aktuellen Verfahren diskutiert. Der dritte Teil behandelt die erste Gruppe von atypischen Vorgehensweisen wie intradermale, intranasale, und Intracranial beim Neugeborenen. Zu guter Letzt hier besprochenen drei zusätzliche Routen, die Biomediziner in Labors für bestimmte Zwecke zu verwenden.

Nach gerade diese Serie ein besseres Verständnis der verschiedenen Verwaltung Techniken man sollte und Sie auch, dass die allgemeinen und spezifischen Überlegungen wissen sollten im Zusammenhang mit diesen Protokollen der zusammengesetzten Verwaltung wie immer, danke für beobachten!

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