复合管理 III

Lab Animal Research

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Overview

来源: 凯斯图尔特, RVT, RLATG, CMAR;瓦莱丽. 施罗德, RVT, RLATG。圣母大学, 在

在实验室小鼠和大鼠中有许多常用的复合用药路线。然而, 某些协议可能需要使用不太常用的路线, 包括皮内、鼻腔和颅内注射。专业培训对于这些程序的成功执行至关重要。为获得机构动物保育和使用委员会 (IACUC) 批准, 可能需要提供这些路线的理由。

Cite this Video

JoVE Science Education Database. 实验动物研究精要. 复合管理 III. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

Intraderma linjections 被送到真皮的外层, 在上层皮肤层 (表皮) 下面。这一注射路线通常是为评估炎症, 皮肤血流诊断, 或过敏反应的抗原.

虽然经常用于局部接种疫苗或充血喷雾, 鼻腔管理也可用于全身和中枢神经系统 (CNS) 分娩。鼻腔内的粘膜具有丰富的血管和神经, 可以快速全身吸收并直接靶向中枢神经系统。由小的亲油性分子组成的物质比含有较大分子的吸收率高得多。 2

虽然此程序不需要麻醉, 但它可以帮助在鼻孔上正确放置该化合物, 确保准确的剂量。已经证明, 与有意识的动物相比, 麻醉动物对大脑的药物传递量增加了五倍。 2 麻醉鼠对鼻腔的管理非常有抵抗力。然而, 有一项研究表明, 有效的分娩技术的鼻腔管理自由运动的大鼠。 3 此外, 警报动物可能会尝试咬住吸管尖端或针头, 使物质的传递困难.

鼻腔管理的优点是, 这种技术需要最少的训练和技能, 它是无创性的动物。然而, 由于可能的雾化, 使用生物安全柜和眼睛保护建议, 特别是当与有意识的动物工作。此外, 为了避免淹没动物, 最小剂量的可能应该使用。如果在这个过程中的任何时候, 紫绀, 口腔呼吸, 或其他痛苦的迹象在动物看到, 程序应立即流产.

成年小鼠和大鼠的颅内注射采用立体定向设备, 以确保注射的正确定位和深度。然而, 在小鼠3到28天的年龄, 和大鼠14天的年龄, 头骨是薄足以直接通过它注射;它太脆弱了, 不能支持立体定位装置。鼠或鼠幼崽应留与母亲, 直到程序, 并应尽快返回给她的程序完成后。Postinjection 护理包括对热源的持续监测, 直到观察到正常的运动和行为, 包括护理。使用这种技术的主要原因是为中枢神经系统提供药理学药物, 这就需要越过血脑屏障, 或避免系统性途径的影响。 1

Procedure

1. 皮内管理

  1. 大多数皮内注射是基化合物。解决方案必须在生理学上进行缓冲, 以获得中性的 pH 值, 以避免注射部位出现组织坏死.
  2. 针的大小范围是25-30 计, 最小的可能.
  3. 每个注射场的剂量范围是50-100 和 #181; 注射过量可能导致注射部位坏死, 或由于压力而在现场漏出该化合物.
  4. 为了准确地将针放置到皮内空间, 必须对小鼠和老鼠进行麻醉。吸入麻醉可以快速诱导和恢复;然而, 注射麻醉的好处是提供充足的时间来准备该地区和执行注射。 1
  5. 通过使用脱毛的奶油或通过剃须区域来删除注射部位的毛发。
  6. 彻底清除任何残留的脱毛膏或毛发碎片.
  7. 应用外用防腐剂, 如碘溶液、洗必泰溶液或酒精.
  8. 管理过程
    1. 在拇指和食指之间拉伸皮肤绷紧。这为皮肤定位针时提供了稳定性.
    2. 将针锥放在皮肤上.
    3. 轻轻地将针插入表皮和真皮之间的皮肤。前进的针刚刚超越斜面.
    4. 慢慢地注入物质。注射的化合物将产生水泡, 或小水泡, 在皮肤.
    5. 在注射后暂停, 以允许皮肤在取出针头前进行拉伸和调整.
  9. 注意事项
    1. 不需要在柱塞上拉回.
    2. 如果针插入皮下间隙, 则不形成疱疹。注射太深导致皮下注射.
    3. 避免印迹或擦拭区域, 因为这会导致化合物从注射场泄漏.
    4. 在执行多次注入时, 请将其间距, 使泡不重叠.

Figure 1
图1。小鼠皮内注射.

2. 鼻腔管理

  1. 设备
    1. 使用可校准的 micropipetting 单元吸管以提供精确的音量.
    2. 一次性吸管提示应用于避免交叉污染。TB 注射器、钝针和挠性导管也可用于配料.
    3. 大鼠总注射量不应超过40-100 和 #181; l, 应在6-10 和 #181 中给出; 我滴下对于小鼠, 最大总容积为24和 #181; l, 在3-4 和 #181 中给出; 我滴下.
  2. 有意识的动物管理
    1. 有意识动物中的手动约束要求头部相对静止, 以便将吸管尖端或钝针放在足够靠近鼻孔的位置以交付化合物, 但不那么接近用来戳或撕裂鼻腔组织.
    2. 抑制动物并将其保持在垂直位置.
    3. 在鼻腔开口处放置一小滴液体化合物。动物应该吸入水滴.
    4. 管理一个额外的卷, 交替鼻孔, 直到整个卷被给出.
    5. 在管理较大的卷时, 在限制时不收缩胸腔是很重要的。胸部压迫会阻碍动物进行足够深的呼吸, 使液体吸入支气管和肺部.

Figure 2
图2。有意识小鼠的鼻腔管理.

  1. 无意识动物中的管理使用吸入麻醉剂, 可以在该化合物的处理和交付过程中允许固定的动物。这就消除了动物咬药设备的可能性, 由于头部抽搐造成的化合物的损失, 以及动物和 #39; 鼻组织, 眼睛或脸部皮肤的损伤。该动物也不太可能吸吸和喷雾的化合物从鼻孔后管理.
  2. 将动物置于仰卧位。头部的位置会影响溶液在鼻孔中的放置。结果表明, 理想的中枢神经系统的位置是与动物仰卧;这样可以更好地吸收。 2
  3. 将一半的化合物直接插入鼻腔开口的一侧, 并定时吸入。然后, 把动物翻过来.
  4. 如上所示, 将另一半的音量管理到另一个鼻腔开口.

Figure 3
图3。无意识小鼠的鼻腔管理.

3. 新生鼠和老鼠的颅内管理

  1. 小鼠或大鼠必须麻醉颅内注射.
0-5 14-28 25 0-4 7-14 3 4-7 21-28 5 (和 #181; 、
鼠标 Rat
年龄 (天) 针形计 (g) 时间 (天) 针计 (g)
0-7 29-30 27-29
7-14 27 25-27
10-14 25
时间 (天数) 针长度 (mm) 时间 (天) 针长 (mm)
0-7 2 2-3
3
14-21 4 4
10-14 5
时间 (天) 卷 (天) 时间 (日期) (#181) 0-5 和 #60; 20 #60; 20
6-20 #60; 60 4-10 & #60; 60
20-28 #60; 100 11-14 #60; 100

表1。针规, 针长和根据小鼠和大鼠的年龄, 颅内管理的最大容积。 4

  1. 设备
    1. 根据 表 1 确定正确的针距和最大管理量.
    2. 在麻醉之前准备一个针头保护.
      注: 针的注射深度是通过使用针帽所产生的护罩来控制的。
      1. 要创建防护针, 可对针帽进行测量, 并在帽上放置一个标记以指示要剪切的位置。应作出削减, 使2至5毫米的针头被暴露时, 在针上更换的上限.
      2. 暴露的针头长度必须足够长才能穿透皮肤和头骨, 并达到大脑所需的深度.
      3. 鼠标和老鼠所需的针长度列在 表 1 中.
    3. 需要加热源来防止幼崽的体温过低。有几种类型: 电加热垫设置在低, 循环水毯, 或可重复使用的化学反应热袋.
  2. 限制
    1. 鼠标和大鼠幼崽10天或更小的年龄不需要麻醉这个程序。通过把它们放在头后, 并拉动皮肤尾, 以施加轻微的压力, 以手动方式抑制他们的肩膀.
    2. 麻醉幼崽超过10天的年龄与异氟醚吸入。将感应室连接到精密汽化器或用异氟醚浸泡棉球的钟罐中。一旦幼犬被固定, 麻醉是有效的大约40秒, 这为注射提供了充足的时间.
  3. 注塑技术
    1. 将物质放入注射器中, 并将瓶盖/针指南置于针头上.
    2. 推荐的注射量为每只新生鼠或大鼠的最大容积为100和 #181; 而对于断奶或年长的老鼠, 则为300和 #181; l.
    3. 注射入新生儿大脑皮层, 在眼球后插入5毫米的针, 大约3毫米的头骨的中线.
    4. 断奶小鼠的注射部位大约是眼睛和耳朵之间的一半, 而只是中线.

Figure 4
图4。颅内管理在老鼠的小狗.

有时, 不同的实验方法必须使用较不常见的复合管理路径。皮内、鼻腔和颅内是生物医学研究人员今天在实验室中使用的三种替代路线.

正如他们的名字所示, 皮内是将化合物送到真皮的外层。鼻腔是放置在动物和 #39 的解决方案鼻孔。颅内包括将针头直接插入啮齿动物和 #39 的大脑.

专业培训是成功执行这些过程所必需的。在这里, 我们和 #39; 首先, 我们将说明这些方法的注意事项, 然后我们将演示这些技术, 帮助您学习过程, 同时确保动物的安全和实验的成功.

让与 #39; s 首先讨论这些路由通常是何时使用的, 以及在开始执行这些专门的管理技术之前应牢记的事项.

皮内注射被用来将一篇文章送到表皮和真皮之间的空间这条路线通常是用来评估炎症, 皮肤血流诊断, 或对抗原的过敏反应。与其他路线类似, 皮内溶液也应使用无菌技术来制备。它必须在生理学上缓冲, 以获得中性的 pH 值, 以避免在注射部位组织坏死。一个无轮毂系统的25-30 针通常用于此注射。这个系统有助于保持管理量, 这是在50-100 升每个注射网站的范围。注射过量会导致坏死或不良的复合渗漏, 由于压力.

鼻腔通道通常选择用于局部接种疫苗或充血喷雾, 以及系统性和中枢神经系统分娩。鼻腔内的粘膜具有丰富的血管和神经, 可以快速全身吸收并直接靶向中枢神经系统。这是一种非侵入性的方法, 需要最少的训练和技能, 和简单的设备-校准微和一些一次性小费。大鼠的管理量不应超过40-100 升在6-10 升下降。对于小鼠, 最大总体积为24升, 在3-4 升滴.

虽然此程序不需要麻醉, 但它在有意识的动物中有优于鼻腔管理的优点 1) 它有助于在鼻孔正确放置化合物, 确保准确的剂量 2) 消除了可能动物咬药设备 3) 确保没有损伤的动物和 #39; 鼻组织, 眼睛, 或面部皮肤由于抽搐的头部, 和 4) 动物是不太可能的 snort 和喷雾的化合物从鼻孔后管理.

成人小鼠和大鼠的颅内注射采用立体定向设备, 这是在 #34 的视频中描述的; 神经科学和 #34 的要点; 收藏该设备确保正确的定位和正确的注射深度。在这里, 我们将重点关注颅内分娩的新生鼠和大鼠的头骨是足够薄, 以直接通过它注射, 可能是太脆弱, 以支持立体定向装置。这项技术的主要目的是将中枢神经系统的药理药物直接送到 cns, 并避免通过任何系统性途径所产生的影响。根据幼崽的种类和年龄确定了针规、长度和管理量。请注意, 随着动物和 #39 的年龄增加, 测量数量减少, 所需的针长增加, 建议的最大管理量也增加.

在此背景信息的基础上, 让与 #39; 我们深入研究这些注入方法的过程。首先是皮内管理技术。这一程序必须在麻醉动物中进行。查看本集合中的其他视频, 了解麻醉诱导和维护的过程.

一旦该动物被麻醉, 使用电动剃须刀或脱毛霜将注射部位剃须。用一个 water-dampened 纱布, 彻底删除从网站挥之不去的头发。然后, 用另一个纱布垫, 适用于剃须区域的外用防腐溶液。为管理, 首先稳定 t他通过在你的拇指和食指之间伸展来在注射部位皮肤.

现在, 将针锥放在皮肤上, 然后轻轻地将其插入到斜面的上方, 以便在表皮和真皮层之间打开。然后慢慢地注射, 注意到它会在皮肤上产生疱疹。如果针头插入得太深, 则不会形成水泡。注射后, 暂停, 让皮肤伸展和调整, 然后慢慢撤回针。不要在任何时候拉回柱塞, 因为你会在注射部位引起损伤。此外, 请勿擦拭或涂抹注射部位, 因为这可能导致注入的物质泄漏。在执行多次注射时, 一定要将它们分开足够宽, 以便泡不会相互重叠.

下一步, 让 & #39; 我们学习有意识和麻醉动物的鼻腔管理程序.

对于醒着的动物, 通过 scruffing 颈部的皮肤来抑制它们, 然后将动物固定在直立的位置。小心不要收紧胸腔, 因为这可能会阻碍动物和 #39; 能够采取足够深的呼吸, 把液体吸入肺部。使用微, 通过在鼻腔开口处放置一小滴液体来管理部分溶液。动物会吸入水滴。重复这一过程, 在两个鼻腔开口之间交替, 直到被管理的整个音量被给出。召回--管理总量不应超过24和 #956; l 和 100 #956; l 分别在小鼠和大鼠体内.

对麻醉小鼠和大鼠, 将动物置于背卧床位置。这个位置是理想的中枢神经系统交付, 因为它可以更好地吸收化合物。旋转的动物和 #39 的头部和管理的一半的化合物直接进入一侧的鼻腔开放, 定时与吸入。然后, 将动物和 #39 的头部旋转到下一届政府的位置。在2次呼吸之后, 将剩余的音量管理到第二个鼻腔开口。在完成管理后, 将动物交还给它的笼子.

下一步, 让 & #39; s 检查新生儿和大鼠的颅内管理程序 。在开始这个过程之前, 把笼子与幼崽和水坝放在一个电加热垫设置为低。确保笼子的一部分在暖气垫上。这是为了防止体温过低, 同时, 如果大坝需要, 也可以让水坝远离酷热。接下来, 选择适合动物年龄的针规。召回, 针规;针长, 用于控制颅内注射时针的深度;和管理的数量, 都随着动物和 #39 的年龄和种类而变化.

长度是使用保护器调整的。准备这个卫兵, 测量正确的针反对它的盖帽并且做标记。接下来, 在 cap 上放置第二个标记, 以指示它将被剪切到的位置。两个标记之间的距离是所需的针长度。然后, 用刀片剪下盖子。不要使用剪刀, 因为他们将粉碎的上限, 不会产生一个干净的水平削减。这是 #34; 针卫队. 和 #34; 处理用于创建防护的针头, 因为它不再是无菌的, 而是将一个新的针头插入到防护中, 并确保暴露了正确的长度。接下来, 用不同的针头附着在合适的注射器上, 抽取注射物。一个不同的针头是用来做这一点, 因为放置到塞子将大大沉闷这些罚款针, 这是不理想的颅内管理。然后, 将填充的注射器放在针头上, 用防护针。现在系统已准备好注入.

对于超过10天龄的幼犬, 进行吸入麻醉。小于10天龄的幼崽不需要麻醉。要执行注射, 首先找到该网站, 这是5毫米背后的眼睛和约3毫米的中线的头骨。接下来, 将针插入针的深度允许的针头。然后, 以缓慢稳定的方式注射, 以避免脑外伤。立即取出针, 并非常小心, 以防止损伤脑组织。最后, 将动物放回大坝, 以便进行适当的恢复.

现在让 & #39; s 审查今天在实验室进行的一些实验, 利用这些不寻常的管理途径.

皮内注射常用于研究皮肤炎症反应。在这个实验中, 研究人员用这种方法将一只耳朵和一个中性物质注入一个 pre-sensitized 的老鼠的另一只耳朵。接下来, 他们将蓝色染料送到动物和 #39 的循环系统中, 以检测过敏原注射液引起的血管通透性的变化.

如前所述, 鼻腔管理的一个应用是管理疫苗。在这里, 科学家们利用这条途径将一种转基因的、活的减毒流感疫苗提供给野生型和转基因小鼠, 并通过生产一种特定类型的 T 细胞来研究黏膜免疫.

最后, 这些生物医学研究利用颅内管理在免疫缺陷小鼠体内植入癌细胞, 以建立人脑肿瘤模型。然后利用活体成像系统对注射剂的疗效进行了分析.

您已强制观看了朱庇特和 #39; s 视频关于实验室小鼠和大鼠复合用药的一些特殊方法。现在, 您应该了解这些程序何时有用, 在执行这些技术之前和同时应牢记的事项, 以及确保管理对动物和 #39 的影响的基本程序步骤;健康和收集的实验数据。一如既往, 感谢收看!

Summary

对动物的化合物进行管理可以对动物的福祉和实验数据的结果和科学价值产生重大影响。正确的分娩方式对实验的成功至关重要。必须考虑许多因素来确定最佳路线, 包括研究的科学目的、物质的 pH 值、所需的剂量量、物质的黏度以及动物的福祉。技术专长也是所有注塑方法的要求.

References

  1. Turner, P.V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., and Brabb, T. 2011. Administration of substances to laboratory animals: equipment and considerations, vehicle selection, and solution preparation. JAALAS. 50: 614-627.
  2. Dhuria, S.V., Hanson, L.R., and Frey II, W.H. 2010. Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations. Journal of Pharmaceutical Sciences. 99: 1654-1673.
  3. Stevens, J., Suidgeest, E, Van der Graaf, P.H., Danhof, M., and De Lange, E.C. 2008. Development and evaluation of a new, minimal-stress animal model for intranasal administration in freely moving rats. Poster presentation at American Association of Pharmaceutical Scientists Annual Meeting, Atlanta, Georgia.
  4. Morton, D.A., Jennings, M., Buckwell, A., Ewbank, R., Godfrey, C., Holgate, B., Inglis, I., James, R., Page, C., Sharman, I., Verschoyle, R., Westall, L., and Wilson, A.B. 2001. Refining procedures for the administration of substances Report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Members of the Joint Working Group on Refinement. Laboratory Animals. 35: 1-41.

1. 皮内管理

  1. 大多数皮内注射是基化合物。解决方案必须在生理学上进行缓冲, 以获得中性的 pH 值, 以避免注射部位出现组织坏死.
  2. 针的大小范围是25-30 计, 最小的可能.
  3. 每个注射场的剂量范围是50-100 和 #181; 注射过量可能导致注射部位坏死, 或由于压力而在现场漏出该化合物.
  4. 为了准确地将针放置到皮内空间, 必须对小鼠和老鼠进行麻醉。吸入麻醉可以快速诱导和恢复;然而, 注射麻醉的好处是提供充足的时间来准备该地区和执行注射。 1
  5. 通过使用脱毛的奶油或通过剃须区域来删除注射部位的毛发。
  6. 彻底清除任何残留的脱毛膏或毛发碎片.
  7. 应用外用防腐剂, 如碘溶液、洗必泰溶液或酒精.
  8. 管理过程
    1. 在拇指和食指之间拉伸皮肤绷紧。这为皮肤定位针时提供了稳定性.
    2. 将针锥放在皮肤上.
    3. 轻轻地将针插入表皮和真皮之间的皮肤。前进的针刚刚超越斜面.
    4. 慢慢地注入物质。注射的化合物将产生水泡, 或小水泡, 在皮肤.
    5. 在注射后暂停, 以允许皮肤在取出针头前进行拉伸和调整.
  9. 注意事项
    1. 不需要在柱塞上拉回.
    2. 如果针插入皮下间隙, 则不形成疱疹。注射太深导致皮下注射.
    3. 避免印迹或擦拭区域, 因为这会导致化合物从注射场泄漏.
    4. 在执行多次注入时, 请将其间距, 使泡不重叠.

Figure 1
图1。小鼠皮内注射.

2. 鼻腔管理

  1. 设备
    1. 使用可校准的 micropipetting 单元吸管以提供精确的音量.
    2. 一次性吸管提示应用于避免交叉污染。TB 注射器、钝针和挠性导管也可用于配料.
    3. 大鼠总注射量不应超过40-100 和 #181; l, 应在6-10 和 #181 中给出; 我滴下对于小鼠, 最大总容积为24和 #181; l, 在3-4 和 #181 中给出; 我滴下.
  2. 有意识的动物管理
    1. 有意识动物中的手动约束要求头部相对静止, 以便将吸管尖端或钝针放在足够靠近鼻孔的位置以交付化合物, 但不那么接近用来戳或撕裂鼻腔组织.
    2. 抑制动物并将其保持在垂直位置.
    3. 在鼻腔开口处放置一小滴液体化合物。动物应该吸入水滴.
    4. 管理一个额外的卷, 交替鼻孔, 直到整个卷被给出.
    5. 在管理较大的卷时, 在限制时不收缩胸腔是很重要的。胸部压迫会阻碍动物进行足够深的呼吸, 使液体吸入支气管和肺部.

Figure 2
图2。有意识小鼠的鼻腔管理.

  1. 无意识动物中的管理使用吸入麻醉剂, 可以在该化合物的处理和交付过程中允许固定的动物。这就消除了动物咬药设备的可能性, 由于头部抽搐造成的化合物的损失, 以及动物和 #39; 鼻组织, 眼睛或脸部皮肤的损伤。该动物也不太可能吸吸和喷雾的化合物从鼻孔后管理.
  2. 将动物置于仰卧位。头部的位置会影响溶液在鼻孔中的放置。结果表明, 理想的中枢神经系统的位置是与动物仰卧;这样可以更好地吸收。 2
  3. 将一半的化合物直接插入鼻腔开口的一侧, 并定时吸入。然后, 把动物翻过来.
  4. 如上所示, 将另一半的音量管理到另一个鼻腔开口.

Figure 3
图3。无意识小鼠的鼻腔管理.

3. 新生鼠和老鼠的颅内管理

  1. 小鼠或大鼠必须麻醉颅内注射.
0-5 14-28 25 0-4 7-14 3 4-7 21-28 5 (和 #181; 、
鼠标 Rat
年龄 (天) 针形计 (g) 时间 (天) 针计 (g)
0-7 29-30 27-29
7-14 27 25-27
10-14 25
时间 (天数) 针长度 (mm) 时间 (天) 针长 (mm)
0-7 2 2-3
3
14-21 4 4
10-14 5
时间 (天) 卷 (天) 时间 (日期) (#181) 0-5 和 #60; 20 #60; 20
6-20 #60; 60 4-10 & #60; 60
20-28 #60; 100 11-14 #60; 100

表1。针规, 针长和根据小鼠和大鼠的年龄, 颅内管理的最大容积。 4

  1. 设备
    1. 根据 表 1 确定正确的针距和最大管理量.
    2. 在麻醉之前准备一个针头保护.
      注: 针的注射深度是通过使用针帽所产生的护罩来控制的。
      1. 要创建防护针, 可对针帽进行测量, 并在帽上放置一个标记以指示要剪切的位置。应作出削减, 使2至5毫米的针头被暴露时, 在针上更换的上限.
      2. 暴露的针头长度必须足够长才能穿透皮肤和头骨, 并达到大脑所需的深度.
      3. 鼠标和老鼠所需的针长度列在 表 1 中.
    3. 需要加热源来防止幼崽的体温过低。有几种类型: 电加热垫设置在低, 循环水毯, 或可重复使用的化学反应热袋.
  2. 限制
    1. 鼠标和大鼠幼崽10天或更小的年龄不需要麻醉这个程序。通过把它们放在头后, 并拉动皮肤尾, 以施加轻微的压力, 以手动方式抑制他们的肩膀.
    2. 麻醉幼崽超过10天的年龄与异氟醚吸入。将感应室连接到精密汽化器或用异氟醚浸泡棉球的钟罐中。一旦幼犬被固定, 麻醉是有效的大约40秒, 这为注射提供了充足的时间.
  3. 注塑技术
    1. 将物质放入注射器中, 并将瓶盖/针指南置于针头上.
    2. 推荐的注射量为每只新生鼠或大鼠的最大容积为100和 #181; 而对于断奶或年长的老鼠, 则为300和 #181; l.
    3. 注射入新生儿大脑皮层, 在眼球后插入5毫米的针, 大约3毫米的头骨的中线.
    4. 断奶小鼠的注射部位大约是眼睛和耳朵之间的一半, 而只是中线.

Figure 4
图4。颅内管理在老鼠的小狗.

有时, 不同的实验方法必须使用较不常见的复合管理路径。皮内、鼻腔和颅内是生物医学研究人员今天在实验室中使用的三种替代路线.

正如他们的名字所示, 皮内是将化合物送到真皮的外层。鼻腔是放置在动物和 #39 的解决方案鼻孔。颅内包括将针头直接插入啮齿动物和 #39 的大脑.

专业培训是成功执行这些过程所必需的。在这里, 我们和 #39; 首先, 我们将说明这些方法的注意事项, 然后我们将演示这些技术, 帮助您学习过程, 同时确保动物的安全和实验的成功.

让与 #39; s 首先讨论这些路由通常是何时使用的, 以及在开始执行这些专门的管理技术之前应牢记的事项.

皮内注射被用来将一篇文章送到表皮和真皮之间的空间这条路线通常是用来评估炎症, 皮肤血流诊断, 或对抗原的过敏反应。与其他路线类似, 皮内溶液也应使用无菌技术来制备。它必须在生理学上缓冲, 以获得中性的 pH 值, 以避免在注射部位组织坏死。一个无轮毂系统的25-30 针通常用于此注射。这个系统有助于保持管理量, 这是在50-100 升每个注射网站的范围。注射过量会导致坏死或不良的复合渗漏, 由于压力.

鼻腔通道通常选择用于局部接种疫苗或充血喷雾, 以及系统性和中枢神经系统分娩。鼻腔内的粘膜具有丰富的血管和神经, 可以快速全身吸收并直接靶向中枢神经系统。这是一种非侵入性的方法, 需要最少的训练和技能, 和简单的设备-校准微和一些一次性小费。大鼠的管理量不应超过40-100 升在6-10 升下降。对于小鼠, 最大总体积为24升, 在3-4 升滴.

虽然此程序不需要麻醉, 但它在有意识的动物中有优于鼻腔管理的优点 1) 它有助于在鼻孔正确放置化合物, 确保准确的剂量 2) 消除了可能动物咬药设备 3) 确保没有损伤的动物和 #39; 鼻组织, 眼睛, 或面部皮肤由于抽搐的头部, 和 4) 动物是不太可能的 snort 和喷雾的化合物从鼻孔后管理.

成人小鼠和大鼠的颅内注射采用立体定向设备, 这是在 #34 的视频中描述的; 神经科学和 #34 的要点; 收藏该设备确保正确的定位和正确的注射深度。在这里, 我们将重点关注颅内分娩的新生鼠和大鼠的头骨是足够薄, 以直接通过它注射, 可能是太脆弱, 以支持立体定向装置。这项技术的主要目的是将中枢神经系统的药理药物直接送到 cns, 并避免通过任何系统性途径所产生的影响。根据幼崽的种类和年龄确定了针规、长度和管理量。请注意, 随着动物和 #39 的年龄增加, 测量数量减少, 所需的针长增加, 建议的最大管理量也增加.

在此背景信息的基础上, 让与 #39; 我们深入研究这些注入方法的过程。首先是皮内管理技术。这一程序必须在麻醉动物中进行。查看本集合中的其他视频, 了解麻醉诱导和维护的过程.

一旦该动物被麻醉, 使用电动剃须刀或脱毛霜将注射部位剃须。用一个 water-dampened 纱布, 彻底删除从网站挥之不去的头发。然后, 用另一个纱布垫, 适用于剃须区域的外用防腐溶液。为管理, 首先稳定 t他通过在你的拇指和食指之间伸展来在注射部位皮肤.

现在, 将针锥放在皮肤上, 然后轻轻地将其插入到斜面的上方, 以便在表皮和真皮层之间打开。然后慢慢地注射, 注意到它会在皮肤上产生疱疹。如果针头插入得太深, 则不会形成水泡。注射后, 暂停, 让皮肤伸展和调整, 然后慢慢撤回针。不要在任何时候拉回柱塞, 因为你会在注射部位引起损伤。此外, 请勿擦拭或涂抹注射部位, 因为这可能导致注入的物质泄漏。在执行多次注射时, 一定要将它们分开足够宽, 以便泡不会相互重叠.

下一步, 让 & #39; 我们学习有意识和麻醉动物的鼻腔管理程序.

对于醒着的动物, 通过 scruffing 颈部的皮肤来抑制它们, 然后将动物固定在直立的位置。小心不要收紧胸腔, 因为这可能会阻碍动物和 #39; 能够采取足够深的呼吸, 把液体吸入肺部。使用微, 通过在鼻腔开口处放置一小滴液体来管理部分溶液。动物会吸入水滴。重复这一过程, 在两个鼻腔开口之间交替, 直到被管理的整个音量被给出。召回--管理总量不应超过24和 #956; l 和 100 #956; l 分别在小鼠和大鼠体内.

对麻醉小鼠和大鼠, 将动物置于背卧床位置。这个位置是理想的中枢神经系统交付, 因为它可以更好地吸收化合物。旋转的动物和 #39 的头部和管理的一半的化合物直接进入一侧的鼻腔开放, 定时与吸入。然后, 将动物和 #39 的头部旋转到下一届政府的位置。在2次呼吸之后, 将剩余的音量管理到第二个鼻腔开口。在完成管理后, 将动物交还给它的笼子.

下一步, 让 & #39; s 检查新生儿和大鼠的颅内管理程序 。在开始这个过程之前, 把笼子与幼崽和水坝放在一个电加热垫设置为低。确保笼子的一部分在暖气垫上。这是为了防止体温过低, 同时, 如果大坝需要, 也可以让水坝远离酷热。接下来, 选择适合动物年龄的针规。召回, 针规;针长, 用于控制颅内注射时针的深度;和管理的数量, 都随着动物和 #39 的年龄和种类而变化.

长度是使用保护器调整的。准备这个卫兵, 测量正确的针反对它的盖帽并且做标记。接下来, 在 cap 上放置第二个标记, 以指示它将被剪切到的位置。两个标记之间的距离是所需的针长度。然后, 用刀片剪下盖子。不要使用剪刀, 因为他们将粉碎的上限, 不会产生一个干净的水平削减。这是 #34; 针卫队. 和 #34; 处理用于创建防护的针头, 因为它不再是无菌的, 而是将一个新的针头插入到防护中, 并确保暴露了正确的长度。接下来, 用不同的针头附着在合适的注射器上, 抽取注射物。一个不同的针头是用来做这一点, 因为放置到塞子将大大沉闷这些罚款针, 这是不理想的颅内管理。然后, 将填充的注射器放在针头上, 用防护针。现在系统已准备好注入.

对于超过10天龄的幼犬, 进行吸入麻醉。小于10天龄的幼崽不需要麻醉。要执行注射, 首先找到该网站, 这是5毫米背后的眼睛和约3毫米的中线的头骨。接下来, 将针插入针的深度允许的针头。然后, 以缓慢稳定的方式注射, 以避免脑外伤。立即取出针, 并非常小心, 以防止损伤脑组织。最后, 将动物放回大坝, 以便进行适当的恢复.

现在让 & #39; s 审查今天在实验室进行的一些实验, 利用这些不寻常的管理途径.

皮内注射常用于研究皮肤炎症反应。在这个实验中, 研究人员用这种方法将一只耳朵和一个中性物质注入一个 pre-sensitized 的老鼠的另一只耳朵。接下来, 他们将蓝色染料送到动物和 #39 的循环系统中, 以检测过敏原注射液引起的血管通透性的变化.

如前所述, 鼻腔管理的一个应用是管理疫苗。在这里, 科学家们利用这条途径将一种转基因的、活的减毒流感疫苗提供给野生型和转基因小鼠, 并通过生产一种特定类型的 T 细胞来研究黏膜免疫.

最后, 这些生物医学研究利用颅内管理在免疫缺陷小鼠体内植入癌细胞, 以建立人脑肿瘤模型。然后利用活体成像系统对注射剂的疗效进行了分析.

您已强制观看了朱庇特和 #39; s 视频关于实验室小鼠和大鼠复合用药的一些特殊方法。现在, 您应该了解这些程序何时有用, 在执行这些技术之前和同时应牢记的事项, 以及确保管理对动物和 #39 的影响的基本程序步骤;健康和收集的实验数据。一如既往, 感谢收看!

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