カラム ・ クロマトグラフィ

Organic Chemistry

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Overview

ソース: 博士ジミー フランコ - メリマック大学講座

カラムクロマトグラフィーは、化合物を浄化するための最も有用な技術のひとつです。充填したカラム固定相と移動相列を通過するこのテクニックを利用します。この手法は、facilely 分離する分子を許可する化合物の極性の違いを利用します。1カラム ・ クロマトグラフィ用の 2 つの最も一般的な固定相がシリカゲル (SiO2) とアルミナ (Al2O3)、最もよく使用される移動相溶媒をされています。2移動相の選択 solvent(s) は、精製されている分子の極性に依存しています。通常より極性化合物が固定相での分子の通過を容易にするためより多くの極性溶媒を必要です。浄化プロセスが完了したら、溶媒は分離材料を行うロータリーエバポレーターを使用して収集した分数から削除できます。

Cite this Video

JoVE Science Education Database. 有機化学の必需品 . カラム ・ クロマトグラフィ. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

サンプル混合物を列上に配置し、固定相の上に吸収されます。その後、移動相は列に適用し、固定相を混合物を溶出するために使用します。カラム ・ クロマトグラフィを悪用分子の極性化合物を分離します。極性の違いは、分子が互いから化合物を効率よく分離列を介して旅行料金に差異をもたらします。移動相は、それをこのように分離および化合物の精製を可能にする列を示して、試験管で小さな分数に収集されます。最後に、分離の化合を行うロータリーエバポレーターを使用して溶媒を除去します。

カラム ・ クロマトグラフィの汎用性と利便性、いる化合物を浄化するため最も広く使用されている手法の一つ。再結晶 (別はよく精製技術を使用) とは異なり、化合物の精製カラム ・ クロマトグラフィとは固体であるありません。カラム ・ クロマトグラフィ数混合物から化合物を分離する能力です。カラムクロマトのもう一つの利点はほとんど合成または、化合についてほとんど知られていないが、新規化合物を分離するとき非常に貴重なこの手法を作る、この浄化方法を使用するために化合物の物性について知られている必要があります。

溶剤

その化合物が列通過する率が利用されている移動相に大きく依存です。通常より極性溶剤高速化合物がカラムに通します。極性溶媒より急速に溶出する化合物を許可する、化合と固相との間の相互作用を制限する固相の高い親和性があります。カラム ・ クロマトグラフィの選択溶媒系が混合物中の化合物の間の分離を作成する適切な極性であることを確認するには、注意が必要です。溶媒の選択は正常な分離カラム ・ クロマトグラフィを使用することが重要です。最適な溶媒システムを識別するために一連の薄層クロマトグラフィー (TLC) 実験は列クロマトグラフィーの実験を実行する前に行われなければなりません。いくつかのケースでは、バイナリの溶媒システムを使用する必要があります。

溶剤システムを選択します。

  1. 0.2-0.3 TLC プレート上の目的化合物の間遅延係数 (Rf ) を生成する溶媒システムを識別します。
  2. TLC 実験のための移動相として酢酸エチルまたはジクロロ メタンのいずれかで起動します。
    1. Rfの 0.3 を超える場合は、ヘキサンなどの以下の極性溶媒をみてください。Rfが 0.2 未満の場合は、メタノールなどの極性溶媒の少量を追加してください。
    2. 最適な溶媒系は、2 つの溶媒の混合物を必要があります。
    3. シリカ列の移動相として慎重な使用よりも 10% メタノールであります。

Procedure

1 シリカゲル スラリー

  1. シリカゲルを三角フラスコに注ぐ。包装材の重量も約 50 倍、分離されているサンプル。分離されている化合物は、非常によく似たRf値を持つ、それは大量のサンプルは、この例では、あたりのシリカを使用してを必要があります。
    1. 三角フラスコ、50 mg のサンプル (45 mg フルオレノンのテトラフェニルポルフィリンの 5 mg) が分離されているので中のシリカの場所 10 g。
  2. 溶剤システムを追加 (ヘキサン/ジクロロ メタン 70%: 30%) シリカゲルを含むエルレンマイヤー フラスコに。シリカゲルのすべてがよく溶媒和であることを確認する十分な溶媒を追加します。シリカは分解しないが、とき、混合物は視覚的に顕著なる溶媒和。溶媒が追加された後、シリカのすべてがよく溶媒和ように三角フラスコを旋回します。

2. 列の準備

  1. 適切なサイズの列を選択します。通常シリカゲル スラリーの約半分の方法列を入力する必要があります。精製されているサンプルのサイズを大きくより大きい列が必要です。
  2. グラスウールの切れ端で列の下部に差し込みます。長い棒を使用して、ウールが、活栓のすぐ上の列の下部に詰まってしっかりとを確認します。
  3. ウールはしっかりと後、は、グラスウールの上砂の薄い層を適用します。
    注:活栓上記ガラスフリット列が装備されている場合は、この手順を省略されなければなりません。
  4. リング スタンドに縦位置で列を固定します。
  5. 目標到達プロセスを使用して、優しく注ぎ準備スラリー状シリカゲルの列。三角フラスコから列にスラリーを転送する追加溶媒を追加する必要があります。ピペットを使用して、列の両側にスティック任意のシリカゲルを洗います。
    1. シリカゲル列で定着しつつあると優しくシリカゲル パックをしっかりと、空気の泡を除くことを確認する列の側面をタップします。
  6. 活栓を開き、シリカゲルと溶媒フロント ミート前だけまでに、きれいな三角フラスコに流出し溶媒を許可します。シリカゲルには、プロシージャが完了するまでに決して乾燥行く必要があります。
  7. シリカゲル (図 1) の上に砂の薄層を配置します。ピペットを使用して、列の両側に立ち往生している可能性があります任意の砂を洗います。
  8. 砂は、乾燥するまでが、シリカゲル層にない追加溶剤を排出します。

Figure 1
図 1。カラム ・ クロマトグラフィの適切なセットアップは、サンプル添加する前に試してみてください。

3 列にサンプルを追加

  1. (シリカゲル スラリーのために使用された同じ溶剤を使用して) 可能な溶媒の少量のサンプルを溶解します。
  2. 列の上部にサンプルを追加そっとピペットを使用して。
  3. サンプルは、列の上部に適用されている、一度活栓を開き、砂の層がないシリカゲル層を通って流出する溶剤を許可します。上下に列の側面にしがみついている可能性があります任意のサンプルを洗浄する溶剤量が非常に少ないを使用します。砂層にもこの追加溶剤を排出します。

4. 列を通して試料の溶出

  1. 砂の層を妨げないような方法で 4-5 mL の溶媒を追加ピペットを使用して、非常に穏やか。
  2. 列の上部に漏斗を置き、非常にゆっくりと優しく溶媒と列の残りの部分を埋めます。
  3. 活栓を開き、列を通って流出する溶剤を許可します。
  4. 試験管に列から排水溝のように移動相を収集を開始します。
    1. 試験管は、順次テスト チューブのラックに配置する必要があります。
  5. すべての必要な化合物がカラムから溶出されるまで必要に応じて列の上部に追加溶媒を追加します。

5. 回復成分

  1. 化合物が着色されている場合、視覚的に識別できます。しかし、化合物は無色、する場合彼らは (化合物には、共役が含まれて) 場合 ulta 可視 (UV) 光を使用して識別する必要がまたは適切な染色。化合物の純度は、薄層クロマトグラフィーを使用して確認できます。
  2. 目的の化合を含む試験管を識別します。
  3. あらかじめ重量を量られた丸底 (RB) フラスコに目的の分離化合を含む画分のすべてをマージします。この隔離される各化合物に対して行います。
  4. 回転蒸発器に RB フラスコを置くことによって溶媒を蒸発させます。
  5. 溶媒のすべてが削除されると、乾燥製品で RB の重さし、収率を取得する RB の初期の重さを引きます。

カラム ・ クロマトグラフィは汎用性の高い精製法のソリューションで化合物を分離するために使用です。ソリューションの混合物は、固定相と呼ばれる、吸着剤の固体を含んでいるコラムを通して溶媒によって運ばれます。結合された溶媒とサンプルの混合物は、移動相と呼ばれます。

移動相の分子はその化学的特性と固定相の親和性に基づく異なるレートで列を通過します。したがって、各化合物は、別の時間に列を終了します。化合物の分離し、精製されている一度、彼らはさらに処理することができます。 または配布の準備ができています。このビデオは、カラム ・ クロマトグラフィの基本を紹介します、有機化合物の精製の技術のデモンストレーションします。

カラム ・ クロマトグラフィで進度を遅くことにより、列を通過すると、分子が可逆的固定相に吸着します。固定相と相互作用する化合物は、列を終了または溶出する高速です。強く固定相と相互作用する化合物の溶出が遅くしています。固定相は、吸着剤の粉末またはシリカゲルやアルミナなどのゲルです。極性化合物と溶剤および弱非極性分子と強く相互作用するので、シリカゲルやアルミナは極性が高くです。静止した段階、溶剤、スラリーとして列に読み込まれる、流れることによって満載ですし、固定相を溶媒。適切に梱包、静止した段階は、上から下まで均一とこれらの不正行為による不均一な流れを作り出す化合物の分離をする空気泡無しまたは乾燥のパッチが含まれています。溶剤または溶離液は、通常、貯水池から供給される有機溶剤です。一般に、非極性溶媒では、極性溶媒溶出北極および無極性化合物に対し非極性化合物が溶出のみが。混合物には、大幅に異なる極性の化合物が含まれている場合、ますます極性有機溶剤のシリーズにすべての関心の化合物の溶出に使用可能性があります。移動相流量通常、列の下部にバルブによって制御されます。流れの一時停止は、化合物の拡散を避けるために最小限に保持されます。溶出液と呼ばれる、柱を残して移動相は、化合物の分離を維持するために分数に収集されます。カラムクロマトグラフィーの原理を理解することは、有機化合物の混合物の浄化のための手順を行ってみましょう。

手順を開始するには、テキストに記載されている機器を入手します。分離する質量を記録し各化合物の丸底フラスコの重量を量る。次に、サンプルの重量を量るし、最低限必要な溶媒量を溶かします。適切な溶媒は、薄層クロマトグラフィーを使用して前もって決定される必要があります。Rf値は 0.2-0.3 の間する必要があります。その後、サンプルと TLC の事前の審査に基づく興味の化合物の移動距離の差の乾燥重量に基づく固定相に必要なシリカゲルの量を決定します。シリカゲルの適切な量を三角フラスコに注ぐ。スラリーは半透明、フラスコが渦巻くとき自由に動くまで、シリカゲルに溶媒を追加します。次に、シリカゲルが中途半端に埋めること十分に大きい列を選択します。列にガラス釉薬が設定されていない場合、列にグラスウールを入れるし、しっかりと長い棒が付いている底に押し込みます。シリカが、グラスウールを通過するを防ぐために砂の約 2 cm のグラスウールをカバーします。発煙のフード リング スタンド、試験管に合わせて以下の十分なスペースを許可する列をクランプします。

列に漏斗を置き、活栓を閉じていることを確認します。空気の泡を除外するスラリー安定するように側面をやさしくタッピング列にスラリーを注ぐ。漏斗、フラスコ、および溶媒でカラムにゲルのすべてを転送する列の壁をすすいでください。

列の下の三角フラスコを配置します。活栓を開いてと溶媒のレベルは、シリカゲルのすぐ上までフラスコに流出し溶媒を許可し、活栓を閉じます。約 2 cm のゲルの上に砂を注ぐ。溶剤列の両側に付く砂を軽くすすいでください。完全に覆われてので、砂は乾燥し、ほとんどがシリカを必要に応じて溶剤を排出します。

分離するには、砂を乱すことがなく列にサンプルを追加します。溶媒の少量を使用して、列の壁に付着した試料を下洗いする、サンプル容器を洗います。レベルはシリカのすぐ上まで慎重に溶剤を排出します。ピペットと優しくは、砂の層を乱すことがなくの 4-5 mL の溶媒を追加します。列に漏斗を置き、ゆっくりと溶剤で埋めます。フラスコを削除し、ラベル付き試験管で置き換えます。場所の最初のテスト チューブ、活栓を開き、テスト チューブがほぼいっぱいになるまで溶出液を収集します。

すべての必要な化合物が溶出されて、ラベル付きの試験管を順番に進むまで分数の収集を続行します。終了したら、活栓を閉じます。

各化合物分離、あらかじめ重量を量られた丸底フラスコの純粋な分画を組み合わせてください。ロータリーエバポレーターでフラスコから、溶媒を除去し、乾燥の化合物を含有する丸底フラスコの重量を量る。詳細については、回転蒸発のこのコレクションのビデオを参照してください。

このサンプルには、フルオレノンや TPP、テトラフェニルポルフィリンの混合物が含まれています。暗い赤紫色 TPP は続いて黄フルオレノンまず、溶出しました。各単離した化合物の純度は、NMR 分光法により確認された.

カラムクロマトグラフィーは、精製と様々 な科学分野の解析で使用されます。

高速液体クロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフィー、化合物間に優れた分離カラム ・ クロマトグラフィのフォームは、標識分子の放射の探知器など特殊な検出器を組み込むことができます。高速液体クロマトグラフィーを使用して、radiolabeled リン脂質簡単に分離できます他の多くの混合物から混合物のほんの数パーセントを占めていて。この情報は、生産、調節、および多くの重要な生体分子機能の解明を助けることができます。

フラッシュ クロマトグラフィーはカラム ・ クロマトグラフィ移動相が重力流だけではなく、空気やガスの圧力の下の列を移動するのです。

これはよりよい分離のための拡散を最小限に抑え、高速な流量を作成します。目的の化合物は、薄層クロマトグラフィー、優れた後精製収率、純度の結果に示すように、いくつかの純粋な集中された分数に収集されます。

通常塔装置は小さなボリュームを分離するために適切ではないが、いくつかの混合物は高速液体クロマトグラフィーなどの専門的な技術と互換性がありません。小規模浄水は、小規模フラッシュ クロマトグラフィー用ピペット電球ガラス ピペット列で実行されます。これは、特殊な浄化技術や大規模な浄化の後、最後の手順として、サンプルを準備する際に特に役立ちます。

カラム ・ クロマトグラフィのゼウスの概要を見てきただけ。カラム ・ クロマトグラフィ、シリカゲル カラムクロマトグラフィーのプロシージャおよび技術のいくつかのアプリケーションの原則に精通している必要がありますできます。

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Results

(TPP、5 mg) テトラフェニルポルフィリンとフルオレノン (45 mg) の混合物を含んでいるサンプルを正常に分離されているし、各化合物は隔離されています。暗紫赤帯、黄色バンド(図 2として列を離れてその後溶出フルオレノンとして列を最初に溶出 TPP)。溶出画分は試験管に集められ、彼らの独特の色 (図 3) によって識別。分離の化合物を含む画分が別の RBs にマージされた、非常に純粋な TPP とフルオレノン余裕をロータリーエバポレーターを使用して溶媒を除去しました。核磁気共鳴 (NMR) 分光法による chromatographed 化合物の純度が検証されました。目的化合の融点が以前確認された場合は、のみ、融点、化合物さらに検証できます。

Figure 2
図 2。化合物が固定相をスキャン、彼らは個別に開始します。この実験では TPP (暗紫赤帯) を通過列フルオレノン (イエロー バンド) よりわずかに速い。

Figure 3
図 3化合物溶出列を彼らは試験管で収集されています。この実験では分離されている化合物は、視覚的に識別できるように着色されています。

Applications and Summary

概要

カラムクロマトグラフィーは、化合物を浄化するための便利で汎用性の高い方法です。このメソッドは、極性化合物を分離します。分子の極性の違いを利用して、カラム ・ クロマトグラフィは facilely 化合物がカラムの固定相を通過率によって化合物を分離できます。カラム ・ クロマトグラフィ (特に再結晶と比較して) 場合の利点の 1 つはそれについて非常に小さな化合物は、精製プロセスの前に知られている必要があります。カラム ・ クロマトグラフィを使用する他の利点は、再結晶は、固形物を浄化するために使用できますが、固形物や油を浄化するために使えます。この手法は、化合物の混合物からの番号を分離する使用できます。

アプリケーション

カラムクロマトグラフィーは、化合物を浄化するための最も便利で、広く使用されている方法の 1 つです。多くの場合、合成反応は複数の製品を生産し、を精査の化合物のそれぞれを分離カラム ・ クロマトグラフィを使用ことができます。カラムクロマトグラフィーは、化合物について知られている必要があります非常に少ない合成または新規化合物を分離するとき非常に貴重な「物性浄化プロセスの前に。

製薬業界は日常的にその初期段階創薬プロセスの一部として化合物を浄化するためにカラム ・ クロマトグラフィを使用します。3多くのこれらの予備の段階の研究者がリード化合物、化合物のライブラリを構築し、その後新たに合成された化合物を浄化するためにカラム ・ クロマトグラフィを使用します。4の広範な使用とこの浄化技術の汎用性は、教育学部のカリキュラムに技術を組み込むことを求めています。5, 6

References

  1. Mayo, D. W.; Pike, R. M.; Forbes, D. C., Microscale organic laboratory : with multistep and multiscale syntheses. 5th ed.; J. Wiley & Sons: Hoboken, NJ; p xxi, 681 p (2011).
  2. Armarego, W. L. F.; Chai, C. L. L., Purification of laboratory chemicals. 5th ed.; Butterworth-Heinemann: Amsterdam; Boston; p xv, 609 p (2003).
  3. Silverman, R. B.; Holladay, M. W., The organic chemistry of drug design and drug action. Third edition / ed.; Elsevier/AP, Academic Press, is an imprint of Elsevier: Amsterdam ; Boston; p xviii, 517 pages (2014).
  4. Mortensen, D. S.; Perrin-Ninkovic, S. M.; Shevlin, G.; Elsner, J.; Zhao, J.; Whitefield, B. et. al. Optimization of a Series of Triazole Containing Mammalian Target of Rapamycin (mTOR) Kinase Inhibitors and the Discovery of CC-115. Journal of Medicinal Chemistry (2015).
  5. Davies, D. R.; Johnson, T. M., Isolation of Three Components from Spearmint Oil: An Exercise in Column and Thin-Layer Chromatography. Journal of Chemical Education,84 (2), 318 (2007).
  6. Taber, D. F.; Hoerrner, R. S., Column chromatography: Isolation of caffeine. Journal of Chemical Education, 68 (1), 73 (1991).

1 シリカゲル スラリー

  1. シリカゲルを三角フラスコに注ぐ。包装材の重量も約 50 倍、分離されているサンプル。分離されている化合物は、非常によく似たRf値を持つ、それは大量のサンプルは、この例では、あたりのシリカを使用してを必要があります。
    1. 三角フラスコ、50 mg のサンプル (45 mg フルオレノンのテトラフェニルポルフィリンの 5 mg) が分離されているので中のシリカの場所 10 g。
  2. 溶剤システムを追加 (ヘキサン/ジクロロ メタン 70%: 30%) シリカゲルを含むエルレンマイヤー フラスコに。シリカゲルのすべてがよく溶媒和であることを確認する十分な溶媒を追加します。シリカは分解しないが、とき、混合物は視覚的に顕著なる溶媒和。溶媒が追加された後、シリカのすべてがよく溶媒和ように三角フラスコを旋回します。

2. 列の準備

  1. 適切なサイズの列を選択します。通常シリカゲル スラリーの約半分の方法列を入力する必要があります。精製されているサンプルのサイズを大きくより大きい列が必要です。
  2. グラスウールの切れ端で列の下部に差し込みます。長い棒を使用して、ウールが、活栓のすぐ上の列の下部に詰まってしっかりとを確認します。
  3. ウールはしっかりと後、は、グラスウールの上砂の薄い層を適用します。
    注:活栓上記ガラスフリット列が装備されている場合は、この手順を省略されなければなりません。
  4. リング スタンドに縦位置で列を固定します。
  5. 目標到達プロセスを使用して、優しく注ぎ準備スラリー状シリカゲルの列。三角フラスコから列にスラリーを転送する追加溶媒を追加する必要があります。ピペットを使用して、列の両側にスティック任意のシリカゲルを洗います。
    1. シリカゲル列で定着しつつあると優しくシリカゲル パックをしっかりと、空気の泡を除くことを確認する列の側面をタップします。
  6. 活栓を開き、シリカゲルと溶媒フロント ミート前だけまでに、きれいな三角フラスコに流出し溶媒を許可します。シリカゲルには、プロシージャが完了するまでに決して乾燥行く必要があります。
  7. シリカゲル (図 1) の上に砂の薄層を配置します。ピペットを使用して、列の両側に立ち往生している可能性があります任意の砂を洗います。
  8. 砂は、乾燥するまでが、シリカゲル層にない追加溶剤を排出します。

Figure 1
図 1。カラム ・ クロマトグラフィの適切なセットアップは、サンプル添加する前に試してみてください。

3 列にサンプルを追加

  1. (シリカゲル スラリーのために使用された同じ溶剤を使用して) 可能な溶媒の少量のサンプルを溶解します。
  2. 列の上部にサンプルを追加そっとピペットを使用して。
  3. サンプルは、列の上部に適用されている、一度活栓を開き、砂の層がないシリカゲル層を通って流出する溶剤を許可します。上下に列の側面にしがみついている可能性があります任意のサンプルを洗浄する溶剤量が非常に少ないを使用します。砂層にもこの追加溶剤を排出します。

4. 列を通して試料の溶出

  1. 砂の層を妨げないような方法で 4-5 mL の溶媒を追加ピペットを使用して、非常に穏やか。
  2. 列の上部に漏斗を置き、非常にゆっくりと優しく溶媒と列の残りの部分を埋めます。
  3. 活栓を開き、列を通って流出する溶剤を許可します。
  4. 試験管に列から排水溝のように移動相を収集を開始します。
    1. 試験管は、順次テスト チューブのラックに配置する必要があります。
  5. すべての必要な化合物がカラムから溶出されるまで必要に応じて列の上部に追加溶媒を追加します。

5. 回復成分

  1. 化合物が着色されている場合、視覚的に識別できます。しかし、化合物は無色、する場合彼らは (化合物には、共役が含まれて) 場合 ulta 可視 (UV) 光を使用して識別する必要がまたは適切な染色。化合物の純度は、薄層クロマトグラフィーを使用して確認できます。
  2. 目的の化合を含む試験管を識別します。
  3. あらかじめ重量を量られた丸底 (RB) フラスコに目的の分離化合を含む画分のすべてをマージします。この隔離される各化合物に対して行います。
  4. 回転蒸発器に RB フラスコを置くことによって溶媒を蒸発させます。
  5. 溶媒のすべてが削除されると、乾燥製品で RB の重さし、収率を取得する RB の初期の重さを引きます。

カラム ・ クロマトグラフィは汎用性の高い精製法のソリューションで化合物を分離するために使用です。ソリューションの混合物は、固定相と呼ばれる、吸着剤の固体を含んでいるコラムを通して溶媒によって運ばれます。結合された溶媒とサンプルの混合物は、移動相と呼ばれます。

移動相の分子はその化学的特性と固定相の親和性に基づく異なるレートで列を通過します。したがって、各化合物は、別の時間に列を終了します。化合物の分離し、精製されている一度、彼らはさらに処理することができます。 または配布の準備ができています。このビデオは、カラム ・ クロマトグラフィの基本を紹介します、有機化合物の精製の技術のデモンストレーションします。

カラム ・ クロマトグラフィで進度を遅くことにより、列を通過すると、分子が可逆的固定相に吸着します。固定相と相互作用する化合物は、列を終了または溶出する高速です。強く固定相と相互作用する化合物の溶出が遅くしています。固定相は、吸着剤の粉末またはシリカゲルやアルミナなどのゲルです。極性化合物と溶剤および弱非極性分子と強く相互作用するので、シリカゲルやアルミナは極性が高くです。静止した段階、溶剤、スラリーとして列に読み込まれる、流れることによって満載ですし、固定相を溶媒。適切に梱包、静止した段階は、上から下まで均一とこれらの不正行為による不均一な流れを作り出す化合物の分離をする空気泡無しまたは乾燥のパッチが含まれています。溶剤または溶離液は、通常、貯水池から供給される有機溶剤です。一般に、非極性溶媒では、極性溶媒溶出北極および無極性化合物に対し非極性化合物が溶出のみが。混合物には、大幅に異なる極性の化合物が含まれている場合、ますます極性有機溶剤のシリーズにすべての関心の化合物の溶出に使用可能性があります。移動相流量通常、列の下部にバルブによって制御されます。流れの一時停止は、化合物の拡散を避けるために最小限に保持されます。溶出液と呼ばれる、柱を残して移動相は、化合物の分離を維持するために分数に収集されます。カラムクロマトグラフィーの原理を理解することは、有機化合物の混合物の浄化のための手順を行ってみましょう。

手順を開始するには、テキストに記載されている機器を入手します。分離する質量を記録し各化合物の丸底フラスコの重量を量る。次に、サンプルの重量を量るし、最低限必要な溶媒量を溶かします。適切な溶媒は、薄層クロマトグラフィーを使用して前もって決定される必要があります。Rf値は 0.2-0.3 の間する必要があります。その後、サンプルと TLC の事前の審査に基づく興味の化合物の移動距離の差の乾燥重量に基づく固定相に必要なシリカゲルの量を決定します。シリカゲルの適切な量を三角フラスコに注ぐ。スラリーは半透明、フラスコが渦巻くとき自由に動くまで、シリカゲルに溶媒を追加します。次に、シリカゲルが中途半端に埋めること十分に大きい列を選択します。列にガラス釉薬が設定されていない場合、列にグラスウールを入れるし、しっかりと長い棒が付いている底に押し込みます。シリカが、グラスウールを通過するを防ぐために砂の約 2 cm のグラスウールをカバーします。発煙のフード リング スタンド、試験管に合わせて以下の十分なスペースを許可する列をクランプします。

列に漏斗を置き、活栓を閉じていることを確認します。空気の泡を除外するスラリー安定するように側面をやさしくタッピング列にスラリーを注ぐ。漏斗、フラスコ、および溶媒でカラムにゲルのすべてを転送する列の壁をすすいでください。

列の下の三角フラスコを配置します。活栓を開いてと溶媒のレベルは、シリカゲルのすぐ上までフラスコに流出し溶媒を許可し、活栓を閉じます。約 2 cm のゲルの上に砂を注ぐ。溶剤列の両側に付く砂を軽くすすいでください。完全に覆われてので、砂は乾燥し、ほとんどがシリカを必要に応じて溶剤を排出します。

分離するには、砂を乱すことがなく列にサンプルを追加します。溶媒の少量を使用して、列の壁に付着した試料を下洗いする、サンプル容器を洗います。レベルはシリカのすぐ上まで慎重に溶剤を排出します。ピペットと優しくは、砂の層を乱すことがなくの 4-5 mL の溶媒を追加します。列に漏斗を置き、ゆっくりと溶剤で埋めます。フラスコを削除し、ラベル付き試験管で置き換えます。場所の最初のテスト チューブ、活栓を開き、テスト チューブがほぼいっぱいになるまで溶出液を収集します。

すべての必要な化合物が溶出されて、ラベル付きの試験管を順番に進むまで分数の収集を続行します。終了したら、活栓を閉じます。

各化合物分離、あらかじめ重量を量られた丸底フラスコの純粋な分画を組み合わせてください。ロータリーエバポレーターでフラスコから、溶媒を除去し、乾燥の化合物を含有する丸底フラスコの重量を量る。詳細については、回転蒸発のこのコレクションのビデオを参照してください。

このサンプルには、フルオレノンや TPP、テトラフェニルポルフィリンの混合物が含まれています。暗い赤紫色 TPP は続いて黄フルオレノンまず、溶出しました。各単離した化合物の純度は、NMR 分光法により確認された.

カラムクロマトグラフィーは、精製と様々 な科学分野の解析で使用されます。

高速液体クロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフィー、化合物間に優れた分離カラム ・ クロマトグラフィのフォームは、標識分子の放射の探知器など特殊な検出器を組み込むことができます。高速液体クロマトグラフィーを使用して、radiolabeled リン脂質簡単に分離できます他の多くの混合物から混合物のほんの数パーセントを占めていて。この情報は、生産、調節、および多くの重要な生体分子機能の解明を助けることができます。

フラッシュ クロマトグラフィーはカラム ・ クロマトグラフィ移動相が重力流だけではなく、空気やガスの圧力の下の列を移動するのです。

これはよりよい分離のための拡散を最小限に抑え、高速な流量を作成します。目的の化合物は、薄層クロマトグラフィー、優れた後精製収率、純度の結果に示すように、いくつかの純粋な集中された分数に収集されます。

通常塔装置は小さなボリュームを分離するために適切ではないが、いくつかの混合物は高速液体クロマトグラフィーなどの専門的な技術と互換性がありません。小規模浄水は、小規模フラッシュ クロマトグラフィー用ピペット電球ガラス ピペット列で実行されます。これは、特殊な浄化技術や大規模な浄化の後、最後の手順として、サンプルを準備する際に特に役立ちます。

カラム ・ クロマトグラフィのゼウスの概要を見てきただけ。カラム ・ クロマトグラフィ、シリカゲル カラムクロマトグラフィーのプロシージャおよび技術のいくつかのアプリケーションの原則に精通している必要がありますできます。

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