血液撤退 II

Lab Animal Research

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Overview

来源: 凯斯图尔特, RVT, RLATG, CMAR;瓦莱丽. 施罗德, RVT, RLATG。圣母大学

收集的血液从老鼠和老鼠的分析可以通过多种方法进行。每种收集方法在所需的克制类型、程序的侵入性和一般麻醉的必要性方面都有不同。1历史上, 使用的复古眶窦腔已被使用, 但不是没有辩论。由于眼眶出血引起的潜在组织损伤, 甚至失明的争议, 导致了小鼠面部和下颌下腺出血方法的发展。小鼠和大鼠的隐静脉采血是另一种已开发的技术。这些程序不需要麻醉, 因此是适当的, 当使用麻醉剂可能混淆血液结果或其他数据。

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JoVE Science Education Database. 实验动物研究精要. 血液撤退 II. JoVE, Cambridge, MA, (2018).

Principles

在小鼠的脸颊上有一个面部的静脉, 从眼睛的神经丛穿过面颊, 还有一个沿下颚的颌下腺。两个血管汇合到颈静脉下方的下颚线, 使他们容易接近。序列样品可以从任一艘船被采取交替侧使用。然而, 任何一方都不应经常使用超过5-7 天。2

在执行面部静脉出血时需要注意预防。由于耳道位于面部静脉附近, 如果柳叶刀的尖端被定向尾, 运河将被刺穿。这将导致一个虹吸效应, 导致血液来自耳朵。尽管如此, 仍然可以收集血液, 而老鼠也不会承受任何永久性的伤害。然而, 这可能导致动物对其摇头, 泼洒在笼子里的血液。

从下颌下腺出血时, 针的插入深度是至关重要的。插入深度超过 4-5. 5 mm 可能会导致头部、颈部和口腔内的肌肉、神经和其他血管受到创伤。随后的并发症包括过度出血导致的血, 造成的液体在口中的溺水, 和损害的口腔结构, 干扰饮食。

动物的克制对于面部静脉和下颌下腺手术的成功出血至关重要。如果手柄上的颈背太紧, 血液流向面部静脉可以限制。这将导致收集的卷减少。采集量会因面部静脉和下颌下腺出血而异。必须限制收集数量, 使其不超过根据机构政策和经批准的动物议定书所规定的生存采血的最大数量。一旦所需的量被收集, 确保止血, 将防止额外或过度失血。2

从隐静脉采集血液是连续出血的另一种可行的方法。侧隐静脉是一个表面的血管, 运行背, 然后横向, 横跨跗关节。3虽然此过程可能比回溯轨道出血更具有美感, 但由于所需的准备--而且没有使用麻醉方法--它实际上对动物来说可能更有压力. 可能由隐血引起的并发症与穿刺部位有关。如果穿刺不直接在血管上, 血液可能会在皮下池内, 导致血肿。瘀伤, 可能的感染, 和偏袒的肢体是其他可能的问题。这种方法需要训练, 但很容易掌握。使用此方法收集的卷介于10-150 µL 之间, 取决于取样频率。4样本在质量上是可变的, 因为它们可能含有组织产品。不超过四血液样本应采取在24小时内从同一条腿。

股静脉是另一种选择血液收集的老鼠。股静脉从腹股沟到膝关节的内侧, 在横过膝和成为侧隐, 使其容易接近。虽然这个程序可以不使用麻醉剂, 它确实需要两个人一个人将握住腿在腿和腹部连接到咬合静脉, 而另一个执行静脉穿刺和收集血液。

使用股静脉的好处是, 更大的体积更容易从它收集比从隐静脉。然而, 由于股静脉大, 容易形成血肿。这可能是由于过于坚定的腿, 这可能会造成额外的瘀伤恶化。用这种采血方法, 在拔除针头后因出血而引起的血量有变化。必须确保止血, 以防止这一过度失血。

Procedure

1. 小鼠面静脉出血

  1. 设备
    1. 血液的汇集从一个自由的抓住入血液管或离心管。在某些情况下, 将血液直接收集到红细胞压积管是可取的。
    2. 黄花针将根据年龄和性别选择合适的动物大小。
      1. 针根据老鼠的年龄或大小被选择如下:
        4mm 柳叶刀: 3-4 周大鼠 (体重低于15克)
        5mm 柳叶刀: 雌性小鼠10周以下 (低于20克体重)
        5mm 柳叶刀: 雄性小鼠6周以下 (低于20克体重)
        5mm 柳叶刀: 用于 single-drop 样品 (血液涂片)
        5.5mm 柳叶刀: 雌性小鼠超过10周 (超过 ~ 20 克体重)
        5.5mm 柳叶刀: 雄性小鼠超过6周 (超过 ~ 20 克体重)
        5.5mm 柳叶刀: 大样本
  2. 克制
    1. 使用 scruffing 技术抑制小鼠。
    2. 重要的是要尽量减少头部的侧向运动。这确保了准确和安全的静脉穿刺与柳叶刀。
  3. 血液撤退
    1. 上臂柳叶刀与皮肤表面垂直。
    2. 柳叶刀点是略微倾斜的, 尖端朝向鼻子。
    3. 柳叶刀的刀刃最好用在垂直位置。
    4. 在抑制鼠标的同时, 通过测量侧眼角下方的眼睛长度和眼睛尾的宽度来定位脸部的大致面积。
    5. 用柳叶刀的点, 轻轻地感受下颚末端的点。
    6. 为了提高穿刺血管的准确性, 在侧卧床中放置鼠标。
    7. 刺穿皮肤到柳叶刀的肩膀, 在这一点上。这是一个坚定的推动, 而不是投掷镖。
    8. 在去除柳叶刀后, 血液会开始流动。
    9. 为了帮助血液流动, 把老鼠的头部放在比心脏低的位置。
    10. 收集所需的收集血管中的血液。
    11. 涂抹穿刺部位, 并释放颈背上的压力止血。

Figure 1
图1。小鼠的面部静脉出血。

2. 小鼠下颌下腺出血: 虽然与面部静脉出血的技术非常相似, 但在这种出血过程中, 设备和细微的差异是有差别的。

  1. 设备
    1. 血液的汇集是从一个自由的抓住入血液管或离心管。在某些情况下, 它是可取的直接收集到红细胞压积管。
    2. 根据年龄和性别的大小, 根据适当的尺寸选择18-22 规针。
      1. 针根据老鼠的年龄或大小被选择如下:
        22规: 3-4 周大鼠 (体重15克以下)
        20规: 雌性小鼠10周以下 (体重20克以下)
        20规: 雄性小鼠6周以下 (低于20克体重)
        20规: 用于 single-drop 样品 (血液涂片)
        18规: 雌性小鼠10周以上 (超过 ~ 20 克体重)
        18规: 雄性小鼠6周以上 (超过 ~ 20 克体重)
        18规格: 大样本
  2. 克制
    1. 使用 scruffing 技术抑制小鼠。
    2. 重要的是要尽量减少头部的侧向运动。这确保了准确和安全的静脉穿刺针。
  3. 血液撤退
    1. 针与皮肤的表面垂直。
    2. 在抑制小鼠的同时, 将下下颌静脉的大致区域定位到从嘴角的一条线与眼角的外眼角相交一条线的点。这恰好与一个小的, 无毛的酒窝发现的尾侧的嘴角和略低于下颚线。
    3. 为了提高穿刺血管的准确性, 在侧卧床中放置鼠标。
    4. 在这一点上用针尖刺穿皮肤。这是一个坚定的推动, 而不是投掷镖。
    5. 针没有插入到斜面的尖端之外。
    6. 除去针头后, 血液就会开始流动。
    7. 为了帮助血液流动, 把老鼠的头部放在比心脏低的位置。
    8. 收集所需的收集血管中的血液。
    9. 涂抹穿刺部位, 在颈背上释放压力止血。

Figure 2
图2。小鼠下颌下腺出血。

3. 隐血

  1. 设备
    1. 透明的塑料, 灵活的约束锥可以用于鼠标或老鼠。对小鼠, 修改50毫升塑料锥管可用于约束。对大鼠来说, 改性有机玻璃约束管-有一个宽到足以延长后腿的插槽-可以使用。
    2. 在使用塑料锥时, 它是根据动物的体长进行测量的, 在大腿的水平处切下一个椭圆形的孔。
    3. 一个锥形管可以修改为这种血液收集方法的小鼠, 切断管的一端, 让一个呼吸孔。一个插槽是从管帽端削减约½英寸宽和2英寸长。边缘是覆盖在布胶带或平滑的动物安全。
    4. 止血带是用3毫升注射器和2-0 吸收缝合的长度制造的。3
    5. 三重抗生素软膏或白色凡士林被用作皮肤上的防潮屏障。
    6. 22口径针头是静脉穿刺的首选尺寸。
    7. 血液被直接收集到红细胞压积管。
  2. 克制
    1. 柔性塑料锥
      1. 老鼠或老鼠被安置入锥体鼻子首先。
      2. 锥的一端是折叠和关闭使用一个小的活页夹剪辑, 以防止动物退出克制锥。
      3. 后腿被轻轻地拉过椭圆形的腹股沟开口。
    2. 小鼠锥管
      1. 把老鼠放在管鼻前。
      2. 后腿被轻轻地引导进入槽中。
      3. 中指被放置在管子的末端以防止老鼠离开管子。
      4. 食指和拇指稳定了鼠标的腿。
    3. 大鼠有机玻璃约束管
      1. 老鼠被放进管子的鼻子里。
      2. 后腿被轻轻地引导进入槽中。
      3. 该管的一端是固定的, 以防止老鼠备份和退出管。
      4. 食指和拇指稳定了老鼠的腿。
  3. 血液撤退
    1. 头发从腿的侧面被去除从典当到窒息。这可以通过采摘, 剃须, 或使用脱毛奶油。
    2. 一旦头发被移除, 少量软膏被应用并且在一个非常稀薄的层数传播在无毛区域。
    3. 止血带的应用尽可能 cranially, 并收紧。
    4. 从膝部到踝关节的外表面的隐血管将开始填充, 并将变得凸起, 并且容易形象化。
    5. 针是垂直于皮肤表面的, 直接在血管上。刺穿船小心不要将针头深深地插入腿部, 以免刺穿肌肉或击打骨头。
    6. 血液会在腿部的表面上起珠, 以收集红细胞压积管。
    7. 一旦血液收集, 松开止血带, 并施加压力, 在穿刺止血。
    8. 一旦出血停止, 将动物从束缚中取出, 并将其返回到家庭笼子。

Figure 1
图3。小鼠隐静脉出血。

4. 大鼠股静脉

  1. 设备
    1. 血液被收集到红细胞压积管。
    2. 三重抗生素软膏是需要创建一个屏障之间的皮肤/头发和血滴。
    3. 一个22口径的针头用来刺穿静脉。
    4. 一个小, 便携的头发剪约 1 "宽刀片是用来修剪从腿部的头发。
  2. 克制
    1. 大鼠使用明确的, 灵活的塑料约束锥限制。
    2. 塑料锥体被测量反对身体长度和一个卵形孔切开在大腿的水平。锥体被切开这样后腿可以形象化与静脉接触。
  3. 血液撤退
    1. 头发从大腿内侧从腹股沟到膝盖被剃掉。
    2. 三重抗生素软膏被应用在薄层的穿刺部位。
    3. 约束人闭塞静脉, 并将大鼠与小腿的内表面血。
    4. 用针头刺穿静脉。针与血管垂直, 穿刺是直接在静脉上进行的。
    5. 穿刺是尽可能接近膝盖, 允许额外的采样前的第一个血液收集网站。
    6. 船是表面的。因此, 穿刺深度不应超过针锥的长度。
    7. 为了帮助血液流动, 把大鼠的腿放在比心脏低的位置。
    8. 收集血红细胞压积管, 因为它在皮肤表面的珠子。
    9. 释放腿部压力, 在穿刺部位施加压力, 以达到止血效果。

Figure 4
图4。大鼠股静脉出血。

从小鼠和老鼠身上采集血液是广泛的科学研究所必需的, 研究人员已经开发出不同的方法来达到特定的实验目标。

在第一部分, 我们讨论了一般的血液撤退的考虑, 并回顾了复古眼眶眼出血, 尾剪和刻痕, 以及内血液收集方法。在这里, 我们将概述的程序, 从面部, 颌下腺, 隐, 股静脉采血。这些方法是较少侵入性的, 不需要麻醉, 这使得他们 methods-of-choice 时, 使用麻醉剂可能混淆血液结果或其他数据。

让我们从小鼠的面部血管中获取血样的过程开始。在鼠标上, 有一个容易接近的面部静脉贯穿脸颊。首先选择合适的设备进行操作。基本上, 你需要一个小型离心管血液收集和柳叶刀, 这是可用的不同大小。选择正确的柳叶刀取决于年龄, 性别, 和体重的动物和样本的大小要收集。有关柳叶刀选择的详细信息, 请参阅文本协议。

通过使用 scruffing 技术来限制动物的过程。适当的克制最大限度地减少头部侧向运动, 并有助于确保准确和安全的静脉穿刺与柳叶刀。如果抓地力太紧, 血流可能会受到限制, 导致收集的体积减少。一旦动物被限制, 通过测量眼侧眼角下方的眼睛长度和眼睛尾的宽度来定位脸部的大致面积。随着柳叶刀的尖端轻轻地感觉到下颚末端的点。为了更准确地刺穿容器, 您可能需要将鼠标置于其一侧。

现在, 在插入部位, 将柳叶刀垂直于皮肤表面, 尖端朝向鼻子微微。这是至关重要的, 因为如果柳叶刀尖端是定向尾, 耳道将被刺穿造成耳朵出血。穿刺的静脉, 应用坚定的推动和刺穿皮肤的柳叶刀的肩膀。一旦切除, 血液就会开始流动。为了协助水流, 将动物的头部置于低于心脏的位置。止血, 涂抹穿刺部位止血, 防止失血过多。最后, 释放对颈背的压力, 并把动物放回笼子里。请注意, 收集卷将有所不同, 但它是当务之急不超过最大数量的生存采血。参见血液撤退的文本协议一录影为详细关于推荐的最大容量收集。串行样本可以采取交替侧使用。任何一方都不应经常使用超过5-7 天。

现在让我们复习下颌下腺静脉出血的方法。虽然这是非常类似的技术, 为面部静脉出血, 有不同的设备和细微的差异, 在出血程序。

下下颌静脉沿着小鼠的下颚运行, 并与面部静脉会聚到颈静脉。这种方法不是用柳叶刀, 而是用针来进行的。但类似针, 针规的选择取决于年龄, 性别, 和动物的重量和样本大小-见文本协议的细节。

开始时, 将动物与脸部静脉出血的方式一样, 使头部的侧向运动最小。记忆过度紧抓可能会降低血液收集量。在抑制鼠标的同时, 想象一条线从嘴角的一角划过, 一条线从眼角的侧面眦。这些线的交点是下颌静脉的大致面积。这恰好与一个小的无毛酒窝发现尾的角落, 嘴角和略低于下颚线。

为了提高精确度, 将动物置于侧卧床 (3.6.1)。接下来, 把针垂直于皮肤的表面, 并插入一个坚定的推动。不要将针头插入斜面尖端, 因为插入深度大于可能导致头部、颈部和口腔内的肌肉、神经和其他血管受到创伤。除去针头后, 血液就会开始流动。像脸部静脉出血一样, 将小鼠的头部置于低于心脏的位置以协助血液流动。最后, 涂抹穿刺部位以达到止血和释放颈背上的压力, 使动物回到笼子。

现在, 让我们学习如何从隐静脉中采集血液。这是一个表面的血管, 运行背, 然后横向横跨跗关节。

你所需要的设备, 包括一个限制装置, 它可以是一个灵活的塑料大鼠或, 对小鼠一个修改50毫升塑料锥管可以使用。注意, 管端被切断, 以允许一个呼吸孔, 和一个半英寸宽和2英寸长的插槽是从盖帽结束。边缘被覆盖在血块胶带中, 以保护动物的安全。这个过程也需要一个止血带-制造使用3毫升注射器和长度0-2 吸收缝合, 三重抗生素软膏与棉签-被用作防潮屏障之间的皮肤和血滴, 理发钳, 22 计针用于静脉穿刺, 红细胞压积管采血。

要抑制一只老鼠, 先把它放进管子, 鼻子里。然后, 用食指和拇指轻轻引导后腿进入槽中并稳定它。随后, 从腿的侧面将头发从跗关节刮到窒息。然后, 涂抹一层薄薄的三重抗菌药膏到无毛区域。接下来, 尽量 cranially 止血带, 并将其拧紧。从膝部到踝关节的外表面上的隐血管将开始填充, 并将变得凸起, 并易于形象化。

接下来, 将22口径的针头直接放在血管上, 垂直于皮肤表面。并刺穿血管, 注意不要太深地插入针头, 并刺穿肌肉或骨骼。血液会在腿部的表面上起珠, 收集成红细胞压积管。一旦血液收集, 松开止血带, 并施加压力, 在穿刺止血。出血停止后, 将动物从束缚中取出, 并将其返回笼子。使用此方法收集的卷在10到150μ l 之间, 这取决于取样频率。和样品质量是可变的, 因为它可能包含组织产品。不超过4血液样本应采取在24小时内从同一条腿。

最后, 我们将学习如何从股静脉中采集血液, 这是在老鼠身上采集血液的另一个选择。股静脉从腹股沟到膝关节的内侧, 在横过膝和成为侧隐静脉之前, 使其容易接近。

股静脉出血的优点是较大的体积更容易收集比从隐静脉。缺点是, 这种程序, 在有意识的动物, 需要两个人。本程序所需的设备与隐静脉法相似, 但不需要止血带, 且优选的抑制装置为弹性锥。要选择正确的锥, 测量它与动物的身体长度, 然后使一个椭圆形的孔削减在水平的大腿。

要克制动物, 先把它放进管里, 鼻子里。然后, 折叠锥的结束, 并关闭它使用一个小的活页夹剪辑, 以防止动物退出。现在拉后腿通过椭圆形开放, 以获得对股静脉。不要抓得太紧, 因为它可能会加剧血肿的形成。其次, 从腹股沟到膝部, 将腿部的内表面剃掉, 并在无毛区域应用三层抗生素软膏。随后, 克制人应咬合股静脉, 并将小腿内面的大鼠抓向要抽血的人。将22口径的针垂直于血管, 直接刺穿静脉, 在红细胞压积管中收集血液, 因为它在皮肤表面上有珠子。穿刺应尽可能接近膝部, 以便将来在本网站前进行取样。同时, 确保穿刺深度不超过针锥的长度。为了帮助血液流动, 把大鼠的腿放在比心脏低的位置。最后, 释放腿部压力, 在穿刺部位施加压力, 以达到止血, 防止失血过多。请注意, 使用此过程可以收集大量的血液。

在讨论了血液收集技术的基本知识之后, 让我们来回顾一下为什么这些程序可能对科学研究有用的一些例子

血液经常被分析以确认疫苗开发过程中的免疫应答。在这里, 研究人员向患有膀胱癌的动物提供了一种多肽疫苗。其次, 他们通过下颌下腺采集血液并分离血清, 以检测不同细胞因子的水平, 这是疫苗有效性的指标。

通过研究人类疾病的生物标志物, 如糖尿病中的葡萄糖水平, 通常会进行血液采集以测试治疗的疗效。这些研究人员对通过尾静脉传递的糖尿病动物的新基因治疗的有效性有兴趣。在注射后, 这些研究人员从大隐静脉采集血液, 分析不同治疗方案对血糖水平的影响。

最后, 在一些实验中, 了解动物的基本状态是很重要的, 如炎症水平或压力。在这个例子中, 血浆是从一只老鼠在紧张事件之前和之后收集的。正如你所看到的, 皮质酮, 或压力荷尔蒙, 在有压力的事件发生十分钟后, 动物的水平更高。

你刚刚看了朱庇特的第二部分, 对小鼠和老鼠的血液提取技术。看完这两个视频后, 你应该更好地了解这些动物的血液收集的考虑和程序, 以及它们如何被用于今天的生物医学研究。一如既往, 感谢收看!

Summary

采血方法可引起样品分析的变化。执行样品收集的技术员的技术水平对样品的质量和动物的福利有影响。使用麻醉剂也会影响样品的质量。这里所描述的方法都是在不使用麻醉的情况下进行的, 因此这个变量已经被消除了。此外, 所有这些技术都可以用于对动物的最小不适的串行取样。

References

  1. Fernandez, I., Arantza, P., Del Teso, N., Perez, V. and Rodriguez-Cuesta, J. 2010. Clinical biochemistry parameters in C57BL/6J mice after blood collection from the submandibular vein and retroorbital plexus. Journal of American Association of Laboratory Animal Science. 49:2. 202-210.
  2. Joslin, O.T. 2009. Blood collection techniques in exotic small animals. Journal of Exotic Pet Medicine. 18:2. 117-139.
  3. Hem, A., Smith, A.J. and Solberg, P. 1998. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Laboratory Animals. 32. 364-368.
  4. Diehl, K-H., Hull, R., Morton, D., Pfister, R. Rabemampianina, Y., Smith, D., Vidal, J-M., and van de Vorstenbosch, C. 2001. A good practical guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21. 15-23.

1. 小鼠面静脉出血

  1. 设备
    1. 血液的汇集从一个自由的抓住入血液管或离心管。在某些情况下, 将血液直接收集到红细胞压积管是可取的。
    2. 黄花针将根据年龄和性别选择合适的动物大小。
      1. 针根据老鼠的年龄或大小被选择如下:
        4mm 柳叶刀: 3-4 周大鼠 (体重低于15克)
        5mm 柳叶刀: 雌性小鼠10周以下 (低于20克体重)
        5mm 柳叶刀: 雄性小鼠6周以下 (低于20克体重)
        5mm 柳叶刀: 用于 single-drop 样品 (血液涂片)
        5.5mm 柳叶刀: 雌性小鼠超过10周 (超过 ~ 20 克体重)
        5.5mm 柳叶刀: 雄性小鼠超过6周 (超过 ~ 20 克体重)
        5.5mm 柳叶刀: 大样本
  2. 克制
    1. 使用 scruffing 技术抑制小鼠。
    2. 重要的是要尽量减少头部的侧向运动。这确保了准确和安全的静脉穿刺与柳叶刀。
  3. 血液撤退
    1. 上臂柳叶刀与皮肤表面垂直。
    2. 柳叶刀点是略微倾斜的, 尖端朝向鼻子。
    3. 柳叶刀的刀刃最好用在垂直位置。
    4. 在抑制鼠标的同时, 通过测量侧眼角下方的眼睛长度和眼睛尾的宽度来定位脸部的大致面积。
    5. 用柳叶刀的点, 轻轻地感受下颚末端的点。
    6. 为了提高穿刺血管的准确性, 在侧卧床中放置鼠标。
    7. 刺穿皮肤到柳叶刀的肩膀, 在这一点上。这是一个坚定的推动, 而不是投掷镖。
    8. 在去除柳叶刀后, 血液会开始流动。
    9. 为了帮助血液流动, 把老鼠的头部放在比心脏低的位置。
    10. 收集所需的收集血管中的血液。
    11. 涂抹穿刺部位, 并释放颈背上的压力止血。

Figure 1
图1。小鼠的面部静脉出血。

2. 小鼠下颌下腺出血: 虽然与面部静脉出血的技术非常相似, 但在这种出血过程中, 设备和细微的差异是有差别的。

  1. 设备
    1. 血液的汇集是从一个自由的抓住入血液管或离心管。在某些情况下, 它是可取的直接收集到红细胞压积管。
    2. 根据年龄和性别的大小, 根据适当的尺寸选择18-22 规针。
      1. 针根据老鼠的年龄或大小被选择如下:
        22规: 3-4 周大鼠 (体重15克以下)
        20规: 雌性小鼠10周以下 (体重20克以下)
        20规: 雄性小鼠6周以下 (低于20克体重)
        20规: 用于 single-drop 样品 (血液涂片)
        18规: 雌性小鼠10周以上 (超过 ~ 20 克体重)
        18规: 雄性小鼠6周以上 (超过 ~ 20 克体重)
        18规格: 大样本
  2. 克制
    1. 使用 scruffing 技术抑制小鼠。
    2. 重要的是要尽量减少头部的侧向运动。这确保了准确和安全的静脉穿刺针。
  3. 血液撤退
    1. 针与皮肤的表面垂直。
    2. 在抑制小鼠的同时, 将下下颌静脉的大致区域定位到从嘴角的一条线与眼角的外眼角相交一条线的点。这恰好与一个小的, 无毛的酒窝发现的尾侧的嘴角和略低于下颚线。
    3. 为了提高穿刺血管的准确性, 在侧卧床中放置鼠标。
    4. 在这一点上用针尖刺穿皮肤。这是一个坚定的推动, 而不是投掷镖。
    5. 针没有插入到斜面的尖端之外。
    6. 除去针头后, 血液就会开始流动。
    7. 为了帮助血液流动, 把老鼠的头部放在比心脏低的位置。
    8. 收集所需的收集血管中的血液。
    9. 涂抹穿刺部位, 在颈背上释放压力止血。

Figure 2
图2。小鼠下颌下腺出血。

3. 隐血

  1. 设备
    1. 透明的塑料, 灵活的约束锥可以用于鼠标或老鼠。对小鼠, 修改50毫升塑料锥管可用于约束。对大鼠来说, 改性有机玻璃约束管-有一个宽到足以延长后腿的插槽-可以使用。
    2. 在使用塑料锥时, 它是根据动物的体长进行测量的, 在大腿的水平处切下一个椭圆形的孔。
    3. 一个锥形管可以修改为这种血液收集方法的小鼠, 切断管的一端, 让一个呼吸孔。一个插槽是从管帽端削减约½英寸宽和2英寸长。边缘是覆盖在布胶带或平滑的动物安全。
    4. 止血带是用3毫升注射器和2-0 吸收缝合的长度制造的。3
    5. 三重抗生素软膏或白色凡士林被用作皮肤上的防潮屏障。
    6. 22口径针头是静脉穿刺的首选尺寸。
    7. 血液被直接收集到红细胞压积管。
  2. 克制
    1. 柔性塑料锥
      1. 老鼠或老鼠被安置入锥体鼻子首先。
      2. 锥的一端是折叠和关闭使用一个小的活页夹剪辑, 以防止动物退出克制锥。
      3. 后腿被轻轻地拉过椭圆形的腹股沟开口。
    2. 小鼠锥管
      1. 把老鼠放在管鼻前。
      2. 后腿被轻轻地引导进入槽中。
      3. 中指被放置在管子的末端以防止老鼠离开管子。
      4. 食指和拇指稳定了鼠标的腿。
    3. 大鼠有机玻璃约束管
      1. 老鼠被放进管子的鼻子里。
      2. 后腿被轻轻地引导进入槽中。
      3. 该管的一端是固定的, 以防止老鼠备份和退出管。
      4. 食指和拇指稳定了老鼠的腿。
  3. 血液撤退
    1. 头发从腿的侧面被去除从典当到窒息。这可以通过采摘, 剃须, 或使用脱毛奶油。
    2. 一旦头发被移除, 少量软膏被应用并且在一个非常稀薄的层数传播在无毛区域。
    3. 止血带的应用尽可能 cranially, 并收紧。
    4. 从膝部到踝关节的外表面的隐血管将开始填充, 并将变得凸起, 并且容易形象化。
    5. 针是垂直于皮肤表面的, 直接在血管上。刺穿船小心不要将针头深深地插入腿部, 以免刺穿肌肉或击打骨头。
    6. 血液会在腿部的表面上起珠, 以收集红细胞压积管。
    7. 一旦血液收集, 松开止血带, 并施加压力, 在穿刺止血。
    8. 一旦出血停止, 将动物从束缚中取出, 并将其返回到家庭笼子。

Figure 1
图3。小鼠隐静脉出血。

4. 大鼠股静脉

  1. 设备
    1. 血液被收集到红细胞压积管。
    2. 三重抗生素软膏是需要创建一个屏障之间的皮肤/头发和血滴。
    3. 一个22口径的针头用来刺穿静脉。
    4. 一个小, 便携的头发剪约 1 "宽刀片是用来修剪从腿部的头发。
  2. 克制
    1. 大鼠使用明确的, 灵活的塑料约束锥限制。
    2. 塑料锥体被测量反对身体长度和一个卵形孔切开在大腿的水平。锥体被切开这样后腿可以形象化与静脉接触。
  3. 血液撤退
    1. 头发从大腿内侧从腹股沟到膝盖被剃掉。
    2. 三重抗生素软膏被应用在薄层的穿刺部位。
    3. 约束人闭塞静脉, 并将大鼠与小腿的内表面血。
    4. 用针头刺穿静脉。针与血管垂直, 穿刺是直接在静脉上进行的。
    5. 穿刺是尽可能接近膝盖, 允许额外的采样前的第一个血液收集网站。
    6. 船是表面的。因此, 穿刺深度不应超过针锥的长度。
    7. 为了帮助血液流动, 把大鼠的腿放在比心脏低的位置。
    8. 收集血红细胞压积管, 因为它在皮肤表面的珠子。
    9. 释放腿部压力, 在穿刺部位施加压力, 以达到止血效果。

Figure 4
图4。大鼠股静脉出血。

从小鼠和老鼠身上采集血液是广泛的科学研究所必需的, 研究人员已经开发出不同的方法来达到特定的实验目标。

在第一部分, 我们讨论了一般的血液撤退的考虑, 并回顾了复古眼眶眼出血, 尾剪和刻痕, 以及内血液收集方法。在这里, 我们将概述的程序, 从面部, 颌下腺, 隐, 股静脉采血。这些方法是较少侵入性的, 不需要麻醉, 这使得他们 methods-of-choice 时, 使用麻醉剂可能混淆血液结果或其他数据。

让我们从小鼠的面部血管中获取血样的过程开始。在鼠标上, 有一个容易接近的面部静脉贯穿脸颊。首先选择合适的设备进行操作。基本上, 你需要一个小型离心管血液收集和柳叶刀, 这是可用的不同大小。选择正确的柳叶刀取决于年龄, 性别, 和体重的动物和样本的大小要收集。有关柳叶刀选择的详细信息, 请参阅文本协议。

通过使用 scruffing 技术来限制动物的过程。适当的克制最大限度地减少头部侧向运动, 并有助于确保准确和安全的静脉穿刺与柳叶刀。如果抓地力太紧, 血流可能会受到限制, 导致收集的体积减少。一旦动物被限制, 通过测量眼侧眼角下方的眼睛长度和眼睛尾的宽度来定位脸部的大致面积。随着柳叶刀的尖端轻轻地感觉到下颚末端的点。为了更准确地刺穿容器, 您可能需要将鼠标置于其一侧。

现在, 在插入部位, 将柳叶刀垂直于皮肤表面, 尖端朝向鼻子微微。这是至关重要的, 因为如果柳叶刀尖端是定向尾, 耳道将被刺穿造成耳朵出血。穿刺的静脉, 应用坚定的推动和刺穿皮肤的柳叶刀的肩膀。一旦切除, 血液就会开始流动。为了协助水流, 将动物的头部置于低于心脏的位置。止血, 涂抹穿刺部位止血, 防止失血过多。最后, 释放对颈背的压力, 并把动物放回笼子里。请注意, 收集卷将有所不同, 但它是当务之急不超过最大数量的生存采血。参见血液撤退的文本协议一录影为详细关于推荐的最大容量收集。串行样本可以采取交替侧使用。任何一方都不应经常使用超过5-7 天。

现在让我们复习下颌下腺静脉出血的方法。虽然这是非常类似的技术, 为面部静脉出血, 有不同的设备和细微的差异, 在出血程序。

下下颌静脉沿着小鼠的下颚运行, 并与面部静脉会聚到颈静脉。这种方法不是用柳叶刀, 而是用针来进行的。但类似针, 针规的选择取决于年龄, 性别, 和动物的重量和样本大小-见文本协议的细节。

开始时, 将动物与脸部静脉出血的方式一样, 使头部的侧向运动最小。记忆过度紧抓可能会降低血液收集量。在抑制鼠标的同时, 想象一条线从嘴角的一角划过, 一条线从眼角的侧面眦。这些线的交点是下颌静脉的大致面积。这恰好与一个小的无毛酒窝发现尾的角落, 嘴角和略低于下颚线。

为了提高精确度, 将动物置于侧卧床 (3.6.1)。接下来, 把针垂直于皮肤的表面, 并插入一个坚定的推动。不要将针头插入斜面尖端, 因为插入深度大于可能导致头部、颈部和口腔内的肌肉、神经和其他血管受到创伤。除去针头后, 血液就会开始流动。像脸部静脉出血一样, 将小鼠的头部置于低于心脏的位置以协助血液流动。最后, 涂抹穿刺部位以达到止血和释放颈背上的压力, 使动物回到笼子。

现在, 让我们学习如何从隐静脉中采集血液。这是一个表面的血管, 运行背, 然后横向横跨跗关节。

你所需要的设备, 包括一个限制装置, 它可以是一个灵活的塑料大鼠或, 对小鼠一个修改50毫升塑料锥管可以使用。注意, 管端被切断, 以允许一个呼吸孔, 和一个半英寸宽和2英寸长的插槽是从盖帽结束。边缘被覆盖在血块胶带中, 以保护动物的安全。这个过程也需要一个止血带-制造使用3毫升注射器和长度0-2 吸收缝合, 三重抗生素软膏与棉签-被用作防潮屏障之间的皮肤和血滴, 理发钳, 22 计针用于静脉穿刺, 红细胞压积管采血。

要抑制一只老鼠, 先把它放进管子, 鼻子里。然后, 用食指和拇指轻轻引导后腿进入槽中并稳定它。随后, 从腿的侧面将头发从跗关节刮到窒息。然后, 涂抹一层薄薄的三重抗菌药膏到无毛区域。接下来, 尽量 cranially 止血带, 并将其拧紧。从膝部到踝关节的外表面上的隐血管将开始填充, 并将变得凸起, 并易于形象化。

接下来, 将22口径的针头直接放在血管上, 垂直于皮肤表面。并刺穿血管, 注意不要太深地插入针头, 并刺穿肌肉或骨骼。血液会在腿部的表面上起珠, 收集成红细胞压积管。一旦血液收集, 松开止血带, 并施加压力, 在穿刺止血。出血停止后, 将动物从束缚中取出, 并将其返回笼子。使用此方法收集的卷在10到150μ l 之间, 这取决于取样频率。和样品质量是可变的, 因为它可能包含组织产品。不超过4血液样本应采取在24小时内从同一条腿。

最后, 我们将学习如何从股静脉中采集血液, 这是在老鼠身上采集血液的另一个选择。股静脉从腹股沟到膝关节的内侧, 在横过膝和成为侧隐静脉之前, 使其容易接近。

股静脉出血的优点是较大的体积更容易收集比从隐静脉。缺点是, 这种程序, 在有意识的动物, 需要两个人。本程序所需的设备与隐静脉法相似, 但不需要止血带, 且优选的抑制装置为弹性锥。要选择正确的锥, 测量它与动物的身体长度, 然后使一个椭圆形的孔削减在水平的大腿。

要克制动物, 先把它放进管里, 鼻子里。然后, 折叠锥的结束, 并关闭它使用一个小的活页夹剪辑, 以防止动物退出。现在拉后腿通过椭圆形开放, 以获得对股静脉。不要抓得太紧, 因为它可能会加剧血肿的形成。其次, 从腹股沟到膝部, 将腿部的内表面剃掉, 并在无毛区域应用三层抗生素软膏。随后, 克制人应咬合股静脉, 并将小腿内面的大鼠抓向要抽血的人。将22口径的针垂直于血管, 直接刺穿静脉, 在红细胞压积管中收集血液, 因为它在皮肤表面上有珠子。穿刺应尽可能接近膝部, 以便将来在本网站前进行取样。同时, 确保穿刺深度不超过针锥的长度。为了帮助血液流动, 把大鼠的腿放在比心脏低的位置。最后, 释放腿部压力, 在穿刺部位施加压力, 以达到止血, 防止失血过多。请注意, 使用此过程可以收集大量的血液。

在讨论了血液收集技术的基本知识之后, 让我们来回顾一下为什么这些程序可能对科学研究有用的一些例子

血液经常被分析以确认疫苗开发过程中的免疫应答。在这里, 研究人员向患有膀胱癌的动物提供了一种多肽疫苗。其次, 他们通过下颌下腺采集血液并分离血清, 以检测不同细胞因子的水平, 这是疫苗有效性的指标。

通过研究人类疾病的生物标志物, 如糖尿病中的葡萄糖水平, 通常会进行血液采集以测试治疗的疗效。这些研究人员对通过尾静脉传递的糖尿病动物的新基因治疗的有效性有兴趣。在注射后, 这些研究人员从大隐静脉采集血液, 分析不同治疗方案对血糖水平的影响。

最后, 在一些实验中, 了解动物的基本状态是很重要的, 如炎症水平或压力。在这个例子中, 血浆是从一只老鼠在紧张事件之前和之后收集的。正如你所看到的, 皮质酮, 或压力荷尔蒙, 在有压力的事件发生十分钟后, 动物的水平更高。

你刚刚看了朱庇特的第二部分, 对小鼠和老鼠的血液提取技术。看完这两个视频后, 你应该更好地了解这些动物的血液收集的考虑和程序, 以及它们如何被用于今天的生物医学研究。一如既往, 感谢收看!

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