血液回収 II

Lab Animal Research

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Overview

ソース: ケイ ・ スチュワート、RLATG、RVT CMAR;ヴァレリー A. シュレーダー、RVT、RLATG。ノートルダムのノートルダム大学

マウスおよびラットの解析から血のコレクションは、さまざまな方法を通じて行うことができます。コレクションの各メソッドには、プロシージャの侵襲性と全身麻酔の必要性、必要な拘束の種類のバリエーションがあります。1歴史的に、レトロな軌道洞キャビティ内の使用が使用されています、論争がないわけで。潜在的な組織損傷に関連する論争またはレトロ軌道出血によって引き起こされる、さらには失明がマウスを出血顔面と顎下の静脈の開発につながっています。マウスとラットの両方で大伏在静脈からの採血は、開発されている別の手法です。これらの手順では、麻酔を必要としないし、したがって、適切な麻酔薬の使用を混同するかもしれない血の結果またはその他のデータ。

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JoVE Science Education Database. ラボ動物研究の必需品. 血液回収 II. JoVE, Cambridge, MA, (2018).

Principles

頬、眼の神経叢から実行されるマウスで顔面静脈と下顎に沿って実行される顎静脈があります。両方の船は、頸静脈が簡単にアクセスできるように、あごのラインのすぐ下に収束します。シリアル サンプルは、利用する側を交互にどちらかの船から撮影することができます。ただし、どちらの側 5-7 日間よりより頻繁に使用される必要があります。2

注意事項は、顔面静脈出血を実行しながら撮影する必要があります。ランセット先端が尾の方に指示された場合、外耳道は顔面静脈の近くにある、運河がピアスでしょう。これは耳から血を引き起こしているサイフォン効果になります。それにもかかわらず、血液を集めることができるとマウスは永続的な害を被るれません。しかし、これが原因その揺れに動物頭、檻の中の血が飛び散る。

顎下の静脈からの出血、針の挿入深さが重要です。4 5.5 mm を超える挿入深さは筋肉, 神経, と頭、首、口腔内にある他の船舶が外傷であります。後の合併症減少、口の中で流体による溺死に終って過度の出血を含めるし、食べたり飲んだりを妨げる口腔の構造にダメージを与えます。

動物の拘束は顔面静脈と顎静脈のプロシージャの両方の成功した裁ち落としのため重要です。首筋のグリップがあまりにもタイトの場合顔面の静脈への血流を制限できます。これは、収集量の削減になります。コレクション ボリュームは顔面静脈と顎静脈出血の両方によって異なります。制度政策に従って生存血のコレクションの最大音量と承認された動物プロトコルを超えないようにコレクション ボリュームを制限することが不可欠です。希望の金額を収集後止血を確認追加または余分な血損失を防止します。2

大伏在静脈からの採血は、シリアル裁ち落としを設定別の実行可能な代替です。外側伏在静脈は背部に, 実行する表面的な容器と足根骨の関節の間で横方向に。3この手順は、必要な準備のためレトロ軌道出血よりより審美的に受け入れられる可能性がありますが-このメソッドの麻酔の使用されない場合が実際に動物に多くのストレスと。伏在ブリードから生じる可能性のある合併症は、穿刺部位に関連しています。針穿刺は容器に直接は、血腫、皮下、血がプールします。あざができ、感染の可能性と四肢の優遇は、他の可能な問題です。このメソッドに、トレーニングが必要ですが、簡単に把握します。このメソッドで収集されたボリュームは 10-150 μ L、サンプリングの周波数に応じての間です。4サンプルは、組織の製品を含めることが品質の変数です。以上 4 つの血液サンプルは、同じ脚から 24 時間以内撮影必要があります。

大腿静脈は、ラットの血のコレクションの別のオプションです。大腿静脈は脚の付け根から膝を渡ると横方向の伏在、アクセスが容易になる前に膝関節に後ろ足の内側側面に実行します。この手順は、麻酔薬を使用せず行うことができます、それが 1 つ 2 つの人々 を必要と人が脚や腹部の静脈穿刺を行い他血を収集しながら、静脈を閉塞し接続ポイントで、脚を開催。

大腿静脈を使用する利点より大きなボリュームがそれから、伏在静脈よりもからより簡単に収集されることです。ただし、大腿静脈が大きいので、血腫形成しやすいです。これは、追加あざの原因となる足の余りにもしっかりグリップによって悪化することができます。この血の収集方法、抜針後の出血のための血液量の変化があります。この余分な血損失を防ぐために止血を確認することが不可欠です。

Procedure

1. 顔面静脈出血マウス

  1. 機器
    1. 血のコレクションは、血液チューブやエッペン チューブに無料キャッチからです。場合によっては、血液をヘマトクリット管に直接収集することをお勧めします。
    2. アキノキリンソウ ランセットは、年齢や性別によると動物の適切なサイズに基づいて選択されます。
      1. ランセットはマウスの年齢やサイズによると、次のとおり選択されます。
        4 mm ランセット: 3-4 週齢マウス (15 グラム未満の体重)
        5 mm ランセット: 雌マウス下 10 週間 (〜 20 グラム未満の体重)
        5 mm ランセット: 雄マウス未満 6 週間 (〜 20 グラム未満の体重)
        5 mm ランセット: (血液塗抹) の一滴のサンプル
        5.5 mm ランセット: 雌マウス 10 週間以上 (〜 20 グラム以上本体重量)
        5.5 mm ランセット: 雄マウスで 6 週間 (〜 20 グラム以上本体重量)
        5.5 mm ランセット: 大規模なサンプル
  2. 拘束
    1. マウスがスクラッフィング テクニックを使用して拘束されます。
    2. ヘッドのサイド ・ ツー ・ サイド動きを最小化することが重要です。これにより 『 ランセット 』 での正確かつ安全な穿刺です。
  3. 血液回収
    1. 適切なサイズのランセットは、皮膚の表面に垂直が開催されます。
    2. ランセット ポイント少し鼻の方を向いて先端角度です。
    3. ランセット刃が垂直に適しています。
    4. マウスを抑制しながら尾の方に眼の下の目の長さと目の幅を測定することによって顔面静脈のおおよその領域を探します。
    5. 『 ランセット 』 のポイントは、顎骨を終了するポイントに優しく感じる。
    6. 容器に穴をあけるの精度を上げるため横方向の臥床でマウスします。
    7. その時点では、ランセットの肩に皮膚を貫通します。これは、事務所のプッシュでダーツを投げではなく行われます。
    8. 『 ランセット 』 の除去は、時に血が流れ始めます。
    9. 血流を支援するために中心部より低い頭でマウスを置きます。
    10. 目的のコレクションの容器に血液を収集します。
    11. 止血の首筋の穿刺サイト、リリース圧力をしみ。

Figure 1
図 1。マウスで顔面静脈出血。

2 マウスの顎下出血: 機器の変化と出血ここでは微妙な違いがありますが顔面静脈出血の手法に非常に似ていますが。

  1. 機器
    1. 血のコレクションは、血液チューブやエッペン チューブに無料キャッチからです。いくつかのケースでは、ヘマトクリット管に直接収集することをお勧めします。
    2. 18-22 ゲージ針は、年齢や性別によると動物の適切なサイズに基づいて選択されます。
      1. 針がマウスの年齢やサイズによると、次のとおり選択されます。
        22 ゲージ: 3-4 週齢マウス (15 グラム未満の体重)
        20 ゲージ: 雌マウス下 10 週間 (〜 20 グラム未満の体重)
        20 ゲージ: 雄マウス未満 6 週間 (〜 20 グラム未満の体重)
        20 ゲージ: (血液塗抹) の一滴のサンプル
        18 ゲージ: 雌マウス 10 週間以上 (〜 20 グラム以上本体重量)
        18 ゲージ: 雄マウスで 6 週間 (〜 20 グラム以上本体重量)
        18 ゲージ: 大規模なサンプル
  2. 拘束
    1. マウスがスクラッフィング テクニックを使用して拘束されます。
    2. ヘッドのサイド ・ ツー ・ サイド動きを最小化することが重要です。これは針で正確かつ安全な穿刺を保証します。
  3. 血液回収
    1. 針は、皮膚の表面に垂直が開催されます。
    2. マウスを抑制しながら口のコーナーからのラインが目の眼からのラインと交差するポイントで顎下の静脈のおおよその領域を探します。これは、あごのラインで若干上下口の隅に尾を発見、毛のない小型ディンプルと一致します。
    3. 容器に穴をあけるの精度を上げるため横方向の臥床でマウスします。
    4. この時点で針の先端で皮膚に穴を開けます。これは、事務所のプッシュでダーツを投げではなく行われます。
    5. 針は、傾斜面の先端を越えて挿入されていません。
    6. 針の除去、時に血が流れ始めます。
    7. 血流を支援するために中心部より低い頭でマウスを置きます。
    8. 目的のコレクションの容器に血液を収集します。
    9. 穿刺部位のしみし、止血の首筋の圧力を解放します。

Figure 2
図 2。マウスの顎下腺静脈出血。

3. 大伏在ブリード

  1. 機器
    1. 透明なプラスチックで柔軟な拘束の円錐形は、マウスまたはラットに使用できます。マウスの変更 50 ミリリットル プラスチック円錐管は拘束に使用できます。ラット、プレキシ グラス拘束チューブを変更-スロットを持つワイド後肢足ことを拡張するための十分な使用します。
    2. プラスチック製のコーンを活用し、それは、動物の体の長さに対して、測定し、太もものレベルで楕円形の穴をカットします。
    3. 円錐管は、呼吸穴を許可するように管の端を切り落とすことによりこの血の収集方法のマウスで変更できます。スロットは、1/2 インチ幅の 2 インチ長いチューブのキャップの端からカットされます。エッジは布テープで覆われているか、動物の安全のため平滑化します。
    4. 止血帯は、3 cc の注射器と 2-0 裁断縫合の長さを使用して製造されています。3
    5. トリプル抗生物質軟膏や白色ワセリンは、皮膚上の防湿バリアとして使用されます。
    6. 22 g 針、静脈穿刺のため最寄りのサイズです。
    7. 血液をヘマトクリット管に直接収集します。
  2. 拘束
    1. 柔軟なプラスチック コーン
      1. マウスまたはラットが鼻最初円錐形に配置されます。
      2. 円錐形の端は折り返されているし、動物が拘束コーンを終了しないようにする小型バインダー クリップを使用して閉じる。
      3. 後ろ足は優しく鼠径部に楕円形を引っ張られる。
    2. マウス用コニカル チューブ
      1. マウスは、チューブの鼻最初に配置されます。
      2. 後脚は、スロットに優しく導かれます。
      3. 中指は、マウスがチューブを終了するを防ぐために管の端に配置されます。
      4. 人差し指と親指は、マウスの脚を安定させます。
    3. ラット用のプレキシ グラス拘束チューブ
      1. ラットは、チューブの鼻最初に配置されます。
      2. 後脚は、スロットに優しく導かれます。
      3. チューブの端は、バックアップおよびチューブの復帰からネズミを防ぐために保護されます。
      4. 人差し指と親指は、ラットの足を安定させます。
  3. 血液回収
    1. 髪の毛は、抑圧に飛節から足の外側面から削除されます。これは、摘採、シェービングや脱毛クリームを使用して行うことができます。
    2. 髪を削除すると、少量の軟膏が適用され、無毛エリアに非常に薄い層に 。
    3. ターニケットが可能と強化まで頭側として適用されます。
    4. 足首に膝から足の外側の表面を渡って実行する伏在容器を埋めるために開始され、調達と視覚化を容易になります。
    5. 針は、血管の上に直接皮膚の表面に垂直が開催されます。血管を穿刺します。筋肉を穿刺または骨を打撃を避けるために、足に針を深く挿入しないように注意します。
    6. 血液のヘマトクリット管を持つコレクションの脚の表面にビーズを。
    7. 血液が集められると、止血帯を緩め、止血、穿刺の圧迫します。
    8. 出血が止まり、一度、動物を拘束から外し、このホームのケージに戻る。

Figure 1
図 3。マウスの伏在静脈出血。

4 ラット用大腿静脈

  1. 機器
    1. 血液をヘマトクリット管に採血します。
    2. トリプル抗生物質軟膏は、皮膚/髪と血しぶき間の障壁を作成する必要です。
    3. 22 ゲージ針を使用して、静脈を穿刺します。
    4. 約 1"幅の刃では小さい、携帯用のバリカンを使用して、足から毛をクリップします。
  2. 拘束
    1. ラットは、明確な柔軟な塑性拘束のコーンを使用して拘束されます。
    2. プラスチック製のコーンは、ボディーの長さ、太もものレベルでカット楕円形の穴に対して測定されます。コーンは、後ろ足は静脈へのアクセスと体外できますようにカットされています。
  3. 血液回収
    1. 膝から脚の付け根から足の内側面から髪の毛は剃毛します。
    2. トリプル抗生物質軟膏は、穿刺部位に薄い層に適用されます。
    3. 拘束者は静脈が見えなくなり、瀉血専門医が直面している脚の内部の表面でラットを保持します。
    4. 静脈を穿刺するのに針を使用します。針が血管に垂直を開催され、穿刺、静脈に直接行われます。
    5. 穿刺は、できるだけ、最初の血液のコレクション サイトの前方追加サンプリングを可能にする膝の近くに作られています。
    6. 船は表面的です。したがって、穿刺の深さは、針の傾斜面の長さよりも深くはなりません。
    7. 血流を支援するためにラット心臓より下の脚の位置します。
    8. それは皮膚の表面にビーズ ヘマトクリット管に血液を収集します。
    9. 足の圧力を解放し、止血して穿刺部位に圧力を適用します。

Figure 4
図 4。ラット大腿静脈出血。

さまざまな科学的研究のために必要なマウス、ラットの採血は、研究者は実験の特定の目標を達成するためにさまざまな方法を開発しました。

最初の割賦では、一般的な血液撤退検討を議論し、レトロ軌道眼出血、尻尾の切れ端とニックス、心臓内の血液のコレクション メソッドと見直し。ここでは、我々 は顔や顎下、伏在、大腿静脈からの採血の手順を概説します。これらのメソッドは、低侵襲で麻酔方法の選択をさせるときに麻酔薬の使用を混同するかもしれない血の結果またはその他のデータを必要としません。

マウス顔面静脈から血液サンプルを得るための手続きを始めましょう。マウス、頬全体を実行する簡単にアクセスできる顔面静脈があります。まずプロシージャの適切な機器を選択します。基本的には、採血用小型遠心分離機管にはさまざまなサイズで利用可能です 『 ランセット 』 が必要です。正しいランセットの選択は、年齢、性別、および動物の体重とサイズのサンプルを収集するのに依存しています。ランセットの選択の詳細についてはテキスト プロトコルを参照してください。

スクラッフィング テクニックを使用して動物を抑制することによって手順を開始します。適切な拘束は頭のサイド ・ ツー ・ サイド動きを最小限に抑えるし、ランセットの正確かつ安全な穿刺を確保する上で役立ちます。グリップがあまりにもタイトな血流が収集量を削減の結果を制限可能性があります。動物を拘束すると、一度尾側眼の下の目の長さと目の幅を測定することによって顔面静脈のおおよその領域を探します。『 ランセット 』 の先端で優しく顎骨が終了するポイントを感じる。血管を穿刺で精度を上げるためその側にマウスを配置する可能性があります。

今、挿入部位に保持ランセット皮膚表面に垂直な鼻に向かって少しヒントを。耳からの出血を引き起こす外耳道をピアス、ランセット先端が尾の方に向けられて場合、これは重要です。静脈を穿刺、事務所のプッシュを適用し、ランセットの肩まで皮膚を貫通します。除去する時に、血が流れ始めます。流れを支援するために頭の中心より低い動物を位置します。出血を止める止血し、過度の出血を防ぐため穿刺部位をしみ。最後に、首筋の圧力を解放し、そのケージに動物を返します。コレクションのボリュームによって異なりますが、生存の血のコレクションの最大音量を超えないように不可欠だ注意してください。コレクションの推奨される最大ボリュームの詳細については血の撤退 1 つのビデオのテキスト プロトコルを参照してください。利用する側を交互にシリアル採取することができます。どちらの側を 5-7 日間より多く使わなければなりません。

今顎下静脈ブリード方法を確認してみましょう。これは非常に顔面静脈出血する手法と似ていますが、機器の変動と出血の手順で微妙な違いがあります。

顎下の静脈はマウスの下顎に沿って実行され、顔面静脈と頚静脈に収束します。このメソッドではなく、ランセット針を使用してを実行しています。しかし、ランセットと同様に、針のゲージの選択は、年齢、性別、および動物の重量とサンプル サイズによって異なります - 詳細テキスト プロトコルを参照してください。

まず、首筋、顔と同じように動物静脈出血の頭の最小限のサイド ・ ツー ・ サイド動きがあるよう。思い出してください - 過度にタイトなグリップは、採血量を減らすかもしれない。マウスを抑制しながら顔と目の眼からのラインの間で、口の隅から線を想像してください。これらのラインの交点は、顎下の静脈のおおよその面積です。これは、あごのラインで若干上下口の隅に尾を見つけた小さな毛ディンプルと一致します。

精度を上げるためには、横臥床 (3.6.1) に動物を配置します。次に、針を皮膚の表面に垂直に保持し、強く押して挿入します。挿入深さ、筋肉、神経、頭、首、口腔内にある他の船舶にトラウマになる可能性がありますより大きいかさの先端を越えて針を挿入しないでください。針の除去、時に血が流れ始めます。顔面静脈出血のような頭の血流を支援する心臓より低いとマウスの位置します。最後に、止血を達成し、そのケージに動物を戻ります首筋の圧力を解放する穿刺部位をしみ。

今、大伏在静脈から血液を収集する方法を学びましょう。この静脈は背側を実行する表面的な容器そして横足根関節の間で。

この手順に必要な機器には、柔軟なプラスチック製のものラットや、50 ミリリットル プラスチック円錐形の異形管を使用することができますマウスとなる拘束デバイスが含まれています。呼吸孔を許可するように管の端が切り取られ、キャップの端から半インチ ワイドと 2 インチの長いスロットをカットに注意してください。エッジは、動物の安全のため血栓テープで覆われています。この手順も必要です止血帯 - 3 cc 注射器、0-2 の長さを使用して製造された非吸収性縫合糸、綿棒 ― 皮膚と血しぶき、バリカン、22 ゲージの防湿を証拠として使用することでトリプル抗生物質軟膏針、穿刺と採血ヘマトクリット管のため。

マウスを牽制するには、チューブへそれを置いて、まずは鼻。優しくスロットに後ろ足をガイドし、人差し指と親指を使ってそれを安定させます。その後、膝関節に飛節から脚の外側面から毛を剃る。次に、毛のない領域にトリプル抗生物質軟膏の非常に薄い層を汚れ。次に、可能な限り頭側として止血帯を適用、それを締めます。外側の表面の間で膝から足首まで実行している伏在容器埋めるために開始され、調達との視覚化を容易になります。

次に、皮膚の表面に血管と垂直真上 22 ゲージ針を保持します。血管を穿刺、筋肉や骨の針を深く挿入しないように注意して、穴をあけます。血液のヘマトクリット管にコレクションの脚の表面にビーズを。血液が集められると、止血帯を緩め、止血、穿刺の圧迫します。出血が停止した後、拘束から動物を削除し、そのケージに戻る。このメソッドで収集されたボリュームは、サンプリングの周波数に応じて、10 に 150 μ L の間です。で、サンプルの質が変数、組織の製品が含まれる場合があります。同じ脚から 24 時間以内は 4 血液サンプル以上を取られるべきではないです。

最後に、我々 はラットの血のコレクションの別のオプションは、大腿の静脈から血液を収集する方法を学びます。大腿静脈は脚の付け根から膝を渡ると横の大伏在静脈は、アクセスが容易になる前に膝関節に後ろ足の内側の側面に実行します。

大腿静脈から出血する利点は大伏在静脈より大きなボリュームをより簡単に収集します。欠点は、理性的な動物で、この手順が 2 人を必要とすることです。この手順に必要な機器は、止血帯を必要としない、望ましい拘束デバイスは柔軟なコーン大伏在静脈メソッドに似ています。正しいコーンを選択、動物の体の長さに対してそれを測定し、楕円形の穴に太もものレベルでカットします。

動物を牽制するには、チューブへそれを置いて、まずは鼻。コーンの端を折るし、動物が終了するを防ぐために小さなバインダー クリップを使用してそれを閉じます。今大腿静脈へのアクセスを得るために楕円形で後ろ足を引き出します。グリップが余りに堅く、それが血腫の形成を悪化させる可能性があります。次に、膝、脚の付け根から足の内側の表面を離れて剃るし、毛のない領域にトリプル抗生物質軟膏の薄層を適用します。その後、拘束人べきである大腿静脈を閉塞し、採血に行く人に直面して脚の内側の表面とラットを把握します。22 ゲージ針を血管に垂直に保持を直接静脈を穿刺し、それは皮膚の表面にビーズ、ヘマトクリット管に採血します。穿刺は、このサイトの前方今後サンプリングできるように可能な限り膝の近くにする必要があります。また、穿刺の深さは針の傾斜面の長さよりも深いことを確認します。血流を支援するためにラット心臓より下の脚の位置します。最後に、足の圧力を解放し、止血し、過度の出血を防ぐため穿刺部位に圧力を適用します。大幅血液の量を多くすることができますを収集することこの手順を使用して注意してください。

血液コレクション テクニックの基礎を議論した後確認してみましょうのいくつかの例これらの手順は、科学研究の役に立つかもしれません理由

血液はしばしばワクチン開発中に免疫応答を確認する分析されます。ここでは、研究者は、膀胱がんを患っている動物にペプチド ワクチンを配信しました。次に、彼らは顎下の静脈血を集め、ワクチンの有効性の指標となる別のサイトカインのレベルを検出する血清を分離します。

採血、血糖値糖尿病のようなひと疾患のバイオ マーカーを研究することによって、治療の有効性をテストするため行われることも。これらの研究者は糖尿病動物の尾静脈を介して配信する新規遺伝子療法の有効性をテストに興味があった。次の注入、これらの調査官は異なる治療プロトコルの血糖値に及ぼす影響を分析するいくつかの時点で大伏在静脈から採血。

最後に、いくつかの実験のため、炎症やストレスのレベルなど、動物の基本的な状態を把握することが重要です。この例では血漿は、ストレスの多いイベント前後にラットから採取しました。コルチコステロンやストレス ホルモン、見ることができるレベルが動物の上位の 10 分間、ストレスの多いイベントです。

マウスとラットの血液撤退技法にゼウスの 2 番目の割賦を見てきただけ。両方のこれらのビデオを見て後、は、考慮事項とこれらの動物、どのように彼らが使用される生物医学研究の今日からの採血の手順の理解を深める必要があります。いつも見てくれてありがとう!

Summary

血のコレクションのメソッドは、サンプルの分析で変化を引き起こすことが。サンプルの収集を実行する技術者のスキルレベルは、サンプルの品質と動物の福祉に影響を及ぼします。麻酔薬の使用には、サンプルの質も影響します。ここで説明する方法はすべて麻酔を使用せず実行されます、したがってその変数が消去されています。また、これらすべての技法は動物に最小限の不快感でシリアルをサンプリングするために使用できます。

References

  1. Fernandez, I., Arantza, P., Del Teso, N., Perez, V. and Rodriguez-Cuesta, J. 2010. Clinical biochemistry parameters in C57BL/6J mice after blood collection from the submandibular vein and retroorbital plexus. Journal of American Association of Laboratory Animal Science. 49:2. 202-210.
  2. Joslin, O.T. 2009. Blood collection techniques in exotic small animals. Journal of Exotic Pet Medicine. 18:2. 117-139.
  3. Hem, A., Smith, A.J. and Solberg, P. 1998. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Laboratory Animals. 32. 364-368.
  4. Diehl, K-H., Hull, R., Morton, D., Pfister, R. Rabemampianina, Y., Smith, D., Vidal, J-M., and van de Vorstenbosch, C. 2001. A good practical guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21. 15-23.

1. 顔面静脈出血マウス

  1. 機器
    1. 血のコレクションは、血液チューブやエッペン チューブに無料キャッチからです。場合によっては、血液をヘマトクリット管に直接収集することをお勧めします。
    2. アキノキリンソウ ランセットは、年齢や性別によると動物の適切なサイズに基づいて選択されます。
      1. ランセットはマウスの年齢やサイズによると、次のとおり選択されます。
        4 mm ランセット: 3-4 週齢マウス (15 グラム未満の体重)
        5 mm ランセット: 雌マウス下 10 週間 (〜 20 グラム未満の体重)
        5 mm ランセット: 雄マウス未満 6 週間 (〜 20 グラム未満の体重)
        5 mm ランセット: (血液塗抹) の一滴のサンプル
        5.5 mm ランセット: 雌マウス 10 週間以上 (〜 20 グラム以上本体重量)
        5.5 mm ランセット: 雄マウスで 6 週間 (〜 20 グラム以上本体重量)
        5.5 mm ランセット: 大規模なサンプル
  2. 拘束
    1. マウスがスクラッフィング テクニックを使用して拘束されます。
    2. ヘッドのサイド ・ ツー ・ サイド動きを最小化することが重要です。これにより 『 ランセット 』 での正確かつ安全な穿刺です。
  3. 血液回収
    1. 適切なサイズのランセットは、皮膚の表面に垂直が開催されます。
    2. ランセット ポイント少し鼻の方を向いて先端角度です。
    3. ランセット刃が垂直に適しています。
    4. マウスを抑制しながら尾の方に眼の下の目の長さと目の幅を測定することによって顔面静脈のおおよその領域を探します。
    5. 『 ランセット 』 のポイントは、顎骨を終了するポイントに優しく感じる。
    6. 容器に穴をあけるの精度を上げるため横方向の臥床でマウスします。
    7. その時点では、ランセットの肩に皮膚を貫通します。これは、事務所のプッシュでダーツを投げではなく行われます。
    8. 『 ランセット 』 の除去は、時に血が流れ始めます。
    9. 血流を支援するために中心部より低い頭でマウスを置きます。
    10. 目的のコレクションの容器に血液を収集します。
    11. 止血の首筋の穿刺サイト、リリース圧力をしみ。

Figure 1
図 1。マウスで顔面静脈出血。

2 マウスの顎下出血: 機器の変化と出血ここでは微妙な違いがありますが顔面静脈出血の手法に非常に似ていますが。

  1. 機器
    1. 血のコレクションは、血液チューブやエッペン チューブに無料キャッチからです。いくつかのケースでは、ヘマトクリット管に直接収集することをお勧めします。
    2. 18-22 ゲージ針は、年齢や性別によると動物の適切なサイズに基づいて選択されます。
      1. 針がマウスの年齢やサイズによると、次のとおり選択されます。
        22 ゲージ: 3-4 週齢マウス (15 グラム未満の体重)
        20 ゲージ: 雌マウス下 10 週間 (〜 20 グラム未満の体重)
        20 ゲージ: 雄マウス未満 6 週間 (〜 20 グラム未満の体重)
        20 ゲージ: (血液塗抹) の一滴のサンプル
        18 ゲージ: 雌マウス 10 週間以上 (〜 20 グラム以上本体重量)
        18 ゲージ: 雄マウスで 6 週間 (〜 20 グラム以上本体重量)
        18 ゲージ: 大規模なサンプル
  2. 拘束
    1. マウスがスクラッフィング テクニックを使用して拘束されます。
    2. ヘッドのサイド ・ ツー ・ サイド動きを最小化することが重要です。これは針で正確かつ安全な穿刺を保証します。
  3. 血液回収
    1. 針は、皮膚の表面に垂直が開催されます。
    2. マウスを抑制しながら口のコーナーからのラインが目の眼からのラインと交差するポイントで顎下の静脈のおおよその領域を探します。これは、あごのラインで若干上下口の隅に尾を発見、毛のない小型ディンプルと一致します。
    3. 容器に穴をあけるの精度を上げるため横方向の臥床でマウスします。
    4. この時点で針の先端で皮膚に穴を開けます。これは、事務所のプッシュでダーツを投げではなく行われます。
    5. 針は、傾斜面の先端を越えて挿入されていません。
    6. 針の除去、時に血が流れ始めます。
    7. 血流を支援するために中心部より低い頭でマウスを置きます。
    8. 目的のコレクションの容器に血液を収集します。
    9. 穿刺部位のしみし、止血の首筋の圧力を解放します。

Figure 2
図 2。マウスの顎下腺静脈出血。

3. 大伏在ブリード

  1. 機器
    1. 透明なプラスチックで柔軟な拘束の円錐形は、マウスまたはラットに使用できます。マウスの変更 50 ミリリットル プラスチック円錐管は拘束に使用できます。ラット、プレキシ グラス拘束チューブを変更-スロットを持つワイド後肢足ことを拡張するための十分な使用します。
    2. プラスチック製のコーンを活用し、それは、動物の体の長さに対して、測定し、太もものレベルで楕円形の穴をカットします。
    3. 円錐管は、呼吸穴を許可するように管の端を切り落とすことによりこの血の収集方法のマウスで変更できます。スロットは、1/2 インチ幅の 2 インチ長いチューブのキャップの端からカットされます。エッジは布テープで覆われているか、動物の安全のため平滑化します。
    4. 止血帯は、3 cc の注射器と 2-0 裁断縫合の長さを使用して製造されています。3
    5. トリプル抗生物質軟膏や白色ワセリンは、皮膚上の防湿バリアとして使用されます。
    6. 22 g 針、静脈穿刺のため最寄りのサイズです。
    7. 血液をヘマトクリット管に直接収集します。
  2. 拘束
    1. 柔軟なプラスチック コーン
      1. マウスまたはラットが鼻最初円錐形に配置されます。
      2. 円錐形の端は折り返されているし、動物が拘束コーンを終了しないようにする小型バインダー クリップを使用して閉じる。
      3. 後ろ足は優しく鼠径部に楕円形を引っ張られる。
    2. マウス用コニカル チューブ
      1. マウスは、チューブの鼻最初に配置されます。
      2. 後脚は、スロットに優しく導かれます。
      3. 中指は、マウスがチューブを終了するを防ぐために管の端に配置されます。
      4. 人差し指と親指は、マウスの脚を安定させます。
    3. ラット用のプレキシ グラス拘束チューブ
      1. ラットは、チューブの鼻最初に配置されます。
      2. 後脚は、スロットに優しく導かれます。
      3. チューブの端は、バックアップおよびチューブの復帰からネズミを防ぐために保護されます。
      4. 人差し指と親指は、ラットの足を安定させます。
  3. 血液回収
    1. 髪の毛は、抑圧に飛節から足の外側面から削除されます。これは、摘採、シェービングや脱毛クリームを使用して行うことができます。
    2. 髪を削除すると、少量の軟膏が適用され、無毛エリアに非常に薄い層に 。
    3. ターニケットが可能と強化まで頭側として適用されます。
    4. 足首に膝から足の外側の表面を渡って実行する伏在容器を埋めるために開始され、調達と視覚化を容易になります。
    5. 針は、血管の上に直接皮膚の表面に垂直が開催されます。血管を穿刺します。筋肉を穿刺または骨を打撃を避けるために、足に針を深く挿入しないように注意します。
    6. 血液のヘマトクリット管を持つコレクションの脚の表面にビーズを。
    7. 血液が集められると、止血帯を緩め、止血、穿刺の圧迫します。
    8. 出血が止まり、一度、動物を拘束から外し、このホームのケージに戻る。

Figure 1
図 3。マウスの伏在静脈出血。

4 ラット用大腿静脈

  1. 機器
    1. 血液をヘマトクリット管に採血します。
    2. トリプル抗生物質軟膏は、皮膚/髪と血しぶき間の障壁を作成する必要です。
    3. 22 ゲージ針を使用して、静脈を穿刺します。
    4. 約 1"幅の刃では小さい、携帯用のバリカンを使用して、足から毛をクリップします。
  2. 拘束
    1. ラットは、明確な柔軟な塑性拘束のコーンを使用して拘束されます。
    2. プラスチック製のコーンは、ボディーの長さ、太もものレベルでカット楕円形の穴に対して測定されます。コーンは、後ろ足は静脈へのアクセスと体外できますようにカットされています。
  3. 血液回収
    1. 膝から脚の付け根から足の内側面から髪の毛は剃毛します。
    2. トリプル抗生物質軟膏は、穿刺部位に薄い層に適用されます。
    3. 拘束者は静脈が見えなくなり、瀉血専門医が直面している脚の内部の表面でラットを保持します。
    4. 静脈を穿刺するのに針を使用します。針が血管に垂直を開催され、穿刺、静脈に直接行われます。
    5. 穿刺は、できるだけ、最初の血液のコレクション サイトの前方追加サンプリングを可能にする膝の近くに作られています。
    6. 船は表面的です。したがって、穿刺の深さは、針の傾斜面の長さよりも深くはなりません。
    7. 血流を支援するためにラット心臓より下の脚の位置します。
    8. それは皮膚の表面にビーズ ヘマトクリット管に血液を収集します。
    9. 足の圧力を解放し、止血して穿刺部位に圧力を適用します。

Figure 4
図 4。ラット大腿静脈出血。

さまざまな科学的研究のために必要なマウス、ラットの採血は、研究者は実験の特定の目標を達成するためにさまざまな方法を開発しました。

最初の割賦では、一般的な血液撤退検討を議論し、レトロ軌道眼出血、尻尾の切れ端とニックス、心臓内の血液のコレクション メソッドと見直し。ここでは、我々 は顔や顎下、伏在、大腿静脈からの採血の手順を概説します。これらのメソッドは、低侵襲で麻酔方法の選択をさせるときに麻酔薬の使用を混同するかもしれない血の結果またはその他のデータを必要としません。

マウス顔面静脈から血液サンプルを得るための手続きを始めましょう。マウス、頬全体を実行する簡単にアクセスできる顔面静脈があります。まずプロシージャの適切な機器を選択します。基本的には、採血用小型遠心分離機管にはさまざまなサイズで利用可能です 『 ランセット 』 が必要です。正しいランセットの選択は、年齢、性別、および動物の体重とサイズのサンプルを収集するのに依存しています。ランセットの選択の詳細についてはテキスト プロトコルを参照してください。

スクラッフィング テクニックを使用して動物を抑制することによって手順を開始します。適切な拘束は頭のサイド ・ ツー ・ サイド動きを最小限に抑えるし、ランセットの正確かつ安全な穿刺を確保する上で役立ちます。グリップがあまりにもタイトな血流が収集量を削減の結果を制限可能性があります。動物を拘束すると、一度尾側眼の下の目の長さと目の幅を測定することによって顔面静脈のおおよその領域を探します。『 ランセット 』 の先端で優しく顎骨が終了するポイントを感じる。血管を穿刺で精度を上げるためその側にマウスを配置する可能性があります。

今、挿入部位に保持ランセット皮膚表面に垂直な鼻に向かって少しヒントを。耳からの出血を引き起こす外耳道をピアス、ランセット先端が尾の方に向けられて場合、これは重要です。静脈を穿刺、事務所のプッシュを適用し、ランセットの肩まで皮膚を貫通します。除去する時に、血が流れ始めます。流れを支援するために頭の中心より低い動物を位置します。出血を止める止血し、過度の出血を防ぐため穿刺部位をしみ。最後に、首筋の圧力を解放し、そのケージに動物を返します。コレクションのボリュームによって異なりますが、生存の血のコレクションの最大音量を超えないように不可欠だ注意してください。コレクションの推奨される最大ボリュームの詳細については血の撤退 1 つのビデオのテキスト プロトコルを参照してください。利用する側を交互にシリアル採取することができます。どちらの側を 5-7 日間より多く使わなければなりません。

今顎下静脈ブリード方法を確認してみましょう。これは非常に顔面静脈出血する手法と似ていますが、機器の変動と出血の手順で微妙な違いがあります。

顎下の静脈はマウスの下顎に沿って実行され、顔面静脈と頚静脈に収束します。このメソッドではなく、ランセット針を使用してを実行しています。しかし、ランセットと同様に、針のゲージの選択は、年齢、性別、および動物の重量とサンプル サイズによって異なります - 詳細テキスト プロトコルを参照してください。

まず、首筋、顔と同じように動物静脈出血の頭の最小限のサイド ・ ツー ・ サイド動きがあるよう。思い出してください - 過度にタイトなグリップは、採血量を減らすかもしれない。マウスを抑制しながら顔と目の眼からのラインの間で、口の隅から線を想像してください。これらのラインの交点は、顎下の静脈のおおよその面積です。これは、あごのラインで若干上下口の隅に尾を見つけた小さな毛ディンプルと一致します。

精度を上げるためには、横臥床 (3.6.1) に動物を配置します。次に、針を皮膚の表面に垂直に保持し、強く押して挿入します。挿入深さ、筋肉、神経、頭、首、口腔内にある他の船舶にトラウマになる可能性がありますより大きいかさの先端を越えて針を挿入しないでください。針の除去、時に血が流れ始めます。顔面静脈出血のような頭の血流を支援する心臓より低いとマウスの位置します。最後に、止血を達成し、そのケージに動物を戻ります首筋の圧力を解放する穿刺部位をしみ。

今、大伏在静脈から血液を収集する方法を学びましょう。この静脈は背側を実行する表面的な容器そして横足根関節の間で。

この手順に必要な機器には、柔軟なプラスチック製のものラットや、50 ミリリットル プラスチック円錐形の異形管を使用することができますマウスとなる拘束デバイスが含まれています。呼吸孔を許可するように管の端が切り取られ、キャップの端から半インチ ワイドと 2 インチの長いスロットをカットに注意してください。エッジは、動物の安全のため血栓テープで覆われています。この手順も必要です止血帯 - 3 cc 注射器、0-2 の長さを使用して製造された非吸収性縫合糸、綿棒 ― 皮膚と血しぶき、バリカン、22 ゲージの防湿を証拠として使用することでトリプル抗生物質軟膏針、穿刺と採血ヘマトクリット管のため。

マウスを牽制するには、チューブへそれを置いて、まずは鼻。優しくスロットに後ろ足をガイドし、人差し指と親指を使ってそれを安定させます。その後、膝関節に飛節から脚の外側面から毛を剃る。次に、毛のない領域にトリプル抗生物質軟膏の非常に薄い層を汚れ。次に、可能な限り頭側として止血帯を適用、それを締めます。外側の表面の間で膝から足首まで実行している伏在容器埋めるために開始され、調達との視覚化を容易になります。

次に、皮膚の表面に血管と垂直真上 22 ゲージ針を保持します。血管を穿刺、筋肉や骨の針を深く挿入しないように注意して、穴をあけます。血液のヘマトクリット管にコレクションの脚の表面にビーズを。血液が集められると、止血帯を緩め、止血、穿刺の圧迫します。出血が停止した後、拘束から動物を削除し、そのケージに戻る。このメソッドで収集されたボリュームは、サンプリングの周波数に応じて、10 に 150 μ L の間です。で、サンプルの質が変数、組織の製品が含まれる場合があります。同じ脚から 24 時間以内は 4 血液サンプル以上を取られるべきではないです。

最後に、我々 はラットの血のコレクションの別のオプションは、大腿の静脈から血液を収集する方法を学びます。大腿静脈は脚の付け根から膝を渡ると横の大伏在静脈は、アクセスが容易になる前に膝関節に後ろ足の内側の側面に実行します。

大腿静脈から出血する利点は大伏在静脈より大きなボリュームをより簡単に収集します。欠点は、理性的な動物で、この手順が 2 人を必要とすることです。この手順に必要な機器は、止血帯を必要としない、望ましい拘束デバイスは柔軟なコーン大伏在静脈メソッドに似ています。正しいコーンを選択、動物の体の長さに対してそれを測定し、楕円形の穴に太もものレベルでカットします。

動物を牽制するには、チューブへそれを置いて、まずは鼻。コーンの端を折るし、動物が終了するを防ぐために小さなバインダー クリップを使用してそれを閉じます。今大腿静脈へのアクセスを得るために楕円形で後ろ足を引き出します。グリップが余りに堅く、それが血腫の形成を悪化させる可能性があります。次に、膝、脚の付け根から足の内側の表面を離れて剃るし、毛のない領域にトリプル抗生物質軟膏の薄層を適用します。その後、拘束人べきである大腿静脈を閉塞し、採血に行く人に直面して脚の内側の表面とラットを把握します。22 ゲージ針を血管に垂直に保持を直接静脈を穿刺し、それは皮膚の表面にビーズ、ヘマトクリット管に採血します。穿刺は、このサイトの前方今後サンプリングできるように可能な限り膝の近くにする必要があります。また、穿刺の深さは針の傾斜面の長さよりも深いことを確認します。血流を支援するためにラット心臓より下の脚の位置します。最後に、足の圧力を解放し、止血し、過度の出血を防ぐため穿刺部位に圧力を適用します。大幅血液の量を多くすることができますを収集することこの手順を使用して注意してください。

血液コレクション テクニックの基礎を議論した後確認してみましょうのいくつかの例これらの手順は、科学研究の役に立つかもしれません理由

血液はしばしばワクチン開発中に免疫応答を確認する分析されます。ここでは、研究者は、膀胱がんを患っている動物にペプチド ワクチンを配信しました。次に、彼らは顎下の静脈血を集め、ワクチンの有効性の指標となる別のサイトカインのレベルを検出する血清を分離します。

採血、血糖値糖尿病のようなひと疾患のバイオ マーカーを研究することによって、治療の有効性をテストするため行われることも。これらの研究者は糖尿病動物の尾静脈を介して配信する新規遺伝子療法の有効性をテストに興味があった。次の注入、これらの調査官は異なる治療プロトコルの血糖値に及ぼす影響を分析するいくつかの時点で大伏在静脈から採血。

最後に、いくつかの実験のため、炎症やストレスのレベルなど、動物の基本的な状態を把握することが重要です。この例では血漿は、ストレスの多いイベント前後にラットから採取しました。コルチコステロンやストレス ホルモン、見ることができるレベルが動物の上位の 10 分間、ストレスの多いイベントです。

マウスとラットの血液撤退技法にゼウスの 2 番目の割賦を見てきただけ。両方のこれらのビデオを見て後、は、考慮事項とこれらの動物、どのように彼らが使用される生物医学研究の今日からの採血の手順の理解を深める必要があります。いつも見てくれてありがとう!

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