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Prélèvement d'échantillons de sang II

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Prélèvement d'échantillons de sang II

Overview

Source : Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR ; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Université de Notre Dame, Indiana

La collecte du sang de souris et les rats pour l’analyse peut se faire par le biais de diverses méthodes. Chaque méthode de collection a des variations dans le type de contrainte nécessaire, le caractère invasif de la procédure et la nécessité d’une anesthésie générale. ¹ Historiquement, l’utilisation de la cavité du sinus rétro-orbitaire a été utilisée, mais pas sans débat. La controverse concernant les dommages potentiels des tissus, ou même la cécité, causée par rétro-orbitaire saigne a conduit au développement de la veine faciale et sous-mandibulaire saignement méthodes chez les souris. Collecte de sang de la veine saphène dans les souris et les rats est une autre technique qui a été développée. Ces procédures ne nécessitent pas d’anesthésie et sont donc indiquées lors de l’utilisation d’anesthésiques peut-être entraîner des résultats de sang ou d’autres données.

Principles

Il y a une veine faciale chez la souris qui relie le plexus oculaire à travers la joue et une veine sous-maxillaire qui court le long de la mâchoire inférieure. Les deux bateaux convergence dans la veine jugulaire, juste en dessous de la ligne de la mâchoire, ce qui les rend facilement accessibles. Série échantillons peuvent être prélevés de chaque navire en alternant le côté utilisé. Toutefois, aucune des deux parties doivent être utilisé plus souvent que tous les 5-7 jours. ²

Des précautions doivent être prises lors de l’exécution d’un saignement de la veine faciale. Car le conduit auditif est situé près de la veine faciale, si la pointe de la lancette est dirigée en direction caudale, le canal soit percé. Cela se traduira par un effet de siphon causant sang à venir de l’oreille. Malgré cela, le sang peut encore être recueilli, et la souris ne peut pas supporter des dommages permanents. Toutefois, cela peut provoquer l’animal à sa bougé la tête, éclaboussures de sang dans la cage.

Lorsque le saignement de la veine sous-mandibulaire, la profondeur d’insertion de l’aiguille est critique. Un traumatisme peut entraîner une profondeur d’insertion supérieure à 4-5. 5 mm pour les muscles, les nerfs et autres navires qui se trouvent dans la tête, le cou et la cavité buccale. Des complications ultérieures comprennent l’hémorragie excessive entraînant une hypovolémie, noyade causée par le fluide dans la bouche et des dommages à des structures orales qui interfèrent avec le manger et boire.

Retenue de l’animal est crucial pour un saignement réussi pour veine faciale et procédures veine sous-maxillaire. Si la poignée sur la peau du cou est trop serrée, le débit sanguin dans la veine faciale peut être restreint. Cela se traduira par une réduction du volume collecté. Volumes de la collection peut varier sur la veine faciale et sous-mandibulaire veine saigner. Il est impératif de limiter les volumes de la collection afin qu’elles ne dépassent pas le volume maximum pour la collecte de sang de survie conformément aux politiques institutionnelles et un protocole approuvé animal. Assurant l’hémostase dès lors que la quantité désirée est collectée permettra d’éviter la perte de sang supplémentaires ou excessive. ²

Collecte de sang de la veine saphène est une autre alternative viable pour les saignements de série. La veine saphène latérale est un navire superficiel qui s’exécute sur le dos, et puis latéralement, à travers l’articulation du tarse. ³ Bien que cette procédure peut être plus esthétiquement acceptable que la purge de la rétro-orbitaire, à cause de la préparation nécessaire- et aucune utilisation de l’anesthésie pour cette méthode qu’il ne peut effectivement être plus stressante pour l’animal. Les complications qui peuvent en découler un saignement saphène sont liées à la ponction. Si la piqûre de l’aiguille n’est pas directement sur le navire, sang peut mettre en commun par voie sous-cutanée, entraînant un hématome. Hématomes, infection possible et favorisant de la branche sont les autres problèmes possibles. Cette méthode nécessite une formation, mais elle est facilement actionnée. Les volumes collectés grâce à cette méthode sont entre 10-150 µL, selon la fréquence d’échantillonnage. ⁴ les échantillons sont variables en qualité car elles peuvent contenir des produits tissues. Pas plus de quatre échantillons de sang doivent être prélevés dans un délai de 24 heures de la même jambe.

La veine fémorale est une autre option pour le prélèvement sanguin sur un rat. La veine fémorale commune s’étend sur la face médiale de la patte de l’aine à l’articulation de genou avant de traverser le genou et devenir le latéral saphène, facilement accessible. Bien que cette procédure peut être faite sans l’utilisation d’un anesthésique, il ne requiert deux personnes une personne tiendra la jambe au moment où la jambe et l’abdomen se connectent à occlure la veine, tandis que l’autre exécute la ponction veineuse et recueille le sang.

L’avantage d’utiliser la veine fémorale est qu’un plus grand volume est plus facilement collecté depuis que la veine de la saphène. Cependant, parce que la veine fémorale est grande, c’est sujette à la formation d’un hématome. Cela peut être aggravé par une prise trop ferme sur la jambe, ce qui peut causer des ecchymoses supplémentaires. Avec cette méthode de collecte de sang, il y a variation d’un montant de sang collecté en raison de saignements après le retrait de l’aiguille. Il est impératif d’assurer l’hémostase pour empêcher cette perte de sang excessive.

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Procedure

1. du visage veine saigner chez la souris

Matériel
1. Collecte de sang est d’une prise libre dans un tube de sang ou un tube Eppendorf. Dans certains cas, il convient de prélever le sang directement dans les tubes de l’hématocrite.
2. Lancettes de verge d’or seront choisis en fonction de la taille appropriée pour l’animal selon l’âge et le sexe.
  1. Les lancettes sont choisis selon l’âge et la taille des souris comme suit :
    lancet 4mm : 3-4-week-old souris (moins de 15 grammes de poids corporel)
    lancet 5mm : souris femelles de moins de 10 semaines (moins de 20 grammes de poids corporel)
    lancet 5mm : souris mâles de moins de 6 semaines (moins de 20 grammes de poids corporel)
    lancet 5mm : pour les échantillons de goutte à goutte (pour les frottis sanguins)
    lancet 5,5 mm : souris femelles de plus de 10 semaines (plus environ 20 grammes de poids corporel)
    lancet 5,5 mm : souris mâles pendant 6 semaines (plus environ 20 grammes de poids corporel)
    lancet 5,5 mm : grands échantillons
Dispositif de retenue pour
1. Souris sont immobilisées à l’aide de la technique scruffing.
2. Il est important que le mouvement à côté de la tête être minimisé. Cela garantit une ponction précise et sûre avec la lancette.
Prélèvement de sang
1. La lancette de bonne taille est tenue perpendiculairement à la surface de la peau.
2. Le point de la lancet est légèrement incliné, avec la pointe tournée vers le nez.
3. La lame de bistouri est mieux utilisée en position verticale.
4. Tout en retenant la souris, localisez la superficie approximative de la veine faciale en mesurant la longueur de le œil sous le canthus latéral et la largeur de l’oeil direction caudale.
5. Avec la pointe de la lancette, doucement sentir pour le point où se termine la mâchoire.
6. Pour une meilleure précision en perforant le navire, positionnez la souris en décubitus latéral.
7. Percer la peau de l’épaule de la lancette à ce moment-là. Cela se fait avec une pression ferme et non comme lancer une fléchette.
8. Lors du retrait de la lancette, sang commencera à couler.
9. Pour aider la circulation sanguine, positionnez la souris avec la tête plus bas que le coeur.
10. Recueillir le sang dans le vaisseau de la collection désirée.
11. Épongez la pression de site et de la libération de ponction sur la peau du cou pour l’hémostase.

La figure 1. Purge de veine faciale chez les souris.

2. sous-maxillaire saigner chez la souris : bien que très similaire à la technique pour la purge de la veine faciale, il y a des variations dans l’équipement et des différences subtiles dans cette procédure de purge.

Matériel
1. Collecte du sang est d’une prise libre dans un tube de sang ou un tube Eppendorf. Dans certains cas, il est souhaitable de recueillir directement dans des tubes de l’hématocrite.
2. aiguilles de calibre 18-22 sont choisis en fonction de la taille appropriée pour l’animal selon l’âge et le sexe.
  1. Aiguilles sont choisis selon l’âge et la taille des souris comme suit :
    calibre 22 : souris vieux de 3 à 4 semaines (moins de 15 grammes de poids corporel)
    calibre 20 : souris femelles de moins de 10 semaines (moins de 20 grammes de poids corporel)
    calibre 20 : souris mâles de moins de 6 semaines (moins de 20 grammes de poids corporel)
    calibre 20 : pour les échantillons de goutte à goutte (pour les frottis sanguins)
    calibre 18 : souris femelles de plus de 10 semaines (plus environ 20 grammes de poids corporel)
    calibre 18 : souris mâles pendant 6 semaines (plus environ 20 grammes de poids corporel)
    calibre 18 : grands échantillons
Dispositif de retenue pour
1. Souris sont immobilisées à l’aide de la technique scruffing.
2. Il est important que le mouvement à côté de la tête être minimisé. Cela garantit la ponction veineuse précise et sûre avec l’aiguille.
Prélèvement de sang
1. L’aiguille est tenue perpendiculairement à la surface de la peau.
2. Tout en retenant la souris, localisez la zone approximative de la veine sous-maxillaire par le point d’intersection de ligne en partant du coin de la bouche sur une ligne allant du canthus latéral de le œil. Cela coïncide avec une fossette petite, glabre, trouvée caudale à l’angle de la bouche et un peu au-dessous de la ligne de la mâchoire.
3. Pour une meilleure précision en perforant le navire, positionnez la souris en décubitus latéral.
4. Percer la peau avec la pointe de l’aiguille à ce moment-là. Cela se fait avec une pression ferme et non comme lancer une fléchette.
5. L’aiguille n’est pas insérée au-delà de l’extrémité du biseau.
6. Lors du retrait de l’aiguille, le sang commencera à couler.
7. Pour aider la circulation sanguine, positionnez la souris avec la tête plus bas que le coeur.
8. Recueillir le sang dans le vaisseau de la collection désirée.
9. Épongez le site de ponction et relâcher la pression sur la peau du cou pour l’hémostase.

La figure 2. Purge de veine sous-mandibulaire chez la souris.

3. saphène purge

Matériel
1. Cônes en plastique transparent, souple retenue peuvent être utilisés pour la souris ou le rat. Pour les souris, mis à jour le 50 millilitre de tubes coniques en plastique peuvent être utilisés à la retenue. Pour les rats, modifiée tubes retenue en Plexiglas-avec une fente large assez pour étendre la jambe arrière-peut être utilisé.
2. Lorsque vous utilisez le cône en plastique, il est mesuré la longueur du corps de l’animal, et un trou ovale est coupé au niveau de la cuisse.
3. Un tube conique peut être modifié pour une souris pour cette méthode de collecte de sang en coupant l’extrémité du tube pour permettre un trou de respiration. Une fente est coupée de la fin de la PAC de la tube d’environ ½ pouce de large et 2 pouces de long. Les bords sont couverts de ruban de toile ou lissées pour la sécurité des animaux.
4. Un garrot est fabriqué à l’aide d’une seringue cc 3 et une longueur de suture de 2-0. ³
5. Onguent antibiotique triple ou gelée de pétrole blanche est utilisée comme une barrière étanche à l’humidité sur la peau.
6. Une aiguille de 22 calibre est la taille par défaut pour la ponction veineuse.
7. Sang est prélevé directement dans les tubes de l’hématocrite.
Dispositif de retenue pour
1. Cônes en plastique souples
  1. La souris ou le rat est placé dans le cône de nez en avant.
  2. L’extrémité du cône est pliée et fermé à l’aide d’une pince-petites notes pour empêcher l’animal de quitter le cône de retenue.
  3. La patte est légèrement aspirée dans l’ovale ouvrant à l’aine.
2. Tube conique pour souris
  1. La souris est placée dans le nez en tube avant.
  2. La patte est guidée doucement dans la fente.
  3. Le doigt du milieu est placé au-dessus de l’extrémité du tube pour empêcher la souris de quitter le tube.
  4. L’index et le pouce stabilisent la jambe de la souris.
3. Tube de retenue de plexiglas pour les rats
  1. Le rat est placé dans le nez en tube avant.
  2. La patte est guidée doucement dans la fente.
  3. L’extrémité du tube est sécurisée afin d’empêcher le rat de sauvegarder et quitter le tube.
  4. L’index et le pouce stabilisent la jambe de rat.
Prélèvement de sang
1. Le poil est prélevé à la face latérale de la jambe de la pointe du jarret à l’articulation fémoro. Cela peut être fait par la cueillette, rasage ou à l’aide d’une crème dépilatoire.
2. Après avoir retiré les cheveux, une petite quantité d’onguent est appliquée et répandue en une couche très mince sur la zone chauve.
3. Le Garrot est appliqué comme beaucoup parotidien que possible et serrés.
4. Le navire saphène courir à travers la surface extérieure de la jambe depuis le genou jusqu'à la cheville va commencer à remplir et deviendra surélevé et facile à visualiser.
5. Directement sur les vaisseaux sanguins, l’aiguille est maintenu perpendiculaire à la surface de la peau. Perforer le navire. Veillez à ne pas introduire l’aiguille profondément dans la jambe, afin d’éviter toute perforation du muscle ou de frapper des os.
6. Le sang sera billes vers le haut sur la surface de la jambe pour la collection avec le tube de l’hématocrite.
7. Une fois que le sang a été prélevé, desserrer le garrot et appliquer une pression sur la piqûre pour l’hémostase.
8. Une fois que le saignement a cessé, retirer l’animal de la retenue et le retourner à la cage.

La figure 3. Veine saphène saigner chez la souris.

4. fémorale veine pour les rats

Matériel
1. Le sang est recueilli dans un tube de l’hématocrite.
2. Onguent antibiotique triple est nécessaire pour créer une barrière entre la peau et les cheveux et la goutte de sang.
3. Une aiguille de 22 calibre est utilisée pour la ponction de la veine.
4. Une tondeuse à cheveux petite, portable avec environ une 1" lame large est utilisée pour couper les cheveux de la jambe.
Dispositif de retenue pour
1. Des rats sont retenus à l’aide d’un cône de retenue en plastique clair et flexible.
2. Les cônes en plastique sont évalués en fonction de la longueur du corps et un trou ovale coupé au niveau de la cuisse. Le cône est coupé telle que la patte arrière peut être extériorisée avec accès à la veine.
Prélèvement de sang
1. Le poil est rasé de la surface interne de la jambe de l’aine au genou.
2. Onguent antibiotique triple s’applique en fine couche sur le site de ponction.
3. La personne retenue pour occlusion de la veine et détient le rat avec la surface interne de la jambe vers le prélèvement.
4. Utilisez l’aiguille à ponction de la veine. L’aiguille est perpendiculaire au vaisseau sanguin et la ponction se faite directement sur la veine.
5. La ponction est faite au plus près du genou que possible, permettant des prélèvements complémentaires avant le premier site de collecte de sang.
6. Le navire est superficiel. Par conséquent, la profondeur de la ponction ne doit pas être supérieure à la longueur du biseau de l’aiguille.
7. Pour aider la circulation sanguine, placez le rat avec la jambe inférieure à cœur.
8. Recueillir le sang dans les tubes d’hématocrite comme il perle sur la surface de la peau.
9. Relâcher la pression sur la jambe et appliquer une pression sur le site de ponction pour atteindre l’hémostase.

La figure 4. Purge de la veine fémorale chez les rats.

Collecte de sang de rats et de souris est nécessaire pour une grande variété d’études scientifiques et chercheurs ont mis au point différentes méthodes pour atteindre des objectifs précis expérimentales.

Dans le premier épisode, nous discute l’examen retrait de sang générale et revu la purge d’oeil rétro-orbitaire, cisailles de queue et pseudos, ainsi que les méthodes de collecte de sang intracardiaque. Ici, nous énoncerons les modalités de collecte de sang des veines faciales, sous-maxillaire, saphènes et fémorale. Ces méthodes sont moins invasives et ne nécessitent pas d’anesthésie, ce qui les rend des méthodes de choix lors de l’utilisation d’anesthésiques peut-être entraîner des résultats de sang ou d’autres données.

Commençons par la procédure d’obtention d’un échantillon de sang d’une veine faciale murine. Sur la souris, il y a une veine faciale facilement accessible qui traverse la joue. Commencez par choisir l’équipement approprié pour la procédure. Fondamentalement, vous avez besoin d’un tube à centrifuger petit pour prélèvement sanguin et une lancette, qui est disponible dans différentes tailles. Sélection de lancet correct dépend de l’âge, le sexe et poids corporel de l’animal et la taille de l’échantillon à prélever. Voir protocole texte pour plus de détails sur la sélection lancette.

Commencer la procédure en limitant l’animal à l’aide de la technique scruffing. Bonne retenue minimise le mouvement à côté de la tête et contribue à assurer une ponction précise et sûre avec la lancette. Si la poignée est trop serrée, le flux sanguin peut être restreint, ce qui entraîne un diminution du volume collecté. Une fois que l’animal est immobilisé, localisez la superficie approximative de la veine faciale en mesurant la longueur de le œil sous le canthus latéral et la largeur de l’oeil direction caudale. Avec la pointe de la lancette doucement sentir pour le point où se termine la mâchoire. Pour une meilleure précision en perforant le navire, vous pouvez positionner la souris sur le côté.

Maintenant, sur le site d’insertion, maintenez la lancette perpendiculaire à la surface de la peau avec la pointe tournée légèrement vers le nez. C’est grave, car si la pointe de la lancette est dirigée en direction caudale, le conduit auditif soit percé causant une hémorragie de l’oreille. Ponction de la veine, appliquez une pression ferme et percer la peau jusqu'à l’épaule lancet. Lors du retrait, le sang commence à couler. Pour faciliter l’écoulement, placez l’animal avec la tête plus bas que le coeur. Pour arrêter l’hémorragie, épongez le site de ponction pour atteindre l’hémostase et éviter toute perte de sang excessive. Enfin, relâchez la pression sur la peau du cou et retourner l’animal de sa cage. Notez que les volumes de la collection peut varier, mais il est impératif de ne pas dépasser le volume maximum pour la collecte de sang de survie. Voir le protocole de texte de la retrait de sang une vidéo pour plus de détails sur le volume maximal recommandé de collection. Série échantillons peuvent être prélevés par l’alternance du côté utilisé. Aucune des deux parties devraient être utilisé plus souvent que tous les 5-7 jours.

Maintenant passons en revue la méthode de purge de veine sous-maxillaire. Bien que cela soit très similaire à la technique pour la purge de la veine faciale, il y a des variations dans l’équipement et des différences subtiles dans la procédure de purge.

La veine sous-maxillaire s’étend le long de la mâchoire inférieure de la souris et converge avec la veine faciale dans la veine jugulaire. Au lieu d’une lancette, cette méthode est exécutée à l’aide d’aiguilles. Mais semblable à lancettes, mesure d’aiguille est dépendant de l’âge, le sexe et taille de poids et l’échantillon de l’animal - Voir le texte de protocole pour plus de détails.

Pour commencer, scruff l’animal de la même manière que pour le facial veine saigner afin qu’il y a mouvement minimal d’à côté de la tête. Rappel - poignée trop serré peut diminuer le volume de collecte de sang. Tout en retenant la souris, Imaginez une ligne allant de l’angle de la bouche sur le visage et une ligne allant du canthus latéral de le œil. Le point d’intersection de ces lignes est la surface approximative de la veine sous-maxillaire. Cela coïncide avec une petite fossette glabre trouvée caudale à l’angle de la bouche et un peu au-dessous de la ligne de la mâchoire.

Pour une meilleure précision, placez l’animal en décubitus latéral (3.6.1). Ensuite, tenez l’aiguille perpendiculairement à la surface de la peau et l’insérer avec une pression ferme. NE pas insérer l’aiguille au-delà de l’extrémité en biseau, comme la profondeur d’insertion supérieure qui peut entraîner un traumatisme pour les muscles, les nerfs et les autres navires qui se trouvent dans la tête, le cou et la cavité buccale. Lors du retrait de l’aiguille, le sang commence à couler. Comme pour la purge de la veine faciale, positionnez la souris avec la tête plus bas que le coeur pour aider à la circulation du sang. Enfin, épongez le site de ponction pour atteindre l’hémostase et de relâcher la pression sur la peau du cou pour retourner l’animal de sa cage.

Maintenant, nous allons apprendre à prélever le sang de la veine saphène. Cette veine est un vaisseau superficiel qui s’exécute sur le dos et ensuite latéralement à travers l’articulation du tarse.

L’équipement dont vous avez besoin pour cette procédure comprend un dispositif de retenue, ce qui pourrait être un flexible plastique pour rats ou, pour les souris qu'a mis à jour le tube à fond conique en plastique 50-millilitre peut être utilisé. Notez que l’extrémité du tube est coupée pour permettre à un trou de respiration, et une fente longue de demi-pouce, large et de 2 pouces est coupée de la fin de la PAC. Les bords sont recouverts de ruban caillot pour la sécurité de l’animal. Cette procédure requiert également un garrot--fabriqué à l’aide d’une seringue cc 3 et une longueur de 0-2 une suture non résorbable, onguent antibiotique triple avec un écouvillon--pour être utilisé comme une barrière d’humidité entre la peau et la goutte de sang, une tondeuse à cheveux, un 22 calibre aiguille de ponction veineuse et hématocrite tube de prélèvement sanguin.

Pour retenir une souris, placez-le dans le tube, tête en premier. Puis, doucement guider la patte dans la fente et se stabiliser à l’aide de l’index et le pouce. Par la suite, raser les poils de la face latérale de la jambe de la pointe du jarret à l’étouffer. Ensuite, étalez une couche très mince de l’onguent antibiotique triple vers la zone glabre. Par la suite, appliquer le tourniquet pour autant parotidien possible et serrez-la. Le navire saphène qui traverse la surface externe du genou jusqu'à la cheville va commencer à remplir et deviendra surélevé et facile à visualiser.

Ensuite, tenir une aiguille de calibre 22 directement sur les vaisseaux sanguins et perpendiculaire à la surface de la peau. Et perforation du navire, en veillant à ne pas insérer l’aiguille trop profondément et perforer des muscles ou d’os. Le sang sera billes vers le haut sur la surface de la jambe pour la collecte dans un tube de l’hématocrite. Une fois que le sang a été prélevé, desserrer le garrot et appliquer une pression sur la piqûre pour l’hémostase. Après que le saignement a cessé, retirer l’animal de la retenue et le retourner à sa cage. Les volumes collectés grâce à cette méthode sont entre 10 et 150 μL, selon la fréquence d’échantillonnage. Et la qualité de l’échantillon est variable, car elle pourrait contenir des produits tissues. Aucuns plus que des échantillons de sang 4 ne devrait être prise dans un délai de 24 heures de la même jambe.

Enfin, nous allons apprendre à prélever le sang de la veine fémorale, ce qui est une autre option pour le prélèvement sanguin sur un rat. La veine fémorale commune fonctionne sur la face médiale de la patte de l’aine à l’articulation de genou avant de traverser le genou et devient la veine saphène latérale, rendant facilement accessible.

L’avantage de la purge de la veine fémorale est qu’un plus grand volume est plus facilement récolté que dans la veine saphène. L’inconvénient est que cette procédure, chez des animaux conscient, nécessite deux personnes. Le matériel nécessaire pour cette procédure sont semblables à la méthode de la veine saphène, sauf qu’il ne nécessite pas le garrot et le dispositif de retenue préférable est un cône flexible. Pour sélectionner le cône correct, mesurer la longueur du corps de l’animal et ensuite faire un trou ovale coupé au niveau de la cuisse.

Pour maîtriser l’animal, placez-le dans le tube, tête en premier. Puis, plier l’extrémité du cône et le fermer à l’aide d’une pince-petites notes pour empêcher l’animal de quitter. Maintenant, tirez la patte arrière par l’intermédiaire de l’ovale d’ouverture pour accéder à la veine fémorale. Ne pas serrer trop fort car il pourrait exacerber la formation d’hématome. Ensuite, raser la surface intérieure de la jambe de l’aine au genou et appliquer une couche mince d’onguent antibiotique triple sur la zone glabre. Par la suite, la personne retenue doit occlure la veine fémorale et saisir le rat avec une surface intérieure de la jambe, face à la personne qui va prélever du sang. L’aiguille de calibre 22 maintenant perpendiculaire au vaisseau sanguin, directement ponction de la veine et de recueillir le sang dans des tubes de l’hématocrite comme il perle sur la surface de la peau. La ponction doit être aussi près du genou que possible pour permettre un prélèvement futur antérieur à ce site. En outre, assurez-vous que la profondeur de la ponction est n’est pas supérieure à la longueur du biseau de l’aiguille. Pour aider la circulation sanguine, placez le rat avec la jambe inférieure à cœur. Enfin, relâchez la pression sur la jambe et appliquer une pression sur le site de ponction pour atteindre l’hémostase et éviter toute perte de sang excessive. Notez que beaucoup plus de quantité de sang peuvent être collectées à l’aide de cette procédure.

Après avoir discuté les rudiments des techniques de collecte de sang, passons en revue quelques exemples de la raison pour laquelle ces procédures peuvent être utiles pour la recherche scientifique

Sang est souvent analysé pour confirmer la réponse immunitaire au cours de l’élaboration de vaccins. Ici, les chercheurs envoyées un vaccin peptidique aux animaux souffrant de cancer de la vessie. Ensuite, ils recueilli le sang par la veine sous-maxillaires et séparé du sérum pour détecter les niveaux de différentes cytokines, qui servent d’indicateurs de l’efficacité des vaccins.

Collecte de sang est aussi couramment effectuée pour tester l’efficacité d’un traitement par l’étude de biomarqueurs de la maladie humaine, comme les taux de glycémie dans le diabète. Ces chercheurs ont été intéressés par l’évaluation de l’efficacité d’une thérapie de gène envoyée via la veine caudale chez les animaux diabétiques. Après l’injection, ces enquêteurs recueilli le sang de la veine saphène à plusieurs points dans le temps d’analyser l’effet des protocoles de traitement différent sur le taux de glycémie.

Enfin, pour certaines expériences, il est important de connaître l’état de base de l’animal, comme le niveau d’inflammation ou de stress. Dans cet exemple, le plasma sanguin a été prélevé un rat avant et après un événement stressant. Et comme vous pouvez le voir, la corticostérone, ou l’hormone de stress, le niveau est plus élevé chez les animaux de dix minutes qui suivent l’événement stressant.

Vous avez juste regardé deuxième tranche de JoVE sur les techniques de retrait de sang pour les souris et les rats. Après avoir vu les deux ces vidéos, vous devriez avoir une meilleure compréhension des considérations et des procédures pour la collecte de sang de ces animaux et comment ils sont utilisés en recherche biomédicale aujourd'hui. Comme toujours, Merci pour regarder !

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Applications and Summary

La méthode de collecte de sang peut provoquer une variation dans l’analyse de l’échantillon. Le niveau de compétence du technicien effectuant le prélèvement des échantillons a un impact sur la qualité de l’échantillon et le bien-être de l’animal. L’utilisation d’anesthésiques peut également affecter la qualité de l’échantillon. Les méthodes décrites ici sont toutes effectuées sans l’utilisation de l’anesthésie, donc cette variable a été éliminée. En outre, toutes ces techniques peuvent être utilisé pour la série d’échantillonnage avec un inconfort minimal à l’animal.

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References

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Joslin, O.T. 2009. Blood collection techniques in exotic small animals. Journal of Exotic Pet Medicine. 18:2. 117-139.
Hem, A., Smith, A.J. and Solberg, P. 1998. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Laboratory Animals. 32. 364-368.
Diehl, K-H., Hull, R., Morton, D., Pfister, R. Rabemampianina, Y., Smith, D., Vidal, J-M., and van de Vorstenbosch, C. 2001. A good practical guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21. 15-23.

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Collecte de sang de rats et de souris est nécessaire pour une grande variété d’études scientifiques et chercheurs ont mis au point différentes méthodes pour atteindre des objectifs précis expérimentales.

Dans le premier épisode, nous discute l’examen retrait de sang générale et revu la purge d’oeil rétro-orbitaire, cisailles de queue et pseudos, ainsi que les méthodes de collecte de sang intracardiaque. Ici, nous énoncerons les modalités de collecte de sang des veines faciales, sous-maxillaire, saphènes et fémorale. Ces méthodes sont moins invasives et ne nécessitent pas d’anesthésie, ce qui les rend des méthodes de choix lors de l’utilisation d’anesthésiques peut-être entraîner des résultats de sang ou d’autres données.

Commençons par la procédure d’obtention d’un échantillon de sang d’une veine faciale murine. Sur la souris, il y a une veine faciale facilement accessible qui traverse la joue. Commencez par choisir l’équipement approprié pour la procédure. Fondamentalement, vous avez besoin d’un tube à centrifuger petit pour prélèvement sanguin et une lancette, qui est disponible dans différentes tailles. Sélection de lancet correct dépend de l’âge, le sexe et poids corporel de l’animal et la taille de l’échantillon à prélever. Voir protocole texte pour plus de détails sur la sélection lancette.

Commencer la procédure en limitant l’animal à l’aide de la technique scruffing. Bonne retenue minimise le mouvement à côté de la tête et contribue à assurer une ponction précise et sûre avec la lancette. Si la poignée est trop serrée, le flux sanguin peut être restreint, ce qui entraîne un diminution du volume collecté. Une fois que l’animal est immobilisé, localisez la superficie approximative de la veine faciale en mesurant la longueur de le œil sous le canthus latéral et la largeur de l’oeil direction caudale. Avec la pointe de la lancette doucement sentir pour le point où se termine la mâchoire. Pour une meilleure précision en perforant le navire, vous pouvez positionner la souris sur le côté.

Maintenant, sur le site d’insertion, maintenez la lancette perpendiculaire à la surface de la peau avec la pointe tournée légèrement vers le nez. C’est grave, car si la pointe de la lancette est dirigée en direction caudale, le conduit auditif soit percé causant une hémorragie de l’oreille. Ponction de la veine, appliquez une pression ferme et percer la peau jusqu'à l’épaule lancet. Lors du retrait, le sang commence à couler. Pour faciliter l’écoulement, placez l’animal avec la tête plus bas que le coeur. Pour arrêter l’hémorragie, épongez le site de ponction pour atteindre l’hémostase et éviter toute perte de sang excessive. Enfin, relâchez la pression sur la peau du cou et retourner l’animal de sa cage. Notez que les volumes de la collection peut varier, mais il est impératif de ne pas dépasser le volume maximum pour la collecte de sang de survie. Voir le protocole de texte de la retrait de sang une vidéo pour plus de détails sur le volume maximal recommandé de collection. Série échantillons peuvent être prélevés par l’alternance du côté utilisé. Aucune des deux parties devraient être utilisé plus souvent que tous les 5-7 jours.

Maintenant passons en revue la méthode de purge de veine sous-maxillaire. Bien que cela soit très similaire à la technique pour la purge de la veine faciale, il y a des variations dans l’équipement et des différences subtiles dans la procédure de purge.

La veine sous-maxillaire s’étend le long de la mâchoire inférieure de la souris et converge avec la veine faciale dans la veine jugulaire. Au lieu d’une lancette, cette méthode est exécutée à l’aide d’aiguilles. Mais semblable à lancettes, mesure d’aiguille est dépendant de l’âge, le sexe et taille de poids et l’échantillon de l’animal - Voir le texte de protocole pour plus de détails.

Pour commencer, scruff l’animal de la même manière que pour le facial veine saigner afin qu’il y a mouvement minimal d’à côté de la tête. Rappel - poignée trop serré peut diminuer le volume de collecte de sang. Tout en retenant la souris, Imaginez une ligne allant de l’angle de la bouche sur le visage et une ligne allant du canthus latéral de le œil. Le point d’intersection de ces lignes est la surface approximative de la veine sous-maxillaire. Cela coïncide avec une petite fossette glabre trouvée caudale à l’angle de la bouche et un peu au-dessous de la ligne de la mâchoire.

Pour une meilleure précision, placez l’animal en décubitus latéral (3.6.1). Ensuite, tenez l’aiguille perpendiculairement à la surface de la peau et l’insérer avec une pression ferme. NE pas insérer l’aiguille au-delà de l’extrémité en biseau, comme la profondeur d’insertion supérieure qui peut entraîner un traumatisme pour les muscles, les nerfs et les autres navires qui se trouvent dans la tête, le cou et la cavité buccale. Lors du retrait de l’aiguille, le sang commence à couler. Comme pour la purge de la veine faciale, positionnez la souris avec la tête plus bas que le coeur pour aider à la circulation du sang. Enfin, épongez le site de ponction pour atteindre l’hémostase et de relâcher la pression sur la peau du cou pour retourner l’animal de sa cage.

Maintenant, nous allons apprendre à prélever le sang de la veine saphène. Cette veine est un vaisseau superficiel qui s’exécute sur le dos et ensuite latéralement à travers l’articulation du tarse.

L’équipement dont vous avez besoin pour cette procédure comprend un dispositif de retenue, ce qui pourrait être un flexible plastique pour rats ou, pour les souris qu'a mis à jour le tube à fond conique en plastique 50-millilitre peut être utilisé. Notez que l’extrémité du tube est coupée pour permettre à un trou de respiration, et une fente longue de demi-pouce, large et de 2 pouces est coupée de la fin de la PAC. Les bords sont recouverts de ruban caillot pour la sécurité de l’animal. Cette procédure requiert également un garrot--fabriqué à l’aide d’une seringue cc 3 et une longueur de 0-2 une suture non résorbable, onguent antibiotique triple avec un écouvillon--pour être utilisé comme une barrière d’humidité entre la peau et la goutte de sang, une tondeuse à cheveux, un 22 calibre aiguille de ponction veineuse et hématocrite tube de prélèvement sanguin.

Pour retenir une souris, placez-le dans le tube, tête en premier. Puis, doucement guider la patte dans la fente et se stabiliser à l’aide de l’index et le pouce. Par la suite, raser les poils de la face latérale de la jambe de la pointe du jarret à l’étouffer. Ensuite, étalez une couche très mince de l’onguent antibiotique triple vers la zone glabre. Par la suite, appliquer le tourniquet pour autant parotidien possible et serrez-la. Le navire saphène qui traverse la surface externe du genou jusqu'à la cheville va commencer à remplir et deviendra surélevé et facile à visualiser.

Ensuite, tenir une aiguille de calibre 22 directement sur les vaisseaux sanguins et perpendiculaire à la surface de la peau. Et perforation du navire, en veillant à ne pas insérer l’aiguille trop profondément et perforer des muscles ou d’os. Le sang sera billes vers le haut sur la surface de la jambe pour la collecte dans un tube de l’hématocrite. Une fois que le sang a été prélevé, desserrer le garrot et appliquer une pression sur la piqûre pour l’hémostase. Après que le saignement a cessé, retirer l’animal de la retenue et le retourner à sa cage. Les volumes collectés grâce à cette méthode sont entre 10 et 150 μL, selon la fréquence d’échantillonnage. Et la qualité de l’échantillon est variable, car elle pourrait contenir des produits tissues. Aucuns plus que des échantillons de sang 4 ne devrait être prise dans un délai de 24 heures de la même jambe.

Enfin, nous allons apprendre à prélever le sang de la veine fémorale, ce qui est une autre option pour le prélèvement sanguin sur un rat. La veine fémorale commune fonctionne sur la face médiale de la patte de l’aine à l’articulation de genou avant de traverser le genou et devient la veine saphène latérale, rendant facilement accessible.

L’avantage de la purge de la veine fémorale est qu’un plus grand volume est plus facilement récolté que dans la veine saphène. L’inconvénient est que cette procédure, chez des animaux conscient, nécessite deux personnes. Le matériel nécessaire pour cette procédure sont semblables à la méthode de la veine saphène, sauf qu’il ne nécessite pas le garrot et le dispositif de retenue préférable est un cône flexible. Pour sélectionner le cône correct, mesurer la longueur du corps de l’animal et ensuite faire un trou ovale coupé au niveau de la cuisse.

Pour maîtriser l’animal, placez-le dans le tube, tête en premier. Puis, plier l’extrémité du cône et le fermer à l’aide d’une pince-petites notes pour empêcher l’animal de quitter. Maintenant, tirez la patte arrière par l’intermédiaire de l’ovale d’ouverture pour accéder à la veine fémorale. Ne pas serrer trop fort car il pourrait exacerber la formation d’hématome. Ensuite, raser la surface intérieure de la jambe de l’aine au genou et appliquer une couche mince d’onguent antibiotique triple sur la zone glabre. Par la suite, la personne retenue doit occlure la veine fémorale et saisir le rat avec une surface intérieure de la jambe, face à la personne qui va prélever du sang. L’aiguille de calibre 22 maintenant perpendiculaire au vaisseau sanguin, directement ponction de la veine et de recueillir le sang dans des tubes de l’hématocrite comme il perle sur la surface de la peau. La ponction doit être aussi près du genou que possible pour permettre un prélèvement futur antérieur à ce site. En outre, assurez-vous que la profondeur de la ponction est n’est pas supérieure à la longueur du biseau de l’aiguille. Pour aider la circulation sanguine, placez le rat avec la jambe inférieure à cœur. Enfin, relâchez la pression sur la jambe et appliquer une pression sur le site de ponction pour atteindre l’hémostase et éviter toute perte de sang excessive. Notez que beaucoup plus de quantité de sang peuvent être collectées à l’aide de cette procédure.

Après avoir discuté les rudiments des techniques de collecte de sang, passons en revue quelques exemples de la raison pour laquelle ces procédures peuvent être utiles pour la recherche scientifique

Sang est souvent analysé pour confirmer la réponse immunitaire au cours de l’élaboration de vaccins. Ici, les chercheurs envoyées un vaccin peptidique aux animaux souffrant de cancer de la vessie. Ensuite, ils recueilli le sang par la veine sous-maxillaires et séparé du sérum pour détecter les niveaux de différentes cytokines, qui servent d’indicateurs de l’efficacité des vaccins.

Collecte de sang est aussi couramment effectuée pour tester l’efficacité d’un traitement par l’étude de biomarqueurs de la maladie humaine, comme les taux de glycémie dans le diabète. Ces chercheurs ont été intéressés par l’évaluation de l’efficacité d’une thérapie de gène envoyée via la veine caudale chez les animaux diabétiques. Après l’injection, ces enquêteurs recueilli le sang de la veine saphène à plusieurs points dans le temps d’analyser l’effet des protocoles de traitement différent sur le taux de glycémie.

Enfin, pour certaines expériences, il est important de connaître l’état de base de l’animal, comme le niveau d’inflammation ou de stress. Dans cet exemple, le plasma sanguin a été prélevé un rat avant et après un événement stressant. Et comme vous pouvez le voir, la corticostérone, ou l’hormone de stress, le niveau est plus élevé chez les animaux de dix minutes qui suivent l’événement stressant.

Vous avez juste regardé deuxième tranche de JoVE sur les techniques de retrait de sang pour les souris et les rats. Après avoir vu les deux ces vidéos, vous devriez avoir une meilleure compréhension des considérations et des procédures pour la collecte de sang de ces animaux et comment ils sont utilisés en recherche biomédicale aujourd'hui. Comme toujours, Merci pour regarder !

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