Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

13.7: Proeflezen
INHOUDSOPGAVE

JoVE Core
Biology

This content is Free Access.

Education
Proeflezen
 
Deze voice-over is door de computer gegenereerd
TRANSCRIPT
* De tekstvertaling is door de computer gegenereerd

13.7: Proeflezen

Overzicht

De synthese van nieuwe DNA-moleculen begint wanneer DNA-polymerase nucleotiden met elkaar verbindt in een sequentie die complementair is aan de template-DNA-streng. DNA-polymerase heeft een hogere affiniteit voor de juiste base om betrouwbaarheid bij DNA-replicatie te garanderen. Het DNA-polymerase wordt bovendien proeflezen tijdens replicatie, met behulp van een exonuclease-domein dat onjuiste nucleotiden afsnijdt van de ontluikende DNA-streng.

Fouten tijdens replicatie worden gecorrigeerd door het DNA-polymerase-enzym

Genomisch DNA wordt gesynthetiseerd in de richting van 5 'naar 3'. Elke cel bevat een aantal DNA-polymerasen die verschillende rollen spelen bij het synthetiseren en corrigeren van fouten in het DNA; DNA-polymerase delta en epsilon bezitten proefleesvermogen bij het repliceren van nucleair DNA. Deze polymerasen 'lezen' elke base nadat deze aan de nieuwe streng is toegevoegd. Als de nieuw toegevoegde base onjuist is, keert de polymerase van richting om (van 3 'naar 5') en gebruikt een exonucleolytisch domein om de verkeerde base af te snijden. Vervolgens wordt het vervangen door de juiste basis.

Mutaties in het exonuclease-domein van DNA-polymerase zijn gekoppeld aan kankers

Proeflezen is belangrijk om te voorkomen dat mutaties optreden in nieuw gesynthetiseerd DNA, maar wat gebeurt er als het proefleesmechanisme faalt? Wanneer een mutatie het exonuclease-domein van DNA-polymerase verandert, verliest het het vermogen om onjuiste nucleotiden te verwijderen. Als gevolg hiervan kunnen mutaties zich snel door het genoom ophopen. Dit type mutatie is in verband gebracht met verschillende soorten kanker.

Low-Fidelity DNA-polymerase kan gemuteerde DNA-sequenties genereren

Gemodificeerde DNA-polymerasen worden in de laboratoriumwetenschappen gebruikt voor polymerasekettingreactie (PCR), een in vitro techniek om veel kopieën te maken van specifieke fragmenten van DNA. Hoewel high-fidelity-polymerasen worden gebruikt wanneer het belangrijk is dat het eindproduct perfect is, zoeken sommige technieken, zoals foutgevoelige PCR,om met opzet mutaties in een stuk DNA te genereren. Deze technieken maken gebruik van polymerasen die het proefleesvermogen hebben aangetast.


Aanbevolen Lectuur

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter