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15.8: 체외 돌연변이 유발
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Biology

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체외 돌연변이 유발
 
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15.8: 체외 돌연변이 유발

유전자의 기능에 관하여 자세히 알아보려면, 연구원은 유전자가 활성화되거나 "기절"할 때 어떻게 되는지 관찰할 수 있습니다, 유전자 조작된 녹아웃 동물을 만들어서. 녹아웃 마우스는 암, 파킨슨 병 및 당뇨병과 같은 인간 질환의 모델로 특히 유용했습니다.

프로세스

유전자는 무작위로 기절할 수 있고, 특정 유전자는 표적으로 할 수 있습니다. 특정 유전자를 노크하기 위해, 표적 벡터에게 불린 DNA의 조작된 조각은 정상 유전자를 대체하기 위하여 이용되고, 따라서 그것을 비활성화합니다.

표적 벡터는 관심 유전자의 각 측면을 측면에 있는 서열에 동일하거나 동형인 각 끝에 서열을 갖습니다. 이러한 동종 서열은 표적 벡터가 동종 재조합을 통해 유전자를 대체할 수 있게 해주며, 이는 메이오증 동안 유사한 서열과 DNA 사이에 자연적으로 발생하는 과정입니다.

표적 벡터는 전기 포기와 같은 방법을 사용하여 배양에서 마우스 배아 줄기 세포로 도입되어 세포막에서 기공을 일시적으로 생성합니다. 전형적으로, 벡터가 유전자를 적절히 대체한 세포를 식별하기 위해, 상동성 영역 들 사이의 신mycin 저항성(NeoR)을위한 유전자와 같은 양성 선택 마커를 포함하도록 설계된다. 및 바이러스 성 티미딘 키나아제 (TK)에 대한 유전자와 같은 부정적인 선택 마커 - 동종 영역 중 하나 후.

세포는 neomycin에 드러나고, 그들의 DNA에 벡터를 통합한 사람들만이 NeoR 유전자를 가지고 있기 때문에 살아남을 것입니다. 또한, 벡터가 동종 재조합을 통해 표적 유전자를 대체한 세포는 TK 유전자를 갖지 않아 약물 간시클로비르의 존재 속에서 살아남을 수 있게 한다. 따라서 간시클로비르에 노출되면 이러한 세포가 TK 유전자를 가질 것이기 때문에 벡터가 게놈에 무작위로 삽입되는 세포를 제거하는 데 사용된다.

유전자를 가진 세포는 그 때 출생까지 발전하는 여성의 자궁으로 이식되는 마우스 태아로 삽입됩니다. 결과 마우스는 키메라-세포의 혼합물로 구성 되 고 배아에서 정상적인 DNA를 가진 일부, 그리고 일부 유전자는 엔지니어링 된 세포에서 하나의 염색체에 밖으로 노크. 이 마우스는 사육되고, 그들의 세균선에 있는 유전자를 포함하는 자손은 모든 세포가 녹아웃을 위한 동질적인 마우스의 라인을 만들기 위하여 더 교배됩니다. 이 녹아웃 마우스는 그 때 유전자 기능을 공부하기 위하여 이용될 수 있습니다.


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