Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

15.9: Изоляция ДНК
СОДЕРЖАНИЕ

JoVE Core
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. You will only be able to see the first 20 seconds.

Education
Изоляция ДНК
 
Этот закадровый голос сгенерирован компьютером
ТРАНСКРИПТ
* Текстовый перевод сгенерирован компьютером

15.9: Изоляция ДНК

ДНК из клеток требуется для многих биотехнологий и научно-исследовательских применений, таких как молекулярное клонирование. Для удаления и очистки ДНК из клеток исследователи используют различные методы извлечения ДНК. Хотя специфика различных протоколов может варьироваться, некоторые общие понятия лежат в основе процесса извлечения ДНК.

Процесс

Во-первых, клетки должны быть lysed-сломанный открытым, чтобы освободить ДНК в раствор. Клетки могут быть физически lysed с помощью оборудования, такого как гомогенизатор, sonicator, или шарик загонщик, которые молоть или иным образом применить силу, чтобы сломать клетки открыты. Часто во время лиза добавляются такие вещества, как моющее средство, чтобы химически нарушить липидные клеточные мембраны, помогая выпустить ДНК из ядра и клетки. Спиннинг в центрифуге отогрывает клеточный мусор на дно, а лисат, содержащий клеточные материалы, собирается для дальнейшей обработки.

Затем ДНК должна быть отделена от других клеточных молекул, таких как РНК и белки. Таким образом, ферменты, такие как RNase и Proteinase K часто добавляются во время или после лиза, чтобы ухудшить РНК и белки, соответственно. Кроме того, органические растворители, такие как фенол и хлороформ обычно используются для отделить ДНК от белка. Как правило, образец вихревой с фенол-хлороформом, а затем центрифугируется, чтобы отделить аквеозные и органические фазы в трубке. ДНК-содержащая aqueous фаза на верхней части может быть pipetted, оставляя белок в органической фазе.

Соли часто добавляются во время извлечения ДНК, чтобы стабилизировать ДНК и помочь в осаждении его из раствора. Стандартным методом выпадения ДНК является добавление в образец холодного алкоголя, такого как этанол или изопропанол. Это приводит к тому, что ДНК формирует белый, облачный осадок внутри жидкости в трубке.

Затем образец вращается в центрифуге, в результате чего осадок ДНК собирается в нижней части трубки в виде гранулы. Гранулы промывают, удаляя жидкость, мыть в спирте, и спиннинг его снова. После окончательного мытья, гранулы повторно приостановлено в буфере, создавая aqueous решение очищенной ДНК, которая готова к исследованию или использованию в биотехнологии.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter