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15.9: DNA分离
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DNA Isolation
 
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15.9: DNA分离

许多生物技术和研究应用,如分子克隆,都需要从细胞中提取DNA。为了去除和纯化细胞中的DNA,研究人员采用了各种方法提取DNA。虽然不同协议的细节可能有所不同,但一些一般概念是DNA提取过程的基础。

过程

首先,细胞需要裂解,才能将DNA释放到溶液中。细胞可以使用均质机、超声波仪或打珠机等设备进行物理裂解,这些设备可以研磨或以其他方式施加力,使细胞破裂。通常,在裂解过程中添加洗涤剂等物质,以化学方式破坏脂质细胞膜,帮助从细胞核和细胞中释放DNA。离心机中的旋转将细胞碎片沉积到底部,然后收集含有细胞材料的裂解液进行进一步处理。

然后,DNA必须与其它细胞分子(如RNA和蛋白质)分离。因此,核糖核酸酶和蛋白酶k等酶通常在裂解过程中或裂解后添加,分别降解RNA和蛋白质。此外,有机溶剂如苯酚和氯仿通常用于从蛋白质中分离DNA。通常,用苯酚氯仿旋转样品,然后离心分离管中的水相和有机相。顶部含有水相的DNA可以被移走,留下有机相中的蛋白质。

在提取DNA的过程中,通常会加入盐来稳定DNA,并有助于将其从溶液中沉淀出来。DNA沉淀的标准方法是在样品中加入冰乙醇,如乙醇或异丙醇。这会导致DNA在试管中的液体中形成白色的浑浊沉淀物。

然后在离心机中旋转样品,使DNA沉淀在试管底部聚集成颗粒。通过除去液体,用酒精洗涤,然后再次旋转来洗涤颗粒。在最后一次洗涤后,将小球重新悬浮在缓冲液中,形成纯化DNA的水溶液,可供生物技术研究或使用。

Tags

DNA Isolation DNA Extraction Cells Lysed Physical Disruption Chemical Treatment Detergent Cell And Nuclear Membranes DNA Separation Organic Solvents Phenol Chloroform Nucleic Acids Proteins Solubility Proteinase Enzymes RNase Enzymes Degradation Of Proteins And RNA Salt Stabilization Ice Cold Alcohol Precipitation Of DNA Centrifuge Spinning Washing And Re-suspending Buffer Solution Research Applications Biotechnology Applications

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