15.9: El aislamiento de ADN
El ADN de las células es necesario para muchas aplicaciones de biotecnología e investigación, como la clonación molecular. Para eliminar y purificar el ADN de las células, los investigadores utilizan varios métodos de extracción de ADN. Si bien los detalles de los diferentes protocolos pueden variar, algunos conceptos generales subyacen al proceso de extracción de ADN.
El proceso
En primer lugar, las células necesitan ser lisadas (abiertas— para liberar el ADN en la solución. Las células se pueden lisar físicamente utilizando equipos como un homogeneizador, un sonicador o un batidor de cuentas, que muelen o aplican fuerza para romper las células abiertas. A menudo, sustancias como el detergente se añaden durante la lisis para interrumpir químicamente las membranas celulares basadas en lípidos, ayudando a liberar el ADN del núcleo y de la célula.El giro en una centrífuga sedimenta los desechos celulares hasta al fondo, y el lisado, que contiene materiales celulares, se recoge para su posterior procesamiento.
El ADN debe separarse de otras moléculas celulares, como el ARN y las proteínas. Por lo tanto, enzimas como la ARNasa y la Proteinasa K a menudo se añaden durante o después de la lisis para degradar el ARN y las proteínas, respectivamente. Además, los disolventes orgánicos como el fenol y el cloroformo se utilizan comúnmente para separar el ADN de las proteínas. Típicamente, la muestra se agita con fenol-cloroformo y luego se centrifuga para separar las fases acuosas y orgánicas en el tubo. La fase acuosa que contiene ADN en la parte superior se puede pipetear, dejando atrás la proteína en la fase orgánica.
Las sales a menudo se añaden durante la extracción de ADN para estabilizar el ADN y ayudar a precipitarlo fuera de la solución. Un método estándar de precipitación de ADN es agregar alcohol helado, como etanol o isopropanol, a la muestra. Esto hace que el ADN forme un precipitado blanco y turbio dentro del líquido en el tubo.
La muestra se hace girar en una centrífuga, haciendo que el precipitado de ADN se recoja en la parte inferior del tubo como un pellet. El pellet se lava retirando el líquido, lavándolo en alcohol y girándolo de nuevo. Después del lavado final, el pellet se vuelve a suspender en un tampón, creando una solución acuosa de ADN purificado que está lista para ser estudiada o utilizada en biotecnología.
