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15.13: 보완 DNA
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Biology

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보완 DNA
 
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15.13: 보완 DNA

개요

메신저 RNA(mRNA)로 전사되는 유전자만이 활성 상태이거나 발현되어 있다. 따라서 과학자들은 세포에서 mRNA를 추출하여 다른 세포와 조직에서 유전자 발현을 연구할 수 있습니다. 과학자는 역 전사를 통해 상호 보완적인 DNA (cDNA)로 mRNA를 변환합니다. mRNA는 인트론 (비 코딩 영역) 및 기타 규제 서열을 포함하지 않기 때문에, cDNA --genomic DNA와는 달리 - 또한 연구원이 유전자에 의해 인코딩 된 펩티드의 아미노산 서열을 직접 결정할 수 있습니다.

cDNA 합성

cDNA는 여러 가지 방법에 의해 생성될 수 있지만, 일반적인 방법은 먼저 세포로부터 총 RNA를 추출한 다음, 더 우세한 유형인 전사 RNA(tRNA) 및 리보소말(rRNA)으로부터 mRNA를 분리하는 것이다. 성숙한 진핵 mRNA는 폴리 (A) 꼬리를 가지고 있습니다 - 아데닌 뉴클레오티드의 문자열 - RNA의 다른 유형은 하지 않는 동안, 그것의 3'끝에 추가. 따라서, 흉핵뉴클레오티드(oligo-dTs)의 문자열은 컬럼 또는 자기 구슬과 같은 기판에 부착될 수 있으며, 특히 mRNA의 폴리(A) 꼬리를 가진 기저쌍에 부착될 수 있다. 폴리(A) 꼬리를 가진 mRNA가 포획되는 동안, RNA의 그밖 모형은 멀리 세척됩니다.

다음으로, 역실사-레트로바이러스의 DNA 폴리머라제 효소는 mRNA로부터 cDNA를 생성하는 데 사용된다. 대부분의 DNA 폴리머라제와 마찬가지로, 역실래는 사슬의 3'끝에만 뉴클레오티드를 첨가할 수 있기 때문에, 폴리(T) 프라이머가 폴리(A) 꼬리에 결합하여 cDNA 합성을 위한 출발점을 제공한다. cDNA 가닥은 헤어핀 루프로 끝납니다. RNA는 그 때 열변한 cDNA를 그대로 두고- 일반적으로 알칼리 처리 또는 RNase 효소로 저하됩니다.

cDNA에 보완되는 두 번째 DNA 가닥은 DNA 폴리머라제에 의해 합성되며, 종종 첫 번째 cDNA 가닥의 헤어핀 루프 또는 mRNA의 닉 조각을 프라이머로 사용한다.

결과 이중 좌초 된 cDNA는 세균 성 또는 바이러스 벡터로 삽입하고 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 복제 할 수 있습니다. 세포의 모든 mRNA또는 관심 조직의 모든 mRNA를 나타내는 cDNA 라이브러리는 추가 연구를 위해 구성될 수도 있습니다.


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