Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

4.4: Равновесная константа связывания и сила связывания
СОДЕРЖАНИЕ

JoVE Core
Molecular Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. You will only be able to see the first 20 seconds.

Education
The Equilibrium Binding Constant and Binding Strength
 
ТРАНСКРИПТ

4.4: Равновесная константа связывания и сила связывания

Константа равновесного связывания (Kb) количественно определяет силу взаимодействия белок-лиганд. Kbможно рассчитать следующим образом, когда реакция находится в равновесии:

где  P и L представляют собой несвязанный белок и лиганд соответственно, а PL представляет собой комплекс белок-лиганд. 

Поскольку количество связанного лиганда также связано со скоростью связывания лиганда, эксперименты также могут определятьKb путем изучения скоростей связывания белка и лиганда (kon) и их диссоциации (koff) с использованием следующего соотношения:

Таким образом, две категории  методов анализа связывания используются для определения константы равновесного связывания – те, которые измеряют равновесные концентрации, и те, которые измеряют кинетику реакции. В данном случае, реакция должна быть в равновесии во время измерения.

Метод определения равновесных концентраций зависит от желаемой чувствительности и простоты обнаружения сигнала. По этим причинам наиболее широко используются спектроскопические методы. В этих экспериментах реакция вызывает изменение оптической плотности реагента или продукта при заданной длине волны, обнаруживаемое оптическим спектрофотометром. В качестве альтернативы реагент или продукт могут быть помечены флуоресцентной меткой или содержать собственный флюорофор. Затем ход реакции можно измерить по изменению флуоресценции. Эти анализы проводятся путем изменения концентрации одного реагента, в то время как остальная часть эксперимента остается постоянной. Затем результаты могут быть нанесены на график и проанализированы с помощью различных методов построения кривой.

Взаимодействие между белками и лигандами также изучается с использованием различных биохимических и спектроскопических методов. Структурный анализ с использованием рентгеновской кристаллографии и ЯМР-спектроскопии посредством молекулярного моделирования помогает прогнозировать взаимодействия белок-лиганд. Теоретические и вычислительные подходы, такие как исследования стыковки белков с лигандами, широко используются для определения положения и взаимодействия низкомолекулярных лигандов, в том числе кандидатов в лекарственные препараты. Компьютерный дизайн лекарств - это быстрая и недорогая альтернатива, ускоряющая темпы традиционного тестирования лекарств методом проб и ошибок.


Литература для дополнительного чтения

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter