Bir amino asit taşıyan her tRNA molekülü, bir mRNA’nın kodlarını okuyarak bir protein dizisine dönüştürmek için, mRNA üzerindeki amino aside karşılık gelen üç nükleotidli kodon dizisini tanır. Bir hücrede bulunan 20 amino asidi kodlayan 61 farklı kodon dizisi vardır. Bir tRNA bir amino asit taşırken, tek bir amino asit, birçok farklı kodon tarafından kodlanır.tRNA antikodonunun mRNA kodonu ile eşleşmesi sırasında, ilk iki konum eşleştikten sonra, üçüncü baz pürinlerden biriyle veya pirimidinlerden biriyle eşleşebilir. Bu oynak baz, 20 tRNA’nın 61 mRNA kodonunun kodunu çözmesine olanak sağlar. Bir amino asit, aminoasil tRNA sentetazlar adı verilen bir enzim grubu tarafından, eşi olan tRNA’nın 3’ucuna kovalent olarak bağlanır.20 amino aside karşılık gelen 20 farklı aminoasil tRNA sentetazı vardır. Kataliz reaksiyonu iki adım olarak ilerler. İlk adım amino asit aktivasyonudur;bu adımda, enzim cebi içinde amino asit bir ATP ile reaksiyona girerek aminoasil AMP sentaz ara ürününü oluşturur.Esterleşmenin ikinci adımında, aktive edilmiş amino asit, tRNA’nın 3’ucundaki bir hidroksil grubuyla birleşir ve nihai aminoasil tRNA molekülünü oluşturur. Enzim yanlış amino asidi bağlarsa, bir düzeltme mekanizması ile bu hatayı düzeltebilir. Doğru amino asit, enzimin aktif bölgesi için yüksek afiniteye sahiptir.Büyük amino asitler aktif bölgeden reddedilir. Bir amino asidin boyutu doğru olan ile benzerse, bir tRNA’ya bağlanmadan önce, yanlış aminoasil AMP’ler enzim içinde ikinci bir düzenleme cebine girmeye zorlanır. Bu düzenleme yerinin boyutları doğru amino aside tam olarak uyduğundan, yanlış aminoasil AMP’ler tRNA’ya birleştirilmek yerine hidrolize edilir.