Introducción a la microscopía de luz

General Laboratory Techniques

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Summary

El microscopio óptico es un instrumento usado por los investigadores en muchos campos diferentes para magnificar a especímenes tanto como mil veces su tamaño original. En su forma más simple, se compone de un objetivo claro que magnifica la muestra y una fuente de luz para iluminarlo. Sin embargo, ligera mayoría de los microscopios es mucho más compleja y numerosas lentes ajustadas con dimensiones muy controlados todo dentro del cuerpo del microscopio sí mismo y en componentes tales como los objetivos y oculares de la casa. En este video, se describen los principales componentes del microscopio de luz y sus usos y funciones se explican en detalle. También se introducen los principios básicos de aumentos, enfoque y resolución. Funcionamiento del microscopio óptico básico comienza con traer luz a la muestra y asegurar que la fuente de luz es la correcta intensidad, la direccionalidad y la forma para producir la mejor calidad de imagen. A continuación, la muestra ampliada correctamente y traída en foco a la región de interés. Hay muchas aplicaciones prácticas para microscopía, incluyendo la observación de manchas o sin manchas de células y tejidos, resolver pequeños detalles de los especímenes y aun aumento de una región de interés durante la cirugía para ayudar con los procedimientos complejos en la escala del micrón.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Técnicas generales de laboratorio. Introducción a la microscopía de luz. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

El microscopio óptico es un instrumento usado para magnificar especímenes de investigación. Microscopios ópticos son una valiosa herramienta analítica que tienen el potencial para permitir que investigadores científicos ver objetos en 1000 veces su tamaño original. Como se verá, el microscopio de luz opera a través de algunos principios muy básicos pero tiene aplicaciones casi ilimitadas para la visualización de las muestras en el laboratorio.

Como su nombre lo indica el microscopio de luz requiere una fuente de luz, que produce la luz que puede ser enfocada por un lente condensador, en la muestra.

La luz que ilumina al espécimen llega a una lente de la lente del objetivo, que crea una imagen ampliada que es invertida o al revés. El ocular o lente ocular, más aumenta la imagen, que recibe el ojo. Elementos ópticos pueden introducirse en la trayectoria de la luz a la derecha de la imagen, por lo que el ojo lo ve en la orientación correcta. Microscopios que utilizan lentes múltiples como el que ves aquí se denominan microscopios compuestos.

En un microscopio compuesto, el aumento total se calcula multiplicando la magnificación del objetivo por el aumento del lente ocular u ocular. Con un objetivo de 40 X y una lente ocular de 10 X, el aumento total es 400 X.

Puede utilizar ayudar a estimar el tamaño de los objetos bajo el microscopio, una retícula de ocular, una escala que se proyecta sobre la imagen. A mayor aumento, las marcas de graduación en la retícula de ocular representará a distancias más pequeñas, que cuando vieron el menor aumento.

Además de la ampliación, otro aspecto de la óptica del microscopio es la resolución. Resolución se refiere a la distancia más corta puede ser resuelto entre dos objetos en el ámbito de aplicación. Como las cabezas de estos personajes se convierte cada vez más clara, y la resolución aumenta, disminuye la distancia observable más corta entre ellos.

Los principales componentes del microscopio de luz incluyen los objetivos, los oculares, la platina y mordazas, la fuente de luz, el diafragma de campo, el condensador y diafragma y las perillas de enfoque grueso y fino.

Los objetivos son responsables de la mayor parte de la ampliación y la resolución del microscopio. Se montan en un portaobjetivo giratorio de tal manera que como se cambian los objetivos, el plano focal mantiene igual – una propiedad denominada parafocality. Un objetivo puede ser marcado con la ampliación, la aperature numérico, o N.A., el tipo de medio de inmersión requerida, el espesor de los cubreobjetos que debe utilizarse en el montaje de las muestras, y la distancia de trabajo, la distancia desde la punta del elemento objetivo el plano focal de la muestra.

La apertura numérica, una vez más, definida como N.A., es una medida de qué tan bien un objetivo de microscopio puede recolectar luz. Objetivos de N.A. alta permiten que la luz en ángulo oblicuo para pasar a través mientras que N.A.objectives bajo la luz más directa. La resolución de un objetivo se puede calcular de la abertura numérica, dada la longitud de onda de la luz.

La fuente de luz, diafragma de campo, diafragma y condensador son responsables de producir la luz y entregarlo a la muestra.

La fuente de luz suele ser una lámpara halógena de bajo voltaje que puede ajustarse para controlar la intensidad de la luz.

La luz pasa a través de una variedad de filtros y en el diafragma de campo, que controla el área de la muestra al ser iluminada.

El siguiente es el condensador, que se centra brillante, la luz sobre el espécimen, el cono de iluminación alrededor de la muestra es controlado por el condensador y debe ajustarse según el objetivo que se utiliza.

Para comenzar a utilizar el microscopio de luz, coloque una muestra que contiene la región de interés en la platina del microscopio, Centre directamente sobre el objetivo y asegurela en su lugar con los clips de la etapa.

A continuación, encienda la fuente de luz y cambiar al objetivo de menor potencia.

A continuación, centrar el objetivo de potencia baja moviendo en la dirección z con un ajuste inicial de la perilla de ajuste grueso y luego girar las perillas de ajuste fino para el objeto en foco agudo. Tenga cuidado de no para golpear la diapositiva o la etapa con el objetivo ya que podría dañar la lente.

Busque el área de interés mirando a través de los pedazos del ojo mientras ajusta los mandos para mover la diapositiva en la x y y direcciones. El tamaño del campo de visión disminuye drásticamente al mover de una ampliación baja, a mayor aumento.

Centrado el objetivo menor potencia en el área de interés antes de trasladarse a mayor potencia grandemente aumenta las posibilidades de encontrar a la pieza deseada.

Una vez que la muestra se ha situado a baja potencia y está en foco, hacia el objetivo mayor de energía que se utilizará para adquirir imágenes.

Optimizar la calidad de la iluminación mediante el primer ajuste el diafragma de campo para que el diafragma sí mismo es a las afueras del campo de visión.

A continuación, ajuste el diafragma del condensador para que la configuración coincide con la apertura numérica del objetivo en uso.

Por último, ajustar el foco otra vez. Esta vez sólo con la perilla de ajuste fino.

Ahora estás listo para tomar imágenes de su muestra.

Microscopía de luz tiene el potencial para visualizar una amplia gama de muestras, y varias configuraciones del microscopio compuesto existe para adaptarse a diversas aplicaciones.

Aquí, ves un investigador prepara para trabajar bajo un microscopio quirúrgico. Estos microscopios son generalmente suspendidos sobre un brazo móvil y se estereoscópica, lo que significa que ellos permiten que la luz pase al espectador y también una cámara montada en el microscopio. Este microscopio quirúrgico se está utilizando en un procedimiento de trasplante de riñón, en ratones.

En este clip, puede ver un investigador mirando a través de un microscopio de disección, mientras a las larvas de drosophila perfecto para seguir la disección, con el fin de exponer los músculos de la pared del cuerpo por lo que se puede estudiar la Unión neuromuscular.

Aquí puede ver un microscopio invertido de compuesto, que tiene como objetivo a continuación de la etapa, está preparado para una técnica de microinyección. Este procedimiento, conocido como transferencia nuclear de células somáticas, es un método importante para generar animales transgénicos y crear clones.

Sólo ha visto JoVE' Introducción a la microscopía de luz.

En este video repasamos: lo que un microscopio es y cómo funciona, sus muchos componentes, cómo realizar ajustes en ellos y cómo adquirir imágenes de calidad. ¡Gracias por ver!

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